复方奥硝唑- 甲磺酸培氟沙星缓释制剂对人牙周膜细胞凋亡及超微结构 的影响

目的:观察不同浓度复方奥硝唑-甲磺酸培氟沙星缓释制剂对人牙周膜细胞(HPDLC)凋亡与超微结构的影响。方法:用含有不同浓度复方奥硝唑-甲磺酸培氟沙星缓释制剂(0、1.25、2.5、5、10、20g/L)的培养液对人牙周膜细胞进行培养,流式细胞术检测细胞凋亡指数;透射电镜下观察HPDLC超微结构的改变。结果:在1.25、2.5 g/L的浓度下对HPDLC的凋亡率和超微结构均与对照组无显著性差异;而5、10 g/L的浓度组的细胞凋亡率较对照组小且超微结构显示细胞胞质内粗面内质网和线粒体增多,细胞突起增多;而在高浓度药物20 g/L的作用下,凋亡率有所增加,细胞发生退变,溶酶体增多。结论:5、10 g/L的复方奥硝唑甲磺酸培氟沙星缓释制剂对体外培养的HPDLC的生长有一定促进作用,高浓度药物20g/L则对HPDLC生长有一定的抑制作用。     

人白蛋白对HK-2 细胞凋亡的作用

目的:探讨人白蛋白对体外培养的HK-2细胞凋亡的作用。方法:本实验研究对象为HK-2细胞株,将培养的HK-2细胞与20g/L的人白蛋白共同孵育0、4、6、8小时后,用Hoechst33258染色检测细胞凋亡。不同浓度(0g/L、5 g/L、10 g/L、20g/L和30g/L)的人白蛋白与体外培养的HK-2分别共同孵育0、4、6、8小时后,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:Hoechst33258染色结果显示:培养基对照组未见明显细胞凋亡;20g/L白蛋白与HK-2细胞共同孵育4、6、8小时,与对照组比较,均可见HK-2细胞荧光强度增加,有着典型凋亡形态的细胞增多,且随着人白蛋白与HK-2细胞作用时间的延长,细胞凋亡的程度和数目也增多。流式细胞仪检测结果显示:与对照组比较,HK-2细胞的凋亡率随着人白蛋白与HK-2细胞作用的浓度和时间增加而显著性增高,细胞凋亡率在8h组为(9.15±0.15%),在30g/L组为(9.35±0.46%),均为最高。结论:人白蛋白以时间和剂量依赖方式诱导肾小管细胞凋亡,以30g/L作用浓度和8小时作用时间的人白蛋白诱导HK-2细胞凋亡的作用最显著。     

硒对H2O2诱导的人甲状腺细胞凋亡和超微结构改变的影响

目的：观察硒对H2O2诱导的人甲状腺上皮细胞凋亡和超微结构改变的影响。方法：取良性甲状腺腺瘤旁正常组织进行细胞培养。加硒（10^-7mol／L）或不加硒后加入不同浓度H2O2（0～800μmol／L）刺激单层培养的甲状腺细胞,流式细胞术（FCM）检测甲状腺细胞凋亡率并在电镜下观察其超微结构的改变.结果：经过H2O2作用24h的人甲状腺细胞,随H2O2浓度升高,细胞凋亡率逐渐升高;电镜下甲状腺细胞超微结构呈损伤型改变,甚至出现凋亡、死亡。预先加入10^-7mol／L硒可降低细胞凋亡率,可明显减轻亚细胞结构损伤。结论：硒可减轻H2O2诱发的人甲状腺细胞的氧化损伤,拮抗其导致的细胞凋亡。     

白藜芦醇通过降低galectin-3的表达抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖并促进其凋亡

目的：探讨白藜芦醇对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及galectin-3在其中的作用。方法：以体外培养的人宫颈癌SiHa细胞为研究对象,实验分为对照组、白藜芦醇处理组及[白藜芦醇＋galectin-3（5、10、20μg/mL）]共5组,分别给予生理盐水、300μmol/L白藜芦醇及[300μmol/L白藜芦醇＋Galectin-3（5、10、20μg/mL）]处理。48小时后,分别收集各组细胞,采用MTT法检测细胞的增殖情况,Caspase-3活性试剂盒测定细胞的凋亡情况,Western Blot技术测定细胞内galectin-3的蛋白表达水平。结果：300μmol/L的白藜芦醇明显抑制SiHa细胞的增殖,并显著增加其凋亡水平,同时减少了细胞内galectin-3的蛋白表达。在白藜芦醇处理的同时,给予5、10及20μg/mL的Galectin-3,随着Galectin-3蛋白浓度的增加,SiHa细胞的增殖抑制率逐渐降低,凋亡水平也逐渐下降,但是VEGF-R3受体的磷酸化水平却逐渐升高。结论：白藜芦醇通过降低galectin-3的表达抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖并促进其凋亡。     

维生素C对TNF-α诱导的原代培养大鼠脂肪细胞凋亡的影响

以5、10、50、100μmol／L维生素C（vit C）及其与10ng／ml TNF-α联合处理体外培养的大鼠脂肪细胞24h,采用流式细胞仪检测脂肪细胞凋亡率,光学显微镜和透射电镜观察脂肪细胞形态学变化。结果表明,高浓度vitC（100 μmol／L）单独作用及与TNF-α联用,均能显著提高脂肪细胞凋亡率（P〈0．01）,且联用组凋亡率显著高于单用TNF-α处理组（P〈0．01）;低浓度vitc（5、10、50μmol／L）单独作用未检测到凋亡,且与TNF-α联用组凋亡率显著低于单用TNF-α处理组（P〈0．01）;光学显微镜和透射电镜观察可见100μmol／L vit C处理组出现凋亡的形态学特征,细胞收缩变圆,染色质致密浓染聚集在核膜边缘,核碎裂成多个凋亡小体,随即被邻近细胞吞噬。结果提示高浓度vit C（100μmol／L）可以引起脂肪细胞凋亡,并有效地增强TNF-α对脂肪细胞的凋亡作用．     

华蟾素对子宫内膜癌HEC-1-B细胞株凋亡和增殖的影响

目的：探讨华蟾素对体外培养子宫内膜癌HEC-1-B细胞凋亡、增殖以及侵袭能力的影响。方法：体外培养HEC-1-B细胞,经不同浓度华蟾素（0．2mg／ml、2mg／ml和20mg／m1）干预24h后,采用MTT法观察细胞生长情况,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell小室检测细胞体外侵袭能力。结果：华蟾素能有效抑制HEC．1．B细胞生长,诱导细胞凋亡。未经华蟾素处理的细胞凋亡率仅为2．5％,经0．2mg／ml、2mg／ml、20mg／ml的华蟾素作用24h后,细胞凋亡率分别为7．4％、44．3％和78．5％。趋势卡方检验x^2=165．4983,P〈0．0001。HEC-1-B细胞经华蟾素作用后,细胞侵袭能力降低。在高浓度时,华蟾素有可能存在细胞毒作用。结论：华蟾素能通过诱导HEC-1-B细胞凋亡,从而抑制HEC-1-B细胞生长,并且降低细胞的侵袭能力。     

白藜芦醇对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的：研究白藜芦醇体外活性,确定它的植物雌激素作用。方法：采用MTT法观察不同浓度白藜芦醇对MCF-7细胞增殖作用的影响。采用DNA ladder法和荧光显微镜观察高浓度白藜芦醇对细胞的影响。免疫组化法观察低浓度白藜芦醇对核增殖抗原PCNA表达的影响。结果：MTT结果显示白藜芦醇高浓度抑制MCF-7细胞增殖,IC50为8.70×10-5mol/L;低浓度（10-7~10-6mol/L）则对细胞有促增殖作用,最高促增殖浓度为1.0×10-7mol/L。DNA ladder和荧光显微镜可观察到高浓度白藜芦醇作用后细胞典型的凋亡形态。免疫组化结果显示低浓度白藜芦醇作用后,细胞核内PCNA表达明显增加（P〈0.05）。结论：高、低浓度的白藜芦醇对MCF-7细胞分别表现为诱导凋亡和促增殖作用,呈现出植物雌激素对MCF-7细胞典型的双向调节作用。     

地塞米松对人肝癌细胞系SMMC-7721凋亡的影响

观察不同浓度的地塞米松(dexamethasone,Dex)对人肝癌细胞系SMMC-7721凋亡的影响。SMMC-7721细胞培养于DMEM(高糖,含10%胎牛血清)培养液中,待细胞融合度达70%时,分别加入地塞米松,使其终浓度分别达到0.5μg/m L(低浓度组)、1.0μg/m L(中浓度组)和2.0μg/m L(高浓度组),另设一生理盐水对照组。诱导24 h后,Hoechst 33258染色,荧光倒置显微镜观察凋亡细胞形态和比例;发现随着Dex浓度的变化,凋亡的肝癌细胞数量、形态变化明显,Dex浓度越高,凋亡的肝癌细胞越多,并呈现浓度依赖性,即凋亡数与Dex浓度呈正相关。提取细胞总RNA,逆转录成为c DNA,荧光定量PCR法测定凋亡相关基因Bcl-2、Caspase 3、Caspase 5、Caspase 7、Caspase 9、Fas及P53的表达。与对照组比较,3种浓度Dex处理的细胞其凋亡细胞形态和比例均发生显著差异,凋亡细胞数量显著增加,各相关基因表达均显著下降。Dex对SMMC-7721细胞具有诱导凋亡的作用。     

复方浙贝母药物血清抑制L1210/CDDP细胞增殖与诱导凋亡研究

目的：观察复方浙贝药物血清抑制耐顺铂的小鼠淋巴细胞系（L1210/CDDP）增殖和诱导凋亡效应,并在此基础上探讨复方浙贝颗粒逆转白血病细胞多药耐药机制。方法：MTT法测定不同浓度组复方浙贝颗粒含药血清抑制L1210/CDDP增殖;Annex-in-V/PI双染经流式细胞仪（FCM）定量检测其含药血清诱导L1210/CDDP细胞早期凋亡率。结果：不同剂量复方浙贝颗粒含药血清组均具有抑制L1210/CDDP细胞增殖效应,对其凋亡抑制率分别为：29.27%（高剂量组）、31.78%（中剂量组）、21.20%（低剂量组）、25.31%（阿霉素组）;实验各组的A570nm与空白对照组比较明显下降（P〈0.01）。经FCM双荧光法检测其能够诱导L1210/CDDP细胞早期凋亡,实验各组凋亡率分别为：55.12%（中剂量血清组）、34.23%（低剂量组）、25.69%（高剂量组）,24.65%（空白血清组）。结论：复方浙贝颗粒含药血清能够明显抑制L1210/CDDP细胞增殖,并能诱导其凋亡。     

新型鬼臼毒素衍生物诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及其机制研究

目的探讨新型鬼臼毒素衍生物10Ⅲg诱导人肺腺癌细胞A549细胞凋亡及其调控机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTr）比色法、流式细胞术测定细胞周期细胞凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳和微管蛋白组化染色,Western印迹法检测凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达。结果新型鬼臼毒素衍生物10m。对A549细胞增殖具有明显的剂量和时间依赖性抑制作用,细胞周期分析显示S期细胞数明显增多,出现G2／M期阻滞;10Ⅲg作用48h后DNA电泳可见明显的梯状条带;10Ⅲg能破坏A549细胞的细胞骨架,与依托泊苷相比有明显促进微管解聚现象;10Ⅲg浓度为10^-6mol/L时能显著促进Bax、Caspase-3蛋白的表达。结论新型鬼臼毒素衍生物10Ⅲg通过诱导A549细胞发生G2／M期阻滞而抑制其增殖,其机制可能与抑制细胞微管解聚及诱导细胞凋亡有关。     

蓝莓提取物对H2O2诱导的体外培养的大鼠海马神经元氧化损伤的保护作用

目的：探讨蓝莓提取物对过氧化氢致大鼠海马神经元氧化应激损伤的减缓作用。方法：将培养7d的海马神经细胞分为8组：①过氧化氢组（H2O2）：培养液中加入50μmol/L的H2O2,作用24h。②不同剂量蓝莓提取物预处理组（BE＋H2O2）：在加入H2O2前24h,分别加入0.01、0.1、1.0、10.0、20.0和40.0μg/mlBE。③空白对照组（Control）：处理步骤同上组,但每次处理物质均为等量的培养液。通过测定细胞存活率和上清液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性确定减轻海马神经元损伤的蓝莓提取物的适宜浓度。并检测细胞内丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性以及细胞凋亡率的变化。结果：①蓝莓提取物组（0.1,1.0和10.0μg/mlBE）LDH活性显著低于H2O2组,细胞存活率由H2O2组的57.44%分别上升至78.42%、87.71%、72.40%;1μg/ml蓝莓提取物组对H2O2诱导的海马神经细胞氧化应激损伤的保护作用最好。②1μg/ml蓝莓提取物组海马神经细胞培养上清液中MDA含量及细胞凋亡率显著低于H2O2组,SOD活性显著高于H2O2组。结论：适宜剂量的蓝莓提取物对氧化应激损伤的海马神经元有一定的保护作用,其机制可能与抑制海马神经元凋亡、增强神经细胞的抗氧化功能有关。     

二苯乙烯苷抑制过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的：研究二苯乙烯苷（TSG）对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡的保护作用。方法：运用四甲基偶氮唑盐还原法（MTT法）和流式细胞术筛选建立细胞凋亡模型的H2O2合适浓度以及检测不同浓度TSG对H2O2诱导HUVECs的增殖率和凋亡率;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态。结果：MTT及流式法筛选300μmol/L为H2O2作用于细胞的最适凋亡浓度。MTT和流式结果显示,与H2O（2300μmol/L）损伤组比较,10μmol/L与100μmol/LTSG预处理组细胞的增殖率增加（P〈0.05）,凋亡率显著降低（P〈0.01）;Hoechst33258染色观察TSG能降低H2O2诱导的细胞凋亡,使细胞凋亡数减少。结论：TSG能抑制H2O2诱导的HUVECs凋亡,从而起到保护血管内皮细胞的作用。     

三七皂苷对缺氧复氧心肌细胞损伤保护作用的研究

目的：研究三七皂苷对纯化培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制。方法：采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,测定细胞凋亡率、caspase-3、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量。结果：与正常组比较,模型组LDH、MDA含量、caspase-3活性及细胞凋亡率明显升高（P＆lt;0.01）,SOD活性明显降低（P＆lt;0.01）;三七皂苷组降低LDH、MDA含量、caspase-3活性和细胞凋亡率,提高SOD活性,与缺氧/复氧组比较各实验指标差异均具有显著性（P＆lt;0.05）。结论：三七皂苷对缺氧/复氧心肌细胞损伤有保护作用,作用机制与清除氧自由基,抗脂质过氧化及降低细胞凋亡率有关。     

葡萄糖氧化酶诱导肝细胞氧化应激模型的建立

目的：研究不同浓度葡萄糖氧化酶（GO）对人肝细胞L02氧化应激水平的影响,以确定建立肝细胞氧化应激模型的合适浓度。方法：用不同浓度GO干预L02肝细胞2h,MTT法检测细胞的存活率,流式细胞术检测细胞内活性氧簇（ROS）,荧光强度（FI）来表示ROS水平。分光光度法检测检测细胞MDA、GSH,速率法检测细胞培养液LDH、AST和ALT的水平。结果：①随GO浓度增加,肝细胞的存活率逐渐降低,其中75U/L、100U/L和125U/L组存活率显著低于对照组（P〈0.05）。②随GO浓度增加,MDA含量逐渐增高,其中50U/L、75U/L、100U/L、125U/L组MDA水平较对照组显著增高（P〈0.05）。GSH水平随GO浓度增高而逐渐减低,各干预组较对照组均显著降低（P〈0.05）。GO各干预组FI均较对照组显著降低（P〈0.05）。③各干预组LDH活性均显著高于对照组（P〈0.05）,50U/L、75U/L、100U/L、125U/L干预组AST与ALT水平均较对照组显著增高（P〈0.05）。结论：GO能引起的肝细胞氧化应激损伤有剂量依赖性,100U/L是建立肝细胞氧化应激的合适浓度。     

丙泊酚预处理对大鼠离体心肌浅低温缺血／再灌注损伤后线粒体细胞色素C释放的影响

目的：探讨丙泊酚预处理对大鼠离体心肌浅低温缺血／再灌注（I／R）损伤后心肌细胞凋亡及线粒体细胞色素C释放的影响。方法：应用Langendorff离体心脏灌注模型,取50只SD大鼠随机分为5组：对照组（C组）,二甲基亚砜（DMSO）预处理组（D组）,25、50、100μmol·L^-1丙泊酚预处理纽（P1、P2、P3组）。各组均浅低温缺血55min,再常温灌注60min。D组、P1、P2、P3组在缺血前分别以含DMSO、相应浓度丙泊酚的K-H液灌注10min,再冲洗5min,重复2次。记录平衡灌注末、缺血前即刻、再灌注30、60min时的心功能指标。再灌注60min时测定凋亡细胞,提取心肌线粒体,测定线粒体和胞浆的细胞色素C水平。结果：与C组相比,P3组再灌注30min、60min时左室舒张末压（LVEDP）降低、左室发展压（LVDP）升高（P〈0．05或P〈0．01）;P2、P3组再灌注末心肌细胞凋亡率降低（P〈0．05或P〈0．01）,线粒体细胞色素c释放减少,胞浆细胞色素C的量明显降低（P〈0．05或P〈0．01）。结论：丙泊酚预处理能够通过抑制心肌线粒体细胞色素C释放到胞浆,降低浅低温I／R损伤心肌细胞凋亡率,减轻心肌桶伤．     

乳酸堆积和二氯乙酸钠对肝癌细胞凋亡及bax、bcl-2表达和caspase-3活性的影响

目的：探讨乳酸堆积和二氯乙酸钠（OCA）对肝癌细胞（HepG2）凋亡和bax、bcl-2表达及caspase-3活性的影响。方法：通过体外培养HepG2,建立稳定的体外培养模型,配制成终浓度分别为0mmol／L、1．0mmol／L、2．0mmol／L、4．0mmol／L、8．0mmol／L的乳酸培养液以及在不同浓度乳酸组中加入终浓度为10^-3mmol／LDCA培养液与HepG2共同培养,其中以0mmol／L乳酸组为对照组。采用MTT法检测乳酸对HepG2的抑制率,流式细胞仪检测乳酸和DCA对HepG2的凋亡百分率,用Real-time PCR法测定bax及bcl-2mRNA的表达,用免疫荧光法检测caspase-3的活性。结果：乳酸对HepG2的IC50值为13．6mol／L,与对照组比较,随着乳酸浓度的增加,HepG2凋亡率增加,baxmRNA表达升高,bcl-2mRNA的表达降低,caspase-3活性增加,其中1．0mmol／L乳酸组与对照组比较（P〉0．05）,2．0mmol／L,4．0mmol／L和8．0mmol／L乳酸组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。加入DCA后．HepG2凋亡减少,2．0mmol／L乳酸＋DCA组、4．0mmol／L乳酸＋DCA组、8．0mmol／L乳酸＋DCA组与同浓度的乳酸组比较,baxmRNA表达减少（P〈0．05）,bcl-2mRNA表达增加（P〈0．05）,caspase-3活性减低（P〈0．05）。结论：乳酸可诱导HepG2凋亡,且随着乳酸浓度的增高,HepG2的凋亡率增加,其机制可能是通过对bcl-2及baxmRNA表达的改变以及激活caspase-3活性而实现,DCA可以降低HepG2凋亡,对乳酸堆积造成的HepG2凋亡有抑制作用。     

褪黑素对骨肉瘤MG-63细胞的增殖和抑制作用的体外实验研究

目的：研究褪黑素对人成骨肉瘤细胞株MG-63增殖和抑制作用。方法：不同浓度的褪黑素作用于体外培养的MG-63细胞,倒置显微镜下观察MG-63细胞的形态学变化,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度褪黑素对MG-63存活率,细胞计数试剂8（CCK-8）法检测褪黑素对MG-63细胞增殖抑制能力,AnnexinV／PI双染法标记检测细胞凋亡情况以及黏附实验测定细胞黏附能力和培养液中LDH释放量的检测。结果：MTT法检测经褪黑素作用后的MG-63细胞存活率以及细胞黏附能力明显下降,LDH的增加提示MG-63细胞死亡率上升;褪黑素可抑制骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖,5mmol／L的褪黑素对MG-63细胞诱导凋亡作用最明显,不同浓度的褪黑素之间实验结果具有统计学意义。结论：褪黑素能够诱导MG-63细胞凋亡,降低存活率,抑制细胞增殖,是治疗骨肉瘤潜在的靶向药物。