呋喃苯胺酸对大鼠平滑肌α_肾上腺素受体触发Ca~(2 )内流的影响

Ｃｌ－通道与受体调控Ｃａ２＋内流关系近年受到重视。已有资料表明Ｃｌ－通道开放参与介导α１－肾上腺素受体触发Ｃａ２＋内流,但对血管平滑肌Ｃｌ－通道作用未有一致看法。有报道认为Ｃｌ－通道开放形成的内向Ｃｌ－电流介导经电压依赖性Ｃａ２＋通道（ＶＤ－ＣＣｓ）...     

气道上皮细胞P2Y嘌呤受体:从离子转运到免疫功能(英文)

水盐的转运调控对呼吸道、生殖系统以及消化道等多个器官系统的整体功能都至关重要。气道上皮的液体分泌就是通过离子转运产生的渗透压所驱动的,而这种腔面方向渗透梯度的决定因素则是氯离子(Cl-)的外向转运。在各类上皮细胞中,多种经典的信号转导级联都与离子运输的调节相关,其中包括两个为人熟知的胞内信号系统:细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的升高,以及环核苷酸,如环腺苷酸(cAMP)合成率的升高。Cl-的分泌主要是通过开放上皮细胞顶膜面Ca2+激活或cAMP激活的Cl-通道。另外基底面Ca2+激活或cAMP激活钾离子(K+)通道的开放同样对离子跨上皮转运的调节起重要作用,会使细胞超极化从而保持顶面Cl-通道开放,并持续释放Cl-。P2Y受体表达于几乎所有极性上皮的顶膜或基底膜面,并调控分泌液体与电解质的运输。人气道上皮细胞中有多种核苷酸受体的表达。细胞外核苷酸,如UTP和ATP,都是能发动钙离子浓度升高的促分泌素。它们从气道上皮细胞释放到胞外,又以自分泌的形式作用于上皮细胞并刺激跨膜离子转运。与此同时,最新研究结果证明在支气管上皮细胞与其它免疫细胞中,P2Y受体还具有分泌炎症因子的功能。     

小麦根液泡膜上存在两种类型ATPase

采用Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ柱层析的方法在小麦根液泡膜中分离出两种ＡＴＰａｓｅ,一种需Ｍｇ＾２＋存在于表现催化活性,受质子通道抑制剂ＤＣＣＤ（二环已基碳二亚胺）的抑制和Ｃｌ＾－的激活,为需Ｍｇ＾２＋ＡＴＰａｓｅ,另一种不需Ｍｇ＾２＋就可表现出催化活性,受Ｃａ＾２＋的强烈激活,不受ＤＣＣＤ的抑制和Ｃｌ＾－激活,可能前者与转运质子有关,后者与Ｃａ＾２＋的转运有关。     

单羧酸类Cl-通道阻断剂对心室肌CFTR Cl-通道的影响

本文采用全细胞膜片箝与细胞内灌注技术,观察了单羧酸类Ｃｌ＾－通道阻断剂对豚鼠心室肌囊性纤维变性膜透性调节蛋白（ＣＦＴＲ）Ｃｌ＾－电流的影响,细胞包９－ＡＣ以可逆方式增强异丙肾上腺素（ＩＳＯ）激发的ＣＦＴＲＣｌ＾－的外向电流成分,５－ｎｉｔｒｏ－２－（３－ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐｙｌａｍｉｎｏ）－ｂｅｎｚｏａｔｅ（ＮＰＰＢ）和二苯胺羧酸（ＤＰＣ）对ＩＳＯ发的ＣＦＴＲＣｌ＾－电流的作用呈现先增强后抑制的双     

带3蛋白转运吡啶二羧酸根离子的动力学研究

利用ＤＰＡ使Ｔｂ３＋的荧先强度显著增强的原理进行带３蛋白活性的测定,方法简便、灵敏、重复性好,而且能够进行连续荧光扫描测量．应用连续荧光扫描法测定了带３蛋白介导的ＤＰＡ与Ｃｌ－交换的动力学特征参数．结果表明,带３蛋白介导的ＤＰＡ与Ｃｌ－的交换对ＤＩＤＳ非常敏感,受ＤＩＤＳ的强烈抑制,抑制程度大于９０％;ＤＰＡ由内向外转运的米氏常Ｋｍ＝２８．１—３１．２ｍｍｏｌ／Ｌ;带３蛋白的天然底物Ｃｌ－从内侧竞争性抑制ＤＰＡ向外转运,抑制常数ｋｉ＝６０．４±６．９ｍｍｏｌ／Ｌ;膜内侧ＤＰＡ与外侧Ｃｌ－交换的活化能,在４—２５℃范围内为５．８±０．５ｋＣａｌ／ｍｏｌ２５—３７℃范围内为１９．８±１．５ｋＣａｌ／ｍｏｌ;膜内侧ＤＰＡ与外侧Ｃｌ－交换受转运介质ｐＨ（膜内外对称改变）的显著影响,ｐＨ＜７．４时,交换速度显著升高．本实验证明ＤＰＡ确是经带３蛋白而转运的,但转运机制可能与无机离子转运有所不同。     

血管平滑肌细胞上的自发内向阳离子通道

采用膜片箝技术的细胞贴附式（ｃｅｌ－ａｔａｃｈｅｄ）,在酶法分离的大鼠尾动脉平滑肌细胞上记录到一种自发的内向阳离子通道。结果发现：１、在实验条件下（池子液：Ｋｒｅｂｓ,电极液：高钾）,该通道电导为２６．５±４．１ｐＳ,且具有明显的电压依赖、时间依赖和Ｃａ２＋依赖的特性;２、该电流具有极显著的内向整流特性;３、离子替换实验表明,该通道对Ｎａ＋和Ｋ＋具有很好的通透性,对Ｃｌ－的通透则很差;４、胞外加入４－ＡＰ（２ｍｍｏｌ／Ｌ或５ｍｍｏｌ／Ｌ）,ＢａＣｌ２（１ｍｍｏｌ／Ｌ）和ＣｓＣｌ（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）均不能抑制该电流;５、内向阳离子电流可与Ｃａ２＋－激活Ｋ＋电流在同一细胞上交替活动,提示这两种电流可能在调控平滑肌细胞的基本活动方面起关键作用。     

心肌细胞内pH调节

心肌细胞具有自身的酸碱缓冲能力,并且通过Ｎａ＾＋／Ｈ＾＋交换蛋白、Ｎａ＾＋／ＨＣＯ＾－３同向转运和乳酸的跨膜运转使Ｈ＾＋外向转运,通过Ｃｌ＾－／ＨＣＯ＾－３交换使Ｈ＾＋内向转运等途径以维持细胞内生理ＰＨ,心肌细胞内Ｃａ＾２＋浓度受ＰＨ变化的影响。     

上皮细胞间紧密连接功能的研究进展

紧密连接(tight junction,TJ)广泛存在于所有上皮或内皮细胞间连接的最顶端,是物质经旁细胞途径转运的结构和功能基础。TJ是由跨膜蛋白和胞浆蛋白两大类构成的大分子复合物,主要行使"屏障"和"栅栏"功能,前者可对物质的大小和电荷进行选择,进而调控旁细胞途径的物质转运;后者则通过调控顶膜和基底侧膜两个功能区之间的脂质和蛋白等物质的自由弥散形成高度极性化的细胞。近年来,关于TJ在各种上皮细胞中的作用及调控机制的研究日益增多。本文重点综述了上皮细胞间TJ研究的最新进展,包括TJ的构成、结构和功能检测以及调控机制,并以几类研究比较集中的上皮类型为例介绍TJ研究的现状,这将为防治与TJ改变相关的上皮屏障功能障碍性疾病提供新的思路。     

心室肌Cl~－通道电流的性质及其意义

近年来,在豚鼠、兔心室肌上发现了一种由β－肾上腺素能激活的Ｃｌ~－电流（Ｉ＿Ｃｌ）。此种Ｉ＿Ｃｌ的主要特点为：外向整流性质,时间不依赖性,对细胞外Ｎａ~＋变化敏感,Ｃｌ~－通道的活动受细胞内ｃＡＭＰ依赖性蛋白激酶Ａ的调节。Ｉ＿（Ｃｌ）的发现不仅证明心肌上有Ｃｌ~－通道,而且近来研究表明,Ｉ＿（Ｃｌ）在调节心肌动作电位时程和静息电位方面起主要作用。研究结果还提示Ｉ＿（Ｃｌ）可能与病理状态下某些心律失常的发生有关。     

铝胁迫对小麦根系液泡膜ATP酶,焦磷酸酶活性和膜脂组成的效应

研究了铝胁迫下耐铝性不同的两个小麦品种根细胞液泡膜ＡＴＰ酶、焦磷酸酶活性和膜脂的变化。与对照相比,经２０和１００ｍｏｌ／Ｌ的ＡｌＣｌ３处理后,耐铝品种Ａｌｔａｓ６６的液泡膜Ｈ＾＋－ＡＴＰ和和Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活性迅速下降;铝敏感品种Ｓｃｏｕｔ６６液泡膜Ｈ＾＋－ＡＴＰ酶和Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活性则在２０μｍｏｌ／Ｌ时增加,１００μｍｏｌ／Ｌ时下降。焦磷酸酶活性在Ａｌ－ｔａｓ６６中下降,在Ｓｃｏｕｔ     

过氧化氢诱发的小脑皮质凋亡神经元膜K+通道电流的变化

用新生ＳＤ大鼠小脑皮质细胞进行培养,用Ａｒａ－Ｃ抑制非神经元生长,以Ｈ２Ｏ２诱发神经元凋亡。用膜片细胞贴附式观察了凋亡神经元膜钾离子通道电流的变化,结果表明,凋亡小脑皮质神经元膜Ｋ通道在不同箍位电压下,通道电流（ＩＫ）幅度小于正常神经元的,单位电导小于正常神经元的,通道的平均开放时间,开放概率、短开放及长开放时间常数亦均小于正常神经元的。说明小脑皮质凋亡神经元Ｋ通道活动减弱     

水通道基因表达和功能的调节

水通道,又称水蛋白,是一系列具有同源性的内在膜蛋白家族成员。它们介导着不同类型细胞膜的跨膜水转运。迄今,已从哺乳动物组织中鉴定出６种水蛋白,除定位于肾集合管上皮细胞的ＡＱＰ－ＣＤ特异地对加压素敏感外,限水和盐适应及某些药物也可影响ＡＱＰａ的功能和表达。     

心室肌Cl—通道电流的性质及其意义

近年来,在豚鼠,兔心室肌上发现了一种由β－肾上腺素能激活的Ｃｌ＾－电流。此种ＩＣｌ的主要特点为：外向整流性质,时间不依赖性,对细胞外Ｎａ＾＋变化敏感,Ｃｌ＾－通道的活动受细胞内ｃＡＭＰ依赖性蛋白激酶Ａ的调节。     

氧化修饰使HDL促动脉平滑肌细胞胆固醇流出减少

为了研究氧化修饰对高密度脂蛋白（ＨＤＬ）转运细胞胆固醇地＾３Ｈ－胆固醇负荷的培养人动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）分别与天然ＨＤＬ及Ｃｕ＾２＋ａｋｇ ＨＯＣｌ氧化修饰的ＨＤＬ在３７℃温育不同时间后,分别测定细胞＾３Ｈ－胆固醇清除率。结果发现,温育２４ｈ后,经Ｃｕ＾２＋或ＨＯＬｌ氧修饰后的ＨＤＬ其细胞胆因醇清除率分别较天然ＨＤＬ下降了３０．０％和４３．１％（ｐ〈０．０１）。结果还发现,Ｃｕ＾２＋或ＨＯＣｌ氧     

胃癌及癌旁组织癌胚抗原分布的免疫电镜观察

应用免疫电镜技术对１４例胃癌手术切除标本进行胃癌及癌旁组织中癌胚抗原（ＣＥＡ）超微结构水平分布的定位观察。结果表明,癌旁正常胃粘膜上皮细胞ＣＥＡ含量很少,仅在表面微绒毛见到微弱的ＣＥＡ分布;肠化上皮细胞ＣＥＡ主要分布在吸收细胞的微绒毛及杯状细胞粘液颗粒之间;而胃癌细胞ＣＥＡ除分布腔面微绒毛外,尚分布细胞侧面,基底面或整个胞膜,还见于胞浆内膜结构中。ＣＥＡ在胃癌细胞与正常胃粘膜上皮及肠化上皮分布上的差异说明表面膜成份极性的丧失是上皮性肿瘤细胞的特征之一。ＣＥＡ在胃癌细胞的分布异常可能导致恶性细胞某些生物学行为的变化。     

低渗条件下小肠上皮细胞调节性细胞容积减小的离子通道机制

目的:观察人小肠上皮细胞调节性细胞容积减小(RVD)的过程,探讨参与RVD过程的离子通道机制.方法:将培养的人小肠上皮细胞暴露于低渗溶液, 利用电子细胞体积测量系统测定细胞平均容积变化过程和离子通道的参与过程;采用RT-PCR方法检测人小肠上皮细胞上离子通道的表达.结果:人小肠上皮细胞具有良好的RVD功能; 其RVD过程可被氯通道阻断剂NPPB 和钾通道阻断剂四乙铵所阻断; 进一步的研究发现, 中等电导钙激活性钾通道(IK)的特异性阻断剂Clotrimazole (CLT) (1μmol/L)可以明显抑制细胞的RVD过程,而大电导钙激活性钾通道(BK)和小电导钙激活性钾通道(SK)的特异阻断剂iberiotoxin (100 nmol/L)和apamin (100 nmol/L)对RVD过程无任何抑制作用.RT-PCR的结果也显示, 人小肠上皮细胞只有IK表达, 而无SK和BK的表达.结论:人小肠上皮细胞具有RVD功能,RVD过程的完成有赖于氯通道和钾通道的平行激活, 而其中参与容积调节的钾通道是中等电导钙激活型钾通道IK.     

肝细胞生长因子对四氯化碳损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用

本工作采用无血清原代培养大鼠肝细胞法,观察了重组人肝细胞生长因子（ｒ－ｈＨＧＦ）对四氯化碳（ＣＣｌ４）致大鼠肝细胞损伤的保护作用。结果表明,ｒ－ｈＨＧＦ对ＣＣｌ４染毒肝细胞有明显的保护作用。ｒ－ｈＨＧＦ保护组较ＣＣｌ４染毒组细胞存活率显著升高,细胞内丙氨酸转氨酶、钾离子漏出明显降低。结果提示,ｒ－ｈＨＧＦ可减轻ＣＣｌ４对肝细胞膜的损伤,提高细胞膜的结构完整性     

上皮细胞K+通道的生理学意义与临床应用:跨上皮细胞转运的驱动力生成和K+循环

K^＋通道在上皮细胞内以极化的方式表达,形成一个庞大的膜蛋白家族。出于对主要依赖Na^＋-K^＋-ATPase而维持的细胞内跨膜K^＋梯度的考虑,K^＋通道在跨上皮细胞转运中的主要作用为：膜电位生成和K^＋循环。本文以肾近端小管和胃壁上皮细胞转运为例简要阐述了K^＋通道的作用。在这两个组织中,K^＋通道活性限速跨上皮细胞转运,调节细胞体积。近年来,药理学工具和转基因动物的实验证实了对K^＋通道的原先认知,并将研究深入到分子水平。K^＋通道的分子结构挑战高亲和力药物分子的设计,及其多组织同时表达的两个典型特征阻碍了高活性、组织特异性小分子治疗的进展。然而,抑制K^＋通道能阻断胃酸分泌等病理生理机制的深入研究,促进K^＋通道药物用于胃病治疗和作为肾脏转运抑制剂用于肾脏相关疾病治疗。     

经G—蛋白敏感的跨膜信号通路调控心血管肌源性张力

本研究探讨低氧和ＡｌＦ－４等药物经Ｇ－蛋白敏感的跨膜信号通路对心血管肌源性张力的调控作用。在含有稳定表达Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换蛋白的ＣＫ１．４细胞中,用ｆｕｒａ－２荧光影像确定细胞低氧对胞浆游离Ｃａ２＋［Ｃａ２＋］ｉ的影响。在离体犬心乳头肌、颈动脉、主动脉及肺动脉恒温灌流样本中,用张力－电换能器测量低氧灌流和ＡｌＦ－４等药物对心血管肌源性张力的影响。在整体犬体内,按拉丁方设计,用１２５Ｉｓｏｄ－１获得不同剂量ＶＩＳＡ高效剂细胞内分布等药代动力学参数。结果表明：①在ＣＫ１．４细胞中,低氧抑制Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换蛋白,产生Ｃａ２＋内流,升高［Ｃａ２＋］ｉ;②低氧灌流削弱ＡｌＦ－４所致的血管收缩而明显易化Ｃａ２＋内流所致的心乳头肌收缩,与结果１）吻合;③ＶＩＳＡ高效剂分布至细胞内,协同ＡｌＦ－４,模拟并激活Ｇ－蛋白敏感的跨膜信号通路,显著改善低氧所致的Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换蛋白等跨膜大分子和心血管收缩蛋白氧化损害。     

Na-K-Cl协同转运蛋白研究进展

Na-K-Cl协同转运蛋白是一类膜蛋白,负责转运Na、K、Cl离子进出上皮细胞与非上皮细胞。Na-K-Cl介导的转运过程是电中性的,多数情况下是1Na:1K:2Cl(乌贼轴突中是2Na:1 K:3Cl),其活性被布美他尼(bumetanide)和呋塞米(furosemide)所抑制。迄今为止,Na-K-Cl协同转运蛋白被鉴定出来两个同源异构体:NKCC1和NKCC2。NKCC1存在于多个组织中,含有NKCC1的上皮大多数属于分泌上皮,而且会有Na-K-Cl协同转运蛋白位于基底膜外侧;NKCC2只存在于肾脏,位于上皮细胞致密班的顶膜上。Na-K-Cl协同转运蛋白的调控在不同的细胞和组织中是不同的。Na-K-Cl协同转运蛋白的活性会受激素刺激和细胞体积变化的影响;有些组织中,这种调控作用(尤其是NKCC1亚基)是通过特定的激酶使该转运蛋白自身发生氧化/硝化、磷酸化/去磷酸化来实现的;蛋白过表达在Na-K-Cl协同转运蛋白的激活中也起重要作用。