人骨肉瘤OS-732细胞系诱导血管生成作用及相关因子表达的研究

应用鸡胚绒毛尿囊膜模型（chick embryo chorioallantoic membrane,CAM),观察人骨肉瘤OS-732细胞系诱导血管生成过程及血管生长相关因子的表达。结果显示,本细胞系具有较强的促血管生成能力并表达血管内皮生长因子（vacular endothelial growth factor,VEGF),碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF0,鸡胚绒毛尿囊膜OS-732细胞系接种瘤细胞中血管内皮生长因子（VEGF）,转化生长因子β1(Transforming growth factor,TGF-β1）均呈阳性表达,而且VEGF呈持续高表达,结果表明VEGF,bFGF、TGF-β1可能共同参与骨肉瘤OS-732细胞系诱导的血管生成,而VEGF可能起着主要作用,提示阻断VEGF的作用可能影响骨肉瘤OS-732细胞系诱导的血管生成,此研究为以VEGF为靶点进行抗血管生成实验提供了依据。     

云南昭通年青褐煤黄腐酸钠对血管新生作用的影响

研究云南昭通地区年青褐煤黄腐酸钠对体内外血管新生作用的影响。将不同浓度的黄腐酸钠作用于人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)体外模型和鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)体内模型,采用MTT和划痕法检测其对HUVECs增殖和迁移的影响,以ELISA试剂盒测定细胞上清液血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,采集CAM图片用Image-Pro Plus6.0软件考察给药区域血管新生的情况。结果显示,与对照组比较,云南昭通年青褐煤黄腐酸钠在100、200、400μg/m L的浓度下对HUVECs的增殖有抑制作用(P0.05,P0.01),在100、200μg/m L浓度时对迁移有抑制作用并能下调血管内皮生长因子VEGF的表达(P0.01),在高浓度800、1200μg/m L下能抑制CAM血管的新生(P0.05)。研究结果表明,云南昭通地区年青褐煤黄腐酸钠具有良好的血管新生抑制作用,其机制可能与生长因子VEGF表达的下调有关。     

衰老对AhR 及其血管生成相关因子表达的影响

目的:探讨芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,Ah R)在过氧化氢(H_2O_2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老模型中表达的变化情况及其对血管生成相关因子表达的影响。方法:采用不同浓度的H_2O_2(100μM,200μM,300μM)处理HUVECs诱导内皮细胞衰老,通过β-半乳糖苷酶染色观察细胞衰老情况,Western blot检测HUVECs中Ah R蛋白以及血管生成相关因子低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白表达,ELISA检测细胞培养上清液中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的变化。结果:与对照组相比,经过不同浓度H_2O_2处理后,HUVECs均出现细胞衰老表现,Ah R蛋白表达显著增加,HIF-1α以及VEGF蛋白表达明显减少,且均呈现出剂量依赖性,以300μM H_2O_2处理组最为显著。结论:在过氧化氢诱导衰老的人脐静脉内皮细胞中Ah R蛋白表达明显增加,HIF-1α和VEGF等促血管生成因子明显减少。     

福安泰-03对人脐静脉内皮细胞凋亡和小鼠创伤愈合的影响

研究福安泰-03（Fuantai,FAT-03）对人脐静脉血管内皮细胞（humanumbilicalveinen－dothelialcells,HUVECs）凋亡和小鼠创伤愈合的影响。MTT法检查FAT-03对HUVECs和人低分化鼻咽癌细胞（CNE－2Z）生长的影响：聚碳酸酯膜小室趋化运动模型（Transwellmodel）检测,]FAT-03对HU-VECs运动能力的影响;荧光显微镜观察FAT-03作用下HUVECs的形态变化;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（AnnexinV-fluoresceinisothiocyanate,AnnexinV-FITC）双染检测Ⅳm03对HUVECs早期凋亡的影响;流式细胞术分析FAT-03对HUVECs周期及凋亡的影响;Westernblot法分析FAT-03对HUVECs的血管内皮细胞生长因子（VEGF）、Bcl．2、Bax表达的影响;小鼠背部创伤模型检查FAT-03对组织修复的影响;免疫组化法检查FAT-03对创伤组织微血管密度（microvesseldensity,MVD）和VEGF表达的影响。结果显示,FAT-03明显抑制HUVECs细胞的增殖和迁移,其抑制效果与剂量和作用时间相关,作用HUVECs24,48,72h的Ic50值为0．22,0．17,0．09mg／mL,但FAT-03对CNE．2Z细胞的生长却无明显的影响;0．16mg／mLFAT-03作用HUVECs24h对细胞迁移的抑制率为57．9％（P＜0．01）：FAT_03处理HUVECs48h,细胞的早期凋亡率增加（P〈0．05）;FAT-03阻滞HUVECs于G0／Gl期,并呈现典型的凋亡峰;0．16mg／mLFAT-03作用48,72h,HUVECs的凋亡率分别为14．6％、41．7％：鲋m03下调HUVECs的VEGF和抑凋亡基因Bcl-2的表达,上调促凋亡基因Bax的表达,其效果与剂量相关。FAT-03明显延迟小鼠创伤的愈合,且其作用与剂量相关。FAT-03组小鼠创伤周围组织微血管密度和VEGF阳性表达细胞都明显减少。因此,可以推测,FAT-03抑制HUVECs增殖并诱导其凋亡;抑制创伤组织的血管生成,进而延迟创伤愈合;它的这些作用可能与其下调VEGF、Bcl-2的表达,上调Bax的表达相关。     

肝细胞生长因子抑制剂——NK4的抗肿瘤作用

肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)是一种多功能的细胞因子,其生物学活性由c-Met蛋白所介导.HGF/c-Met信号通路在肿瘤生成、侵袭、转移以及肿瘤新生血管生成方面起重要促进作用. 因此, HGF/c-Met信号转导通路可以作为抗肿瘤药物设计的靶点.其中,HGF-α链N端447个氨基酸组成的NK4蛋白是HGF的特异性拮抗剂,它不仅通过抑制HGF/c-Met系统的信号转导发挥抗肿瘤效应;而且可以通过拮抗HGF和其它血管生成因子如成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factors, FGF)、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）的活性,进而抑制肿瘤新生血管生成,最终导致肿瘤细胞的凋亡.NK4的这种双重抗肿瘤功能使其成为一类很有前景的新型抗肿瘤药物.本文就NK4对肿瘤的抑制作用及其机制的研究进展进行综述.     

胞浆型磷脂酶A2介导弱氧化修饰低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

探讨弱氧化修饰低密度脂蛋白(MM-LDL)能否诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡以及胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)在此过程中的作用.MTT法测定细胞存活率;相差显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡;3H-花生四烯酸(3H-AA)预标法测定PLA2活性;蛋白质印迹检测cPLA2磷酸化;激光共聚焦显微镜检测单个细胞内钙离子浓度的变化.结果表明,MM-LDL(100～300 mg/L)作用后的HUVECs呈现凋亡典型的形态特征,凋亡率随MM-LDL浓度的增加而上升.MM-LDL能引起胞内钙离子浓度增加,cPLA2的活化及磷酸化.15 μmol/L AACOCF3和5 mmol/L EGTA在抑制cPLA2活性的同时,部分抑制MM-LDL诱导的HUVECs凋亡.加入外源性AA(50 μmol/L)能逆转AACOCF3引起的凋亡抑制.结果提示,cPLA2参与了MM-LDL诱导HUVECs凋亡的信号传递.     

二苯乙烯苷抑制过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的:研究二苯乙烯苷(TSG)对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的保护作用。方法:运用四甲基偶氮唑盐还原法(MTT法)和流式细胞术筛选建立细胞凋亡模型的H2O2合适浓度以及检测不同浓度TSG对H2O2诱导HUVECs的增殖率和凋亡率;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态。结果:MTT及流式法筛选300μmol/L为H2O2作用于细胞的最适凋亡浓度。MTT和流式结果显示,与H2O(2300μmol/L)损伤组比较,10μmol/L与100μmol/LTSG预处理组细胞的增殖率增加(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.01);Hoechst33258染色观察TSG能降低H2O2诱导的细胞凋亡,使细胞凋亡数减少。结论:TSG能抑制H2O2诱导的HUVECs凋亡,从而起到保护血管内皮细胞的作用。     

重组人VEGF165的表达纯化及单抗的初步筛选

血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)是抑制肿瘤生长和转移的重要靶点。为获得抗VEGF单抗细胞株,构建了rhVEGF₁₆₅工程菌,并利用复合自动诱导获得高效表达。经纯化获得高纯度rhVEGF₁₆₅蛋白,经检测具有促人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)增殖活性,其EC₅₀为2.4ng/ml。免疫小鼠,获得了3株能稳定分泌抗VEGF单抗的杂交瘤细胞株,为开发VEGF治疗性单抗提供了重要基础。     

新型蛋白酶体抑制剂YSY-01A对肿瘤细胞促血管生成作用的抑制及其机制初探

YSY-01A是一种新型蛋白酶体抑制剂,前期研究已经证实其对肿瘤细胞的增殖有抑制作用．但是它对肿瘤血管生成是否有影响尚不明确．本研究旨在探明YSY-01A阻碍肿瘤细胞促进血管生成的作用及机制．我们首先将磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)法与细胞共培养(Transwell)模型相结合,探讨YSY-01A抑制人结肠癌细胞(HT-29 cells)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的增殖促进作用;运用高内涵筛选(high content screening,HCS)法研究YSY-01A对HT-29细胞中NF-κB核转位的影响;利用Western blot法检测YSY-01A对HT-29细胞中缺氧诱导因子-1α(hypoxia- inducible factor-1α,HIF-1α)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达调控．为了观察YSY-01A对HUVEC增殖和运动有无直接抑制作用,我们采用SRB法观察YSY-01A对HUVEC的增殖抑制作用;运用HCS法分别考察YSY-01A对HUVEC的运动抑制和细胞毒作用．结果证实,YSY-01A可以阻碍HT-29细胞对HUVEC的增殖促进作用并具有浓度依赖性．YSY-01A还可抑制HT-29细胞中NF-κB的核转位,下调HIF-1α及VEGF的表达．进一步研究证实,YSY-01A能够浓度依赖地抑制HUVECs的增殖和运动,而不伴有明显的细胞毒作用．上述结果表明,YSY-01A可以通过抑制蛋白酶体活性下调肿瘤细胞中促血管生成因子的表达,进而在血管内皮细胞中发挥抗血管生成作用．     

六种藓类植物茎的比较解剖学研究

通过对6种藓类植物,即褶叶青藓(Brachythecium salebrosum(Web.et Mohr.)B.S.G.)、湿地匐灯藓(Plagiomnium acutum(Lindb.)Kop.)、侧枝匐灯藓(Plagiomnium maximoviczii(Lindb.)Kop.)、大凤尾藓(Fissidensnobilis Griff.)、大羽藓(Thuidium cymbifolium(Doz.et Molk.)B.S.G.)和大灰藓(Hypnum plumaeforme Wils.)嫩茎和老茎的石蜡切片和显微观察发现,同一藓类植株的嫩茎和老茎,茎结构稳定,不同种藓类植物茎横切面具有不同特征.植物体茎横切面形状、表层细胞的层数、细胞大小和细胞壁厚薄、皮层细胞大小和形状、中轴的有无以及比例等特征可以作为藓类植物的分科分类依据之一.     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.