葡萄球菌核酸酶R型的晶体生长及初步晶体学分析

葡萄球菌核酸酶Ｒ型是葡萄球菌核酸酶的一个类似物,已在大肠杆菌中高效表达并且用阳离子交换色谱纯化。应用悬滴气相扩散法在含５０％聚乙二醇的５０ｍｍｏｌ／Ｌ柠檬酸缓冲体系,ＰＨ５．６中获得适合Ｘ射线分析用的单晶体。     

DIDS和ConA对带3蛋白转运活性及结构的影响

测定了伴刀豆球蛋白（ＣｏｎｃａｎａｖａｌｉｎＡ）和ＤＩＤＳ对人红细胞带３蛋白活性及结构的影响。（１）ＣｏｎＡ使带３转运速度常数Ｋ显著增加。ＣｏｎＡ浓度达到０．０５ｍｇ／ｍｌ时,Ｋ值增加３４．４％。ＤＩＤＳ对带３活性有明显的抑制作用。（２）荧光探针ＤＰＨ,３ＡＳ,９ＡＳ,１６ＡＰ分别测定ＣｏｎＡ和ＤＩＤＳ与带３结合后膜流动性的变化。ＣｏｎＡ能明显增加膜脂的流动性,而ＤＩＤＳ则降低膜脂流动性。（３）差示扫描量热法（ＤＳＣ）测定带３蛋白变性性质,发现ＣｏｎＡ使红细胞膜上带３蛋白变性峰出现温度从６９．２５°Ｃ减小到６６．２５°Ｃ,而ＤＩＤＳ则使之增至７９．５°Ｃ。     

稀土离子对带3蛋白阴离子转运活性及血影膜流动性的影响

测定了Ｌａ２＋、Ｇｄ３＋、Ｔｂ３＋及Ｙｂ３＋四种稀土离子对带３蛋白阴离子转运活性及对血影膜脂流动性的影响。结果如下：（１）稀土离子可强烈抑制带３蛋白的阴离子转运活性,抑制程度随稀土离子浓度增加而增加,最高达到６３．７％。（２）不同的稀土离子对带３蛋白的抑制程度不同,抑制程度从大到小的顺序为Ｙｂ＞Ｔｂ＞Ｇｄ＞Ｌａ。（３）稀土离子可显著降低血影膜流动性,并且在脂双层的全部厚度内都降低,降低的程度随稀土浓度的增大而增大。（４）不同的稀土离子对血影膜流动性的影响不同,作用从大到小的顺序与它们对带３蛋白活性抑制程度大小的顺序一致。（５）稀土离子对血影膜流动性的影响特征与稀土离子抑制带３蛋白活性的特征完全相符,带３蛋白中承担阴离子转运功能的部分是贯穿性膜蛋白,并且在阴离子转运过程中要发生显著的构象变化,因此稀土离子可能是通过作用于膜脂再影响带３蛋白活性的。     

带3蛋白转运吡啶二羧酸根离子的动力学研究

利用ＤＰＡ使Ｔｂ３＋的荧先强度显著增强的原理进行带３蛋白活性的测定,方法简便、灵敏、重复性好,而且能够进行连续荧光扫描测量．应用连续荧光扫描法测定了带３蛋白介导的ＤＰＡ与Ｃｌ－交换的动力学特征参数．结果表明,带３蛋白介导的ＤＰＡ与Ｃｌ－的交换对ＤＩＤＳ非常敏感,受ＤＩＤＳ的强烈抑制,抑制程度大于９０％;ＤＰＡ由内向外转运的米氏常Ｋｍ＝２８．１—３１．２ｍｍｏｌ／Ｌ;带３蛋白的天然底物Ｃｌ－从内侧竞争性抑制ＤＰＡ向外转运,抑制常数ｋｉ＝６０．４±６．９ｍｍｏｌ／Ｌ;膜内侧ＤＰＡ与外侧Ｃｌ－交换的活化能,在４—２５℃范围内为５．８±０．５ｋＣａｌ／ｍｏｌ２５—３７℃范围内为１９．８±１．５ｋＣａｌ／ｍｏｌ;膜内侧ＤＰＡ与外侧Ｃｌ－交换受转运介质ｐＨ（膜内外对称改变）的显著影响,ｐＨ＜７．４时,交换速度显著升高．本实验证明ＤＰＡ确是经带３蛋白而转运的,但转运机制可能与无机离子转运有所不同。