放射免疫测定法

放射免疫测定(Radioimmunoassay,简称RIA)是六十年代发展起来的一种体外分析新技术。它综合了放射性同位素的灵敏性与抗原-抗体反应的特异性两大优点,因此样品(如血、尿)无需提纯,而且能检出毫微克甚至微微克量的待测物质     

寡核糖核苷酸中核苷酸顺序的萤光标记微量测定法

核糖核酸(RNA)一级结构的研究,近年来有很大的进展。测定方法一般有两种:(1)紫外吸收法,此法灵敏度较差,RNA用量大;(2)放射性同位素标记法,如使用无机~(32)P在生物体内标记RNA,然后提取。~(32)P标记的RNA,用放射化学方法测定之。此法灵敏度高,用很少量RNA就可以测定其一级结构。但是,由于~(32)P的半衰期较短,此法比较     

揭开地衣中的共生奥秘(二)

地衣的光合作用及耐旱能力 在本世纪60年代,D.C.Smith等人利用放射性同位素示踪技术证实:光合共生物通过光合作用固定的~(14)C被以小分子碳水化合物的形式转移到共生菌,被转移的~(14)C约占标记总数的80％。不同的光合共生物转移的物质有所不同,其中共生蓝细菌转移葡萄糖(见图2);共生藻类则从大的胞内贮库中转运多元醇,多元醇的种类因藻类属的不同而异。如:共球藻属和粘梭藻属(Coccmyxa)转移核糖醇;裂丝藻     

检测脂肪酸化胰岛素放射免疫分析方法的建立

目的:建立一种高灵敏度、高特异性、操作简单快捷的放射免疫分析法(RIA),用于检测比格犬血浆中的脂肪酸化胰岛素。方法:所用试剂盒主要以豚抗胰岛素抗体为主要特异性试剂,利用均相竞争抑制原理,采用平衡竞争法对比格犬血浆进行直接测定。在该系统中加入未标记的标准品或样品,则标记抗原和非标记抗原将竞争有限且定量的抗体结合位点。结果:建立了检测脂肪酸化胰岛素的RIA法并进行了确证,方法的线性范围为3.125~800μU/mL,最低检测限为3.125μU/mL,批内和批间精密度分别为4.5%~7.0%和3.9%~7.6%,冻融稳定性和稀释稳定性等良好。结论:方法学确证结果表明,本研究建立的脂肪酸化胰岛素RIA检测方法符合新生物制品临床前药代动力学研究指导原则要求,可用于脂肪酸化胰岛素在临床前药代动力学试验的检测。     

五种乙型肝炎放射免疫药盒的研制和中试生产

核素~(125)I标记在抗体或抗原后,成为标记抗体或标-记抗原。这种标记抗体或标记抗原,仍然具有与特异性抗原或抗体相结合的免疫学特性,形成一种标记的免疫复合物。     

生物大分子的非放射性标记

无论是克隆植物基因还是研究基因表达都离不开探针的标记和检测。历来所用的放射性同位素标记方法存在一些缺点。一是要预防核辐射对人体的损伤,操作不方便;二是为防止污染环境,必须谨慎地处置放射性废弃物;三是放射性标记的探针使用时间短,例如最常用的~(32)P半衰期仅14.3天,标记的探针要随时标记随时使用,放置不用则放射性随时间指数下降。为     

蛇毒神经毒素的放射性碘化标记

目前,生物科学的发展非常迅速,随着对各种生物大分子的深入研究,放射性同位素标记技术显得更为重要,几乎所有的生命科学都涉及到这一技术的应用。蛇毒神经毒素是一种小分子量蛋白质,用~(125)I标记后可作为研究烟碱受体的一种示踪物。碘化掺入蛋白质目前使用得最多的方法是氯胺T法,氯胺T碘化标记     

一种测量细胞面积的显微光度方法

细胞生物学研究中广泛应用显微分光光度计测定单个细胞中特定物质的含量。通常在测含量的同时还要求获得单个细胞内此种物质分布的面积。对形状规则的被测物质,一般常用目镜测微尺测出长度,再算出面积。但这种方法不仅费时,费力,而且不适于测量形状不规则的单个细胞。我们在采用双区法,在测量物质含量的同时,可以很方便地测出不规则形状细胞內被测物质所占的面积。显微分光光度计测量物质含量的方法中常用的有两种——双区法和双波法。在公式推导中有一项被测物面积:B(1-F),其中(1-F)是测量光阑面积中含有被测物部份所占的百分数,B是测量光阑面积。在双区法中(1-F)=(1-T)/(1-T~*)(其中T~*是测量     

用低放射性强度131I与198Au标记家白蚁的试验

近十多年来,利用放射性同位素~(131)I、~(198)Au标记法研究白蚁的活动规律、危害范围以及示踪探巢等多有报道,但一般使用的放射性强度比较大,为数个至十多个毫居里(mc),弊病较多。为此开展了用低放射性强度微居里(μc)级的~(131)I和~(198)Au标记家白蚁(Coptotermes formosanus Shiraki)的试验研究。结果表明,使用放射性同位素~(131)I和~(198)Au5O—150μc标记诱集箱内的白蚁,即可达到上述研究和防治家白蚁的目的。     

讨论一种放射免疫测定的标准曲线——T/B～[Ag]直线方程

放射免疫测定已发展成为临床化学、生物化学及其他许多学科的重要测试手段,关于放射免疫反应过程虽已有些描述,但所述反应过程的免疫化学含意还有待进一步阐明。在常规放射免疫测定中,人们可以发现取[Ag]对T/B作图时(Ag为外加的非标记抗原,T为标记抗原总脉冲数,B为被结合标记抗原的脉冲数),可以得到一条很好的直线,但对其内在联系却了解很少。本文试图探讨这一直线方程内各参数的内在联系,并对其应用进行了讨论。     

昆虫的标记研究法

在昆虫学技术中,采用标记方法,可以研究昆虫的迁移、越冬、定向、扩散速率、寿命、配偶行为、蜕皮次数、活动范围、寄主更换、传播毒病、捕食现象和寄生现象等一系列的生态学和生物学问题。此外,利用标记方法,还可以推算在一定时间和一定地点的昆虫种群的数量,因此,长时期以来,这种方法,一直受到人们的重视。 标记昆虫的方法很多,但大体上可以归纳为五类,即畸志标记、符签标记、油漆与染料标记、萤光物质标记和放射性同位素标记。在这些标记方法中,畸态标记和符签标记,一次操作,只能使个别昆虫带上标记符号,因此它们只是一种个体标记方法。相反地,如果一次操作,能给大量昆虫带上标记符号,就是群体标记方法。油漆与染料标记、萤光物质标记和放射性同位素标记,既可应用于个别昆虫,又可应用于昆虫的群体,因此,它们既是一种个体标记方法,又是一种群体标记方法。实际上,在现代昆虫学的研究中,有些标记方     

酶标抗原火箭免疫电泳法及其在蛇毒抗原成分含量测定中的应用

为解决目前蛇毒成份检测困难以及寻找一种可用于蛇伤快速鉴别诊断的方法,本研究建立了酶标抗原火箭免疫电泳法。本法结合了酶标法灵敏度高和火箭电泳操作简单的特点,对待测的同种抗原标记辣根过氧化物酶(酶标抗原),检测时把微量的酶标记抗原掺入被测样品中,在含多价抗血清的免疫电泳板进行电泳。最后用辣根过氧化物底物3.3′-二氨基联苯胺在板上直接显色,显色后观察到的免疫沉淀线高度与被测抗原含量呈正相关(r=+0.98)。采用本方法检测眼镜蛇毒细胞毒素和限镜王蛇毒 L-氨基酶氧化酶,细胞毒素的最低检测浓度为110ng/ml,氨基酸氧化酶为60ng/ml。比单向火箭免疫电泳法灵敏度高30倍。用同一原理的酶标记抗原融合电泳法监测L-氨基酸氧化酶的层析分离时,比酶活性法检测灵敏度高20倍。全部检测只需30分钟。初步观察商品眼镜蛇毒抗血清可对蛇毒15种成分产生免疫沉淀线,眼镜蛇的细胞毒与同科异科蛇毒的细胞毒素无交叉免疫反应。因此,采用本法可以确定不同蛇种蛇毒中所含的特异性抗原,获得蛇伤鉴别诊断的依据。     

胡蜂抗原5的研究进展

胡蜂抗原 5 (Ag5 )是胡蜂毒液中的一种主要变应原 ,对胡蜂过敏病人有变态反应作用。它一般由约 2 0 4个氨基酸残基组成 ,分子量约为 2 3kDa。不同的抗原 5之间有抗原交叉反应活性 ,且活性大小不同。它的cDNA已被克隆 ,并以融合蛋白的形式在大肠杆菌中进行表达。但Ag5的生物功能至今还不清楚。由于Ag5有抗原交叉反应活性 ,因此可将其用于免疫治疗。此外 ,Ag5还可用于植物病虫害防治     

细胞培养中的支原体污染问题(续)

6.放射性同位素自显影方法可用~(?)H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷或尿嘧啶核苷自显影实验检查支原体的污染。此法的简单原理是:无污染的正常细胞在S期(DNA合成期)可摄取大量的胸腺嘧啶脱氧核苷到细胞核中。而当细胞被污染后,培养液的胸腺嘧啶脱氧核苷被支原体的嘌呤嘧啶核苷磷酸化酶     

细菌脂多糖被体外培养的牛白细胞的吸收和降解

本文报告了体外培养的牛白细胞对放射性同位素氚标记的E.coli 112 LPS(简称E.coli 112~3H—LPS)的吸收和降解。实验证实:S型~3H—LPS (Smooth)比R型~3H—LPS(Rough)更容易被牛白细胞吸收和降解,同时也发现经抗LPS IgG调理的S—LPS可大量的被细胞吸收。用HCl—Hexane提取反应物中~3H—Fatty Acid,用Thin layer chromatography(TLC)实验(Petrom Ether:Ether:Aciti 70:30:2)分析~3H—代谢产物,结果表明,从LPS中至少降解出2种~3H—Fatty Acid,Rf值分别为0.6和0.3,说明牛白细胞含有一种或几种能够降解LPS的酶。     

应用T/B～[Ag]线性方程式求抗原决定簇数目

本文根据作者曾报道的放射免疫定量测定的线性方程式T/B=(n[~*Ag]_0)/(2[Ab]_0) n/(2[Ab]_0)[Ag]_■,采用经改良过的放射对流免疫定量电泳法,可在较短的时间内直接测定出抗原参加免疫化学反应的平均抗原决定簇数目n。实验测得猪胰岛素n_(InS)=1.5,人血清白蛋白n_(HSA)=16,人甲胎蛋白n_(FP)=6,乙型肝炎病毒表面抗原n_(HBsAg)=145。并对所测得的n 值结合各自的物理化学性质进行了讨论。     

用生物素标记的葡萄球菌蛋白A(SPA)检测日本脑炎抗体

<正>自从亲和素和生物素特异性相互反应由Guesdon(1979)引入ELISA以来,此方法已被广泛采用为一种有用的技术,以检测和定量免疫球蛋白或抗原。用生物素标记的抗猪免疫球蛋白(Ig)抗体,结合酶标记亲和素结合物的ELISA,也已成功用到作者     

两种甲型肝炎病毒抗原快速检测方法的建立

目的建立两种甲型肝炎病毒抗原(HAV-Ag)检测试剂盒,并对其检测效果进行评价。方法生物素标记甲型肝炎病毒抗体(HAV-Ab)与辣根过氧化物酶标记亲和素联合应用建立甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法;同时使用辣根过氧化物酶标记HAV-Ab作放大系统建立双抗体夹心甲型肝炎病毒抗原ELISA检测试剂,对比两种检测方法的特异性、灵敏度及实际应用效果。结果用生物素标记甲型肝炎病毒抗体-辣根过氧化物酶标记亲和素作放大系统建立的甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法,较双抗体夹心ELISA检测方法灵敏度高1～2个稀释度;两种检测法均对10余种病毒无交叉,P/N值BA-ELISA检测法较高。结论甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法是一种灵敏度高,特异性好,方便快捷的检测方法,可广泛应用于甲型肝炎病毒研究及临床检测中。而甲型肝炎病毒抗原双抗体夹心ELISA检测法,检测灵敏度适中,操作简单,更适用于甲肝疫苗生产检定。     

表面增强拉曼光谱在DNA检测中的应用

随着光学技术的发展,表面增强拉曼光谱(SERS)作为一种新兴的技术被逐渐应用于生物医学领域。SERS波谱作为一种振动波谱,能够反应被测物质的内部信息,具有指纹识别特征;具备高灵敏度、高效能的特点,且能实现复合样本的同时测定;带标记的SERS技术能进一步提高SERS检测的特异性。目前SERS技术已被广泛用于体内外DNA、蛋白分子的检测,为生物分子的分析检测提供了一种崭新、高效的手段。     

用酶联免疫吸附试验检测肉毒毒素

<正>近年来建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)给肉毒毒素的快速检测增加了一项重要的手段。某些酶既可结合于抗原(如竞争性酶联免疫吸附试验中的毒素),也可结合于抗体(如爽心法酶联免疫吸附试验中的IgG)。考虑到肉毒毒素是一种强毒物质,故更多地用后一标记方法。藉此已对A、B、E、G型肉毒毒素及A、B、E三型混合毒素,C和D型的毒素有关抗原和毒性的关系,一些肉毒梭