1株枯草芽胞杆菌体外拮抗6种肠道致病菌的研究

目的研究枯草杆菌BS-3株对大肠埃希菌等6种肠道致病菌的拮抗作用。方法通过在体外BS-3菌株分别与大肠埃希菌等6种致病菌混合培养后,观察不同时间内各菌的菌量变化。结果BS-3菌株与6种肠道致病菌混合培养24、48、72和96h,其菌量逐渐增加;6种致病菌的菌量随着培养时间延续逐渐减少,其中产毒性大肠埃希菌、致病性大肠埃希菌和宋内志贺菌与对照组比较差异更明显。结论BS3菌株在培养生长过程中,可抑制大肠埃希菌等6种肠道致病菌的生长。     

抑菌生抗大鼠烫伤创面金葡菌感染的实验研究

将大白鼠致成10％的Ⅲ°烫伤,创面涂金黄色葡萄球菌造成感染的动物模型,然后分别值入BS_(224)菌制剂及磺胺嘧啶银霜(AG—SD),经痂下、肺、肝及心血细菌定量培养,进行对比分析。结果显示,抑菌生是强有力的生态抗菌制剂,对金葡菌具有较强的防治感染效果,疗效优于AG—SD。     

幽门螺旋菌在双相培养基中生长特性的研究

本文观察了幽门螺旋菌在固体及液体—固体双相培养基上生长的特性,37℃72小时培养后,定量实验表明,固体培养基上菌数为1.02×10~2cfu/ml,而双相培养基上则为1.14×10~4cfu/ml;用血液双相培养基,对CP进行了生长曲线的测定,从0小时加入1.02×10~2cfu/ml开始,按每天平皿活菌计数,共5天(24、48、72、96、120、144h)分别为2.5×10~2cfu/ml,4.97×10~2cfu/ml,1.14×10~4cfu/ml,1.24×10~5cfu/ml,2.87×10~5cfu/ml,9.75×10~4cfu/ml以后逐日下降;液相培养液24—144小时pH测定,pH由7.2下降至6.4—6.9。     

枯草杆菌BS_(224)菌体外拮抗试验

为了探讨枯草杆菌BS_(224)菌对烧伤创面感染的几种常见致病菌的拮抗效应,我们分别将BS_(224)菌与金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌及大肠杆菌的对数生长期的菌,按等量比例混合于肉汤管内,经28℃不同时间的培养和菌落计数后进行统计分析。结果显示BS_(224)菌对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌及大肠杆菌在体外均有极显著拮抗作用。     

缺血性心脏病患者血清对血管内皮细胞增殖的影响

目的:探讨不同阶段缺血性心脏病患者血清对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖的影响。方法:采集正常健康人群组(A组)、缺血性心脏病高危人群组(B组)、缺血性心脏病急性期患者组(C组)、缺血性心脏病稳定期患者(D组)的血清,分别作用于人脐静脉血管内皮细胞不同时间,通过MTT比色法,检测细胞的生长抑制率,观察其对HUVEC增殖的影响。结果:四组血清处理HUVEC 24、48、72、96小时后,B组、C组和D组的细胞生长抑制率均显著低于A组(P0.05),且C组和D组24小时的生长抑制率显著低于B组(P0.05),D组48、96小时显著低于B组(P0.05),D组96小时显著低于C组(P0.05)。随着观察时间的延长,A、B、C组患者血清的促增殖作用逐渐增强,48 h、72 h和96 h的生长抑制率均显著低于同组24 h(P0.05);A组患者血清培养至96 h,生长抑制率与同组48 h比较显著降低(P0.05)。结论:从高危患者发展至缺血性心脏病,以及心血管疾病在度过急性期后,随着病程和生存期的延长,其血清对细胞的促增殖作用逐渐增强。     

细菌鞭毛染色菌龄初试

细菌鞭毛染色的适宜菌龄,一般在10—24小时之间,但在实践中发现,不同种细菌染色菌龄有不同特点。普通变形菌、铜绿色假单胞菌和大肠埃希氏菌都是无芽孢菌,因而不会由于产生芽孢而使鞭毛脱落,所以染色菌龄较长,从4小时开始,到24、48、72小时均可进行染色,结果也比较理想。可见,这几株菌的鞭毛染色几乎不受菌     

氨氮和亚硝酸盐对红螯螯虾幼虾和亚成虾的急性毒力

【目的】近年来,红螯螯虾养殖面积越来越广泛,明确不同规格的红螯螯虾对氨氮和亚硝酸盐的耐受力,有利于提高其养成率,促进其养殖业的健康发展。【方法】在水温24~25℃、p H 7.9~8.0的条件下,研究了氨氮和亚硝酸盐对红螯螯虾幼虾和亚成虾的急性毒性,分析半致死浓度(LC50)和安全浓度(SC)。【结果】总氨氮对红螯螯虾幼虾的24、48、72和96 h LC50分别为188.0、136.15、104.67和88.00 mg·L~(-1),SC为8.80 mg·L~(-1);总氨氮对亚成虾的24、48、72和96 h LC50分别为344.01、270.46、205.15和167.68 mg·L~(-1),SC为16.77 mg·L~(-1);非离子氨对幼虾的24、48、72和96 h LC50分别为10.16、7.35、5.65和4.75 mg·L~(-1),SC为0.48 mg·L~(-1);非离子氨对亚成虾的24、48、72和96 h LC50分别为18.58、14.60、11.08和9.05 mg·L~(-1),SC为0.91 mg·L~(-1);亚硝酸盐对幼虾的24、48、72和96 h LC50分别为46.76、33.88、27.97和22.81 mg·L~(-1),SC为2.28 mg·L~(-1);亚硝酸盐对亚成虾的24、48、72和96 h LC50分别为77.56、59.33、45.41和37.48 mg·L~(-1),SC为3.75 mg·L~(-1)。【结论】红螯螯虾对氨氮的耐受力高于亚硝酸盐,亚成虾对氨氮和亚硝酸盐的耐受力高于幼虾。     

两种新型农药对斜生栅藻（Scenedesmus obliquus Kuetz．）的毒性研究

LY-04和WSQIF是由华中师范大学农药所合成的两种新型有机磷农药,LY—04属于α-氧代膦酸衍生物,WSQIF属于芳氧基乙酰氧基烃基膦酸脂。选用斜生栅藻(Scenedesmus obliquus Kuetz．)作为实验生物,通过显微计数测定藻细胞的密度以计算LY—04和WSQIF对斜生栅藻24h、48h、72h、96h的半效应抑制浓度(EC50),研究其对斜生栅藻的毒性效应。结果表明：以丙酮为溶剂时,每隔24h取样,测得LY—04对斜生栅藻的48h、72h、96h的ECs。值分别为2942．5mg／L、239．7mg／L和65．0mg／L,而WSQIF的24h、48h、72h、96h的EC5。值分别为15．9mg／L、53．0mg／L、98．0mg／L和28．8mg／L。LY—04和WSQIF分别作为杀虫剂和除草剂而研制,经活体研究表明,LY—04具有较强的杀虫活性,WSQIF则具有很强的除草活性,所得EC50。值基本符合设计结果。根据毒性分级标准,LY—04和WSQIF的EC50。值远大于3mg／L,其对非靶生物中的水生藻类都属于低毒,可推广应用。     

日本沼虾幼虾对碱度和pH的适应性

采用急性毒性实验法,研究日本沼虾（Macrobrachium nipponense）对碱度和DH的适应能力,探讨内陆盐碱水域养殖的可能性。结果表明,pH对幼虾的24、48、72、96h半数致死值分别为10．13、9．72、9．67和9．51,安全与适应范围分别为5．26～8．67、5．10～8．84。碱度对幼虾的24h半数有效浓度为17．96mmol／L,95％置信限14．60—22．53mmol／L;24、48、96h半数致死浓度分别为48．95、45．15和44．96mmol／L,95％置信限分别为45．72～50．60、39．46～51．67及34．34～55．38mmol／L,安全碱度11．52mmol／L。结果表明,在pH≤9．0、碱度≤20．0mmol／L的内陆盐碱水域,可以养殖日本沼虾。     

温度、pH和盐度对后背鲈鲤幼鱼存活的影响

为了研究后背鲈鲤(Percocypris pingi retrodorslis)对温度、pH和盐度的耐受性, 以后背鲈鲤幼鱼为实验材料, 采用单因子静态急性毒性实验法对其温度、pH和盐度耐受能力进行研究。实验结果表明, 后背鲈鲤幼鱼对温度的耐受范围为0—32℃, 高温、低温的半致死温度分别为32℃和1℃, 最佳生长温度为8—27℃; 96h内, 最佳生长pH为5.0—9.0, pH高于9.5或者低于4.7时, 幼鱼出现死亡, 在24、48、72、96h里, 不同碱度对幼鱼存活率的影响呈现显著性差异(P<0.05), 而不同酸度对幼鱼存活率的影响差异性不显著(P>0.05), 24、48、72、96h酸度半致死浓度(LC₅₀)相应pH分别为3.90、3.96、4.15、4.40, 碱度半致死浓度相应的pH分别为11.20、11.10、10.98、10.89。96h内, 当盐浓度超过7.50 g/L时, 幼鱼开始死亡, 不同盐浓度对幼鱼的存活率的影响呈现显著性差异(P<0.05), 盐度对实验鱼的 12、24、48、72、96h的半致死浓度分别为10.30、9.25、9.00、8.85、8.82 g/L, 2个级别的安全浓度(SC)分别为0.882 g/L、2.557 g/L。后背鲈鲤已被列入珍稀濒危物种, 研究为今后后背鲈鲤的人工养殖和跨地域养殖打下理论基础。     

辣椒内生细菌BS-1和BS-2在植物体内的定殖及鉴定

以抗利福平为标记,用浸种、涂叶和灌根方法接种,测定菌株在植物体内的定殖。结果表明,来自辣椒体内的BS_2和BS_1菌株不仅可在辣椒体内定殖,也可在番茄、茄子、黄瓜、甜瓜、西瓜、丝瓜、小白菜等植物体内定殖,BS_2菌株还可在水稻、小麦及豇豆等植物体内定殖,BS_2菌株的内生定殖宿主范围比BS_1菌株的广;另外BS_2菌株可在辣椒和白菜体内较长期定殖。用常规方法、Biolog及16S rRNA序列比较,两菌株鉴定为枯草芽杆菌内生亚种（Bacillus subtilis subsp. endophyticus）。     

中蜂抗菌物质的诱导

本文报道了用大肠杆菌注射处理中蜂Ａｐｉｓ ｃｅｒａｎａ Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ后,用含菌培养基平板测活法,就中蜂抗菌物质的产生规律及抗菌活性进行了初步研究。结果表明,不同诱导源均可诱导中蜂产生抗菌物质,但诱导的抗菌物质的抗菌活性则有一定的差异。用大肠杆菌重复诱导则使中蜂的成活率和抗菌物质的抗菌活性有很大提高。注射大肠杆菌后冲蜂抗菌物持产生高峰在４８小时左右。诱导后产生的抗菌物质具有广谱性,对大肠杆菌Ａｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ、枯草芽孢杆菌 Ｂａｃｉｌｌｕｓ　 ｓｕｂｔｉｌｉｓ、苏云金杆菌 Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇ－ｉｅｎｓｉｓ、巨大芽孢杆菌 Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｍｅｇａｔｈｅｒｉｕｍ、黑腐菌 Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ　等均有抑菌作用,而对真菌白僵菌Ｂｅａｕｖｅｒｉａ　ｂａｓｓｉａｎａ未发现抑菌作用。中蜂麻醉方法以冷冻法最为简便、易行。     

南极抗细菌活性菌株的筛选及系统发育分析

分别以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、青枯假单胞菌、绿脓假单胞菌和苏云金芽孢杆菌为指示菌,采用琼脂扩散法对实验室保存的580株极地细菌进行了抗菌活性菌株的筛选与活性验证,从中筛选出4株对上述指示菌株具有明显抗菌效果的活性菌株,其编号分别为97、Z11、Z18及Z19,并对其生长曲线、抗菌活性曲线和系统发育地位进行研究。结果表明,4株菌均在培养24 h后进入指数生长期,菌株97在培养48 h后达到稳定期,而菌株Z11、Z18及Z19在培养60 h后达到稳定期。抗菌活性分别在培养84、96、72和72 h时达到最高。系统发育分析表明,该4株菌分别属于伦黑墨氏菌属(Rheinheimera)、嗜冷杆菌属(Psychrobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)和嗜冷杆菌属(Psychrobacter)。     

Differential utilization of pyrene as the sole source of carbon by Bacillus subtilis and Pseudomonas aeruginosa strains: role of biosurfactants in enhancing bioavailability

AIMS: Our goal is to compare the efficiency of utilization of pyrene as the sole source of carbon for growth and energy by two nonactinomycetous groups of bacteria viz., Bacillus subtilis DM-04 and Pseudomonas aeruginosa mucoid (M) and nonmucoid (NM) strains, isolated from a petroleum-contaminated soil sample of north-east India. METHODS AND RESULTS: Bacillus subtilis DM-04 and P. aeruginosa M and NM bacterial strains were capable of secreting biosurfactant in the culture medium while growing on pyrene and their pyrene utilizing efficiency was demonstrated by correlating the bacterial growth in the presence of pyrene as the sole source of carbon along with a concomitant decrease in pyrene content from the culture medium with respect to time. The biosurfactant secreted by the respective bacterial strains enhanced the apparent solubility of pyrene by factors of 5-7 and influenced the bacterial cell surface hydrophobicity resulting in higher uptake and utilization of pyrene by bacteria. The growth of B. subtilis DM-04 and P. aeruginosa M and NM strains at the expense of pyrene after 96 h showed an assimilation of about 48.0 +/- 1.1% (mean +/- SD) and 32.0 +/- 0.6% (mean +/- SD) of pyrene carbon, respectively, showing differences in metabolism of pyrene by these bacterial strains. CONCLUSIONS: Bacillus subtilis DM-04 strain exhibited higher utilization and cellular assimilation of pyrene compared with P. aeruginosa M and NM strains. Further, the biosurfactants produced by the bacteria under study are capable of enhancing the solubility of pyrene in aqueous media and can influence the cell surface hydrophobicity of the biosurfactant-producing strains that results in a higher uptake of pyrene. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: It may be suggested that the bacteria used in this study are suitable candidates for practical field application for effective in situ bioremediation of pyrene-contaminated sites.     

一株产碱性蛋白酶芽孢杆菌的筛选、鉴定及应用初探

为了筛选碱性蛋白酶产生菌并探讨其对蛋白质饲料的发酵效果,以肉粉厂表层土壤为菌株分离源,利用脱脂牛奶培养基分离和纯化蛋白酶产生菌,通过形态特征、生理生化和16S rRNA基因序列分析确定菌株的分类地位,并采用L9(33)正交设计研究筛选出的优势菌种的接种量(3％、6％和12％)、种子液培养时间(12 h、24h和48 h...     

Display of alpha-amylase on the surface of Lactobacillus casei cells by use of the PgsA anchor protein, and production of lactic acid from starch

We developed a new cell surface engineering system based on the PgsA anchor protein from Bacillus subtilis. In this system, the N terminus of the target protein was fused to the PgsA protein and the resulting fusion protein was expressed on the cell surface. Using this new system, we constructed a novel starch-degrading strain of Lactobacillus casei by genetically displaying alpha-amylase from the Streptococcus bovis strain 148 with a FLAG peptide tag (AmyAF). Localization of the PgsA-AmyA-FLAG fusion protein on the cell surface was confirmed by immunofluorescence microscopy and flow cytometric analysis. The lactic acid bacteria which displayed AmyAF showed significantly elevated hydrolytic activity toward soluble starch. By fermentation using AmyAF-displaying L. casei cells, 50 g/liter of soluble starch was reduced to 13.7 g/liter, and 21.8 g/liter of lactic acid was produced within about 24 h. The yield in terms of grams of lactic acid produced per gram of carbohydrate utilized was 0.60 g per g of carbohydrate consumed at 24 h. Since AmyA was immobilized on the cells, cells were recovered after fermentation and used repeatedly. During repeated utilization of cells, the lactic acid yield was improved to 0.81 g per g of carbohydrate consumed at 72 h. These results indicate that efficient simultaneous saccharification and fermentation from soluble starch to lactic acid were carried out by recombinant L. casei cells with cell surface display of AmyA.     

片烟产果胶酶细菌的鉴定及酶活测定

以果胶为碳源, 对津巴布韦片烟烟叶表面产果胶酶细菌进行分离, 采用16S rDNA限制性酶切片段长度多态性分析(ARDRA)和测序方法, 结合形态学、生理生化实验, 对所分离产果胶酶菌株进行鉴定, 同时研究培养时间、温度、起始pH、接种量对菌株产酶的影响。结果表明, 从津巴布韦片烟烟叶表面分离得到的产果胶酶菌株主要为芽孢杆菌属的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis和产碱菌属的粪产碱菌Alcaligenes faecalis。在所分离的菌株中, 枯草芽孢杆菌T10酶活力最高, 以6%的接种量, 在温度为35 °C、起始pH为7.5条件下培养48?56 h, 其果胶酶酶活为571 U/mg, 聚半乳糖醛酸裂解酶酶活为297 U/mg。     

烧烫伤创面感染的小鼠模型构建

目的探讨一种简单、稳定的烧烫伤创面感染的小鼠模型构建方法,以便进行相关烧烫伤创面修复研究。方法取30只BALB/c小鼠,采用自制木质烫伤板,沸水浴法烫取直径8 mm的圆形创面,烫伤时间分别为5 s、10 s、15 s。伤后48 h,取创面组织进行HE染色观察,筛选最佳创面烫伤时间。另取72只小鼠制成深Ⅱ度烫伤创面,采用擦刮法分别接种20μL菌浓度为1×106、l×107、1×108CFU/mL金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC 25923的菌液。接种细菌后72 h,取创面组织HE染色观察创面炎症反应情况,并测定3、7、14 d的皮肤菌负荷,筛选最佳的细菌接种浓度。最后,按最佳条件建模后,观察创面的完全愈合时间以及创面愈中、愈后的组织学变化,以确定此创面感染模型是否建立成功。结果组织学结果表明,10 s为深Ⅱ度创面的理想致伤时间,最佳接种菌浓度为l×108CFU/mL,此时期,14 d内菌负荷均高于l×105CFU/g。该模型的创面愈合时间(21±0.95 d)较正常创面愈合时间(15.92±0.34 d)明显延长(P<0.01),炎性反应明显,愈后不佳。结论烧烫伤创面感染的小鼠模型构建成功,可作为感染创面防治研究的实验动物模型。     

高产表面活性素的重组枯草芽孢杆菌构建及培养优化

表面活性素是一种新型生物表面活性剂,因其具有良好的表面活性、可生物降解及抗菌活性,在石油开采、医药、农业和食品化妆品等领域具有广阔的应用前景。高产表面活性素菌株的获得和发酵过程优化是其商业化生产的关键。文中考察了脂肪酸合成途径对表面活性素合成的影响,强化脂肪酸生物合成关键基因以及该途径全部基因分别构建了高产表面活性素枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis THBS-2和THBS-8,并对发酵过程中氨基酸种类及添加量、诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 (IPTG) 添加时间和添加量等条件对产物合成的影响进行考察,获得优化的两阶段前体添加方案：发酵3 h,加入IPTG和L-亮氨酸,使其终浓度分别为1.25 mmol/L、5 g/L;发酵24 h,添加L-亮氨酸 (终浓度5 g/L) 和浓缩培养基5 mL。优化条件下,枯草芽孢杆菌THBS-2摇瓶发酵48 h,表面活性素产量高达24 g/L;30 L发酵罐中发酵68 h,产物产量最高达到34 g/L。研究结果为表面活性素的工业化生产及应用奠定基础。     

学生食堂餐厨垃圾中淀粉的生物利用菌株筛选

目的探索地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌分解大学生食堂厨余中淀粉的能力,以筛选和研制餐厨垃圾生物降解的使用菌种。方法将各菌种接于淀粉酶试验培养基,培养后滴加碘溶液,观察透明圈,判定产淀粉酶能力;收集大学生食堂的厨余,观察三种细菌在不同接种量（5%、10%、15%、20%、25%）、不同接种时间（24 h、48 h、72 h）及不同菌株配伍方式下发酵淀粉的能力。结果地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌都能产生淀粉酶,以地衣芽胞杆菌产生的淀粉酶较多,其次为枯草芽胞杆菌,蜡样芽胞杆菌较少,三种细菌分解厨余中淀粉的最佳接种量都为15%-20%,最佳发酵时间为48 h,枯草芽胞杆菌和地衣芽胞杆菌各7.5%的接种量混合配伍发酵效果最佳。结论可采用枯草芽胞杆菌和地衣芽胞杆菌各7.5%的接种量混合配伍发酵学生食堂的厨余中的淀粉。