人参皂甙 Rb1与Re对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的观察人参皂甙Rb1与Re对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响,并比较两者的效应差异.方法结扎Wistar大鼠左冠状动脉前降支,建立大鼠缺血再灌注动物模型;采用透射电镜、缺口末端标记法检测心肌凋亡细胞,利用光学显微镜进行细胞计数.结果 (1)透射电镜发现缺血再灌注组缺血区出现心肌凋亡细胞,假手术组未发现心肌凋亡细胞;(2)缺血再灌注组心肌细胞凋亡数为134.45±45.61个/视野,人参皂甙Rb1治疗组51.65±13.71个/视野,人参皂甙Re治疗组90.66±19.22个/视野,三组间有非常显著性差异(P<0.01).结论心肌缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡,人参皂甙Rb1和Re均可显著减少缺血再灌注心肌细胞的凋亡.证实人参皂甙Rb1与Re均有抑制缺血再灌注心肌细胞凋亡,减轻心肌缺血再灌注损伤的作用;人参皂甙Rb1的抗心肌细胞凋亡作用较Re的效果为佳.     

Rb1、Rg1对肾缺血／再灌注血清诱导HK-2细胞凋亡中Bcl-2、Bax表达的影响

目的：探讨人参皂甙Rb1、Rg1在肾缺血／再灌注血清诱导HK-2细胞凋亡中对Bol-2、Bax表达的影响。方法：制备家兔肾缺血／再灌注血清（SIR）和对照组血清（SC）用于HK-2细胞培养,TUNEL法检测细胞凋亡。实验分组：对照组、缺血／再灌注组、Rb1干预组、Rg1干预组,培养24h后免疫细胞化学法检测Bcl-2、Bax的表达。结果：与缺血／再灌注组比较,Rb1干预组和Rg1干预组Bax的表达明显下降（P〈0．01）,Bcl-2／Bax比值增大。结论：人参皂甙Rb1、Rg1对肾缺血／再灌注血清诱导HK-2细胞凋亡具有保护作用。     

人参皂甙Rg1对脑缺血再灌注大鼠脑组织Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨人参皂甙Rg1对脑缺血再灌注大鼠脑组织Bcl-2和Bax表达的影响及其意义。方法分别给大鼠腹腔注射人参皂甙Rg1 10、20、40 mg/kg,采用大脑中动脉闭塞方法建立脑缺血再灌注模型,观察大鼠脑缺血再灌注后不同时间段（2 h、24 h）神经功能缺损评分;应用免疫组化法检测脑组织缺血再灌注24h后Bcl-2、Bax的表达。结果人参皂甙Rg1组大鼠脑缺血后各时间点神经功能缺损评分显著低于单纯缺血再灌注组（P〈0.05）;与单纯缺血再灌注组相比,人参皂甙Rg1各组Bcl-2表达显著增高,Bax表达显著降低,Bcl-2/Bax比值显著上调（P〈0.05）。结论人参皂甙Rg1防治大鼠脑缺血再灌注损伤的机制可能与促进脑组织Bcl-2表达、抑制Bax表达有关,且以高剂量效果较好。     

缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达的影响

目的：探讨缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法：制备缺血预处理（IP）和缺血再灌注损伤（I／R）模型,采用末端标记技术（TUNEL）检测心细胞凋亡,应用免疫组织化学方法检测Bcl-2和Bax的蛋白表达,结果：缺血再灌注组心肌细胞凋亡率明显比正常对照组高（P＜0．05）,而缺血预处理组心肌细胞凋亡率明显比缺血再灌注组低（P＜0．05）,缺血再灌注组Bcl-2表达阳性细胞率明显比正常组低（P＜0．05）,而缺血预处理组Bcl-2表达阳性细胞率明显较缺血再灌注组高（P＜0．05）。缺血再灌注组Bax表达阳性细胞率明显较正常组高,而缺血预处理组Bax表达阳性细胞率明显较缺血再灌注组低（P＜0．05）。结论：缺血再灌注可诱导心肌细胞凋亡,缺血预处理可减少心肌细胞凋亡,Bcl-2和Bax的蛋白表达在心肌凋亡发生中起重要作用,缺血预处理可上调Bcl-2蛋白表达和下调Bax蛋白表达。     

人参皂甙Rb1对大鼠脑缺血再灌注神经损伤后的修复作用

通过阻塞大鼠大脑动脉,制备短暂性脑缺血大鼠模型,将出现神经功能缺失症状的大鼠随机分组,实施再灌注后立即按(40mg/kg)进行腹腔注射人参皂甙Rb1。结果发现大鼠脑缺血再灌注后,人参皂甙Rb1通过促进NAIP、Bcl-2表达和抑制Bax表达发挥神经损伤后的修复作用。人参皂甙Rb1给药组在各时间点的胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)阳性细胞数远远高于单纯脑缺血再灌注组(P<0.01)。GDNF的表达与缺血性损伤有一定的联系,可认为人参皂甙Rbl对神经系统有一定保护作用。     

人参皂甙Rb1对环磷酰胺所致卵巢早衰大鼠的保护作用

目的探讨人参皂甙Rb1对化疗所致卵巢早衰(Premature ovarian failure,POF)大鼠的Bcl-2及Bax基因表达的影响。方法选用30只2-3月龄具有正常动情周期雌性Wistar大鼠随机分3组,分别为对照组,治疗组和模型组。采用免疫组化和免疫印迹方法分别观察和半定量检测POF大鼠卵巢凋亡调节基因Bcl-2和Bax的蛋白表达情况,同时对比观察人参皂甙Rb1对其表达的影响。结果模型组卵巢颗粒细胞Bax蛋白的平均光密度值较对照组明显增高(P0.05);模型组Bcl-2蛋白的表达量较对照组明显下调(P0.05)。Rb1治疗后Bcl-2蛋白表达明显升高,Bax蛋白表达明显下调(P0.05)。结论 Rb1可能是通过下调bax蛋白水平减少卵巢颗粒细胞的凋亡,对化疗所致卵巢早衰起到治疗的作用,进而延缓卵巢衰老。     

牛磺酸对家兔缺血/再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的:研究牛磺酸(Tau)对家兔缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响.方法:阻断家兔心脏左冠状动脉前降支45 min,再灌注180 min引起心肌缺血/再灌注损伤,在心肌缺血前5 min耳缘静脉注射牛磺酸(200mg/kg),应用DNA片段原位末端标记法 (TUNEL染色),DNA凝胶电泳和流式细胞仪(FCM)观测心肌细胞凋亡.结果:琼脂糖凝胶电泳显示损伤对照组(I/R) 心肌DNA呈云梯状改变,而Tau I/R组无此改变.与损伤对照组(I/R) 比较,Tau I/R组缺血心肌凋亡细胞明显减少(TUNEL染色).流式细胞仪测定I/R组及Tau I/R组缺血心肌凋亡率分别为17.66%±1.54%和4.86%±1.23%.I/R组的缺血心肌Fas和Bax蛋白表达较非缺血心肌高 (P<0.01),Bcl-2/Bax比例较非缺血心肌低(P<0.01);而在Tau I/R组,Fas和Bax蛋白表达较I/R组的低 (P<0.01),Bcl-2/Bax比例较I/R组高(P<0.01).结论:牛磺酸可减少I/R家兔心肌细胞凋亡,其机制与调控凋亡相关基因 Fas,Bax和Bcl-2的蛋白表达有关.     

Carvedilol对大鼠实验性缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

研究 Carvedilol对缺血再灌注心肌细胞凋亡及 Bcl- 2、Bax蛋白表达的影响 ,探讨 Carvedilol抑制心肌细胞凋亡的可能机制。结扎 Wistar大鼠左冠状动脉前降支 (L AD) ,建立大鼠缺血再灌注动物模型。采用末端标记原位细胞凋亡法检测心肌凋亡细胞 ,并利用光学显微镜进行细胞计数 ;免疫组化法检测 Bcl- 2和 Bax蛋白表达 ,并利用图象分析系统检测二者的平均光密度值 ,进行定量分析。结果显示手术组心肌细胞凋亡数为 37.5 3± 9.2 2个 /视野 ,假手术组 0 .18± 0 .91个 /视野 ,治疗组为 7.6 3± 4.0 5个 /视野。各组间有显著差异 (P<0 .0 5 ) ;手术组 Bcl- 2蛋白平均光密度值为 0 .14± 0 .0 1,假手术组为 0 .0 9± 0 .0 2 ,治疗组为 0 .14± 0 .0 2 ,手术组和治疗组与假手术组相比均有显著差异 (P<0 .0 5 ) ,治疗组与手术组相比无显著差异(P>0 .0 5 ) ;手术组 Bax蛋白平均光密度值为 0 .10± 0 .0 2 ,假手术组为 0 .0 6± 0 .0 1,治疗组为 0 .0 7± 0 .0 1,手术组与治疗组、假手术组相比有显著差异 (P<0 .0 5 ) ,治疗组与假手术组相比无显著差异 (P>0 .0 5 )。结果表明 Carvedilol有显著抗缺血再灌注心肌细胞凋亡作用 ,其作用机制可能与抑制 Bax基因的蛋白表达 ,使 Bcl- 2基因表达的蛋白功能相对增强 ,Bcl- 2     

体外心肌细胞缺血再灌注损伤模型的建立

目的建立体外心肌细胞缺血再灌注(I/R)模型,为研究各种心血管疾病及药物治疗提供基础.方法体外培养新生SD乳鼠心肌细胞,实验分正常组和缺血再灌注组.倒置显微镜及透射电子显微镜下观察心肌细胞缺血再灌注前后的形态变化,MTT、流式细胞术检测细胞凋亡情况,免疫组化和Western Blot检测Bcl-2/Bax基因表达.结果 I/R前后心肌细胞形态发生明显变化.与正常组相比,I/R组心肌细胞凋亡率明显增加,细胞活性降低.免疫组化和Western Blot检测结果均出现I/R后Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bcl-2/Bax显著减小的现象.结论体外培养的心肌细胞I/R损伤各项指标检测与动物体内实验结果相吻合,体外心肌细胞缺血再灌注模型建立成功.     

人参皂甙Rg1对脑缺血再灌注大鼠Fas／Fas—L、Caspase-3表达的影响

通过人参皂甙Rg1对局灶性脑缺血再灌注大鼠膜蛋白（Fas）、膜蛋白配体（Fas—L）、胱天蛋白酶（Caspase-3）表达的影响,探讨人参皂甙Rg1的作用机制。本实验将SD大鼠随机分为假手术组、单纯缺血再灌注组、人参皂甙R1 10、20、40mg．kg^-1组、尼莫地平1mg．kg^-1组,采用大脑中动脉闭塞法建立脑缺血再灌注模型,24h后观察海马CA1区,     

缺血预处理减轻在体家兔心肌细胞凋亡

对麻醉家兔心肌缺血－再灌注（ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ,ＩＲ）模型上,观察ＩＲ和缺血预处理（ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｇｎ,ＩＰ）对血流动力学、心外膜电图、心肌梗塞范围、心肌细胞调亡和调亡相关调控基因蛋白（Ｆａｓ、Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ等）的影响。所得结果如下：⑴在ＩＲ过程中,动脉血压、心率和心肌耗氧量进行性降低;心外膜电图ＳＴ段在缺血期明显抬高（Ｐ＜０．００１）,再灌     

下肢骨骼肌缺血后处理对兔缺血/再灌注心肌坏死和凋亡的影响

目的:探讨在体情况下,骨骼肌缺血后处理对兔缺血/再灌注心肌坏死和凋亡的影响。方法:新西兰大白兔36只,随机分成3组(每组随机选取6只进行梗死范围的测定,另外6只进行凋亡测定):①假手术组(Sham组);②缺血/再灌注组(I/R组);③远端后处理组(RPostC组)。在缺血前、后及再灌注60 min、120 min分别抽血测定肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)的活性。采用伊文思兰(evans blue)和三苯基氯化四氮唑(TTC)染色方法确定心肌缺血区范围以及心肌坏死区范围。用Tunel法检测兔心肌缺血区细胞凋亡情况,免疫组织化学方法检测心肌缺血区蛋白caspase-3、Bcl-2及Bax的表达。结果:RPostC组心肌坏死程度、再灌注末CK活性较I/R组明显减低。RPostC组缺血区心肌Tunel阳性指数显著低于I/R组(21.79%±1.07%vs35.81%±1.10%,P<0.05)。而RPostC组缺血区心肌细胞caspase-3阳性指数显著低于I/R组(25.03%±1.16%vs39%±2.43%,P<0.05)。与Sham组比较,I/R组及RPostC组Bax蛋白表达指数、Bcl-2蛋白表达指数均升高;但RPostC组的Bax/Bcl-2比值降低,而I/R组的Bax/Bcl-2比值升高。与I/R组相比较,RPostC组Bax蛋白表达指数及Bax/Bcl-2比值显著降低,Bcl-2表达指数显著升高,差异均有统计学意义。结论:远端后处理能够明显的减少缺血/再灌注心肌细胞的坏死和凋亡,其减轻心肌细胞凋亡的机制可能与抑制促凋亡基因caspase-3的活化及Bcl-2表达的上调有关。     

乌司他丁对大鼠脑缺血再灌注损伤后的保护作用及其机制研究

目的:探究乌司他丁在脑缺血再灌注损伤中的脑保护作用机制。方法:原代分离培养雄性SD大鼠脑皮质细胞,部分细胞经siRNA沉默HSP70基因。细胞先以无糖培养基在低氧条件下培养,12 h后复糖复氧模拟体外缺血再灌注损伤,并实施乌司他丁预处理干预,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,western-blotting检测Bcl-2,Bax,HSP70,JNK和p-JNK蛋白的表达。结果:与对照组比较,模型组脑组织细胞凋亡率明显增多(P0.05)、Bcl-2和Bax的表达量均有上调,Bcl-2/Bax的比值显著降低(P0.01)、HSP70的表达无显著变化;与模型组比较,乌司他丁处理组脑组织细胞凋亡率明显降低(P0.05)、Bax的表达量显著下调(P0.05),Bcl-2/Bax的比值显著上调(P0.05),HSP70的表达显著上调(P0.05),JNK的表达无显著变化、p-JNK则显著下调(P0.05)。HSP70沉默后乌司他丁的脑保护作用消失,对以上蛋白的表达无显著影响。结论:乌司他丁可能是通过上调HSP70表达进而抑制JNK信号转导通路对缺血再灌注引起的脑损伤起保护作用。     

复方丹参片-维生素C配伍保护大鼠心肌缺血再灌注损伤

急性心肌梗塞（myocardial infarction, MI）是全世界死亡和致残的主要原因。常规心肌缺血再灌注治疗通常伴有缺血-再灌注损伤的发生,这是急性心肌梗塞患者治疗中最大的临床挑战之一。因此,迫切需要开发新型治疗药剂和方法来减轻缺血再灌注的心肌损伤。在此,我们设计了基于丹参片和维生素C的有效联合疗法。将50只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术、模型对照、丹参片、维生素C以及丹参片联合维生素C治疗组（每组10只大鼠）。检测了血液动力学参数、Bcl-2和Bax的表达以及心肌细胞丙二醛（malondialdehyde, MDA）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）的含量。研究结果表明,与单药治疗相比,丹参片联合维生素C治疗组能明显增加左心室收缩压,左心室形成压,左心室内压最大上升速度和心率-收缩压乘积;同时,它降低了左室舒张末压和心率。进一步机制研究表明,复方丹参片-维生素C配伍可通过上调Bcl-2和下调Bax基因表达,抑制心肌缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡。联合疗法还能调控心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛（MDA）的含量,从而抑制机体内脂质过氧化。这些研究结果为逆转缺血再灌注损伤治疗提供新的策略,并为进一步研究基于丹参片和维生素C的联合治疗提供了实用建议。     

Calcium-sensing receptors induce apoptosis in cultured neonatal rat ventricular cardiomyocytes during simulated ischemia/reperfusion

Calcium-sensing receptors (CaSRs) are G-protein coupled receptors which regulate systemic calcium homeostasis and also participate in cell proliferation, differentiation and apoptosis. We have previously shown that CaSR can induce apoptosis in isolated rat adult hearts and in normal rat neonatal cardiomyocytes. However, no knowledge exists concerning the role of CaSR in apoptosis induced by ischemia and reperfusion in neonatal cardiac myocytes. Therefore, in the present study, we incubated primary neonatal rat ventricular cardiomyocytes in ischemia-mimetic solution for 2h, then re-incubated them in a normal culture medium for 24h to establish a model of simulated ischemia/reperfusion (I/R). We assayed the apoptotic ratio of the cardiomyocytes by flow cytometry; observed morphological alterations by transmission electron microscope; analyzed the expression of caspase-3, Bcl-2, CaSR, extracellular signal-regulated protein kinase (ERK), and Fas/Fas ligand (FasL) by Western blotting; and measured the concentration of intracellular calcium by Laser Confocal Scanning Microscopy. The results showed that simulated I/R increased the expression of CaSR and cardiomyocyte apoptosis. GdCl3, a specific activator of CaSR, further enhanced CaSR expression, along with increases in intracellular calcium and apoptosis in cardiomyocytes during I/R. Activation of CaSR down-regulated Bcl-2 expression, up-regulated caspase-3 and Fas/FasL expression and stimulated ERK1/2 phosphorylation. In summary, CaSR is involved in I/R injury and apoptosis of neonatal rat ventricular cardiomyocytes by inhibiting Bcl-2, inducing calcium overload and activating the Fas/FasL death receptor pathway.     

缺氧环境下大鼠骨髓间充质干细胞凋亡相关蛋白和mRNA的表达

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）在缺氧环境下凋亡相关蛋白和mRNA的表达。方法将接种的P3细胞置于94％N2、1％O2和5％CO2缺氧箱中37℃孵育,分别于0．5h、1h、2h、4h、6h、8h和12h取出分别应用Annexin V／PI双染法进行流式细胞仪（FCM）分析MSCs凋亡率（Apoptotic Rate,AR）,并同步用免疫细胞化学、western blotting和Rt-PCR等方法检测Bax／Bcl-2,Fas／FasL和Caspase-3蛋白和mRNA的表达。结果1．缺氧前,免疫细胞化学法未检测到Bcl-2、Bax、Fas、FasL和Caspase-3蛋白表达,缺氧0．5h后均可较强表达;2．各缺氧时间点Bcl-2、Bax、Fas、FasL、Caspase-3蛋白和mRNA表达较缺氧前均显著性增高（P均〈0．05）;随缺氧时间延伸,Bcl-2蛋白和mRNA表达不显著增加（P〉0．05）,而Bax、Fas、FasL、Caspase-3蛋白和mRNA表达均显著增加（P均〈0．05）,但缺氧6-12h时间点之间表达均没有统计学意义（P均〉0．05）;3．AR和Bcl-2／Bax蛋白（r1=0．417,P=0．043）及mRNA（r2=-0．435,P=0．040）呈显著负相关,而和Fas（r1=0．639,P=0．025;r2=0．711,P=0．018）、Fas-L（r1=0．581,P=0．022;r2=0．605,P=0．037）、Caspase-3（r1=0．704,P=O．014;r2=0．657,P=0．026）蛋白及mRNA均呈显著正相关。结论在缺氧促进MSCs凋亡的过程中,Bcl-2蛋白和mRNA可能起着保护作用,而Bax、Fas-L、Fas、Caspase-3蛋白和mRNA可能在MsCs凋亡的进程中起着促进作用。     

线粒体通透性转换孔在缺血预处理脑保护中的作用及机制

目的：线粒体通透性转换孔通透性改变是导致缺血再灌注损伤的原因,线粒体功能的致命性改变最终引起细胞凋亡,本研究旨在观察线粒体通透性转换孔（mitochondrial permeability transition pore,MPTP）在缺血再灌注及缺血预处理脑保护中的作用;方法：将体外培养8天的海马神经元细胞分为五组,正常对照组（A组）,缺血再灌注组（B组）,缺血预处理＋缺血再灌注组（C组）,苍术苷＋缺血再灌注组（D组）,缺血预处理＋苍术苷＋缺血再灌注组（E组）。使用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,罗丹明123染色流式细胞术检测线粒体膜电位,Western-blot检测Bcl-2,Bax的表达。结果：与A组比较,其余四组线粒体膜电位均降低,神经元凋亡率升高（P〈0．05）;与B组比较,c组线粒体膜电位升高,神经元凋亡率升高,Bcl-2表达上调,Bax表达下调（P〈0．05）;与c组比较,E组粒体膜电位降低,神经元凋亡率升高,Bcl．2表达下调,Bax表达上调（P〈0．05）。结论：我们在细胞及分子生物学水平对MPTP及缺血预处理的研究后发现,缺血预处理能有效减轻海马神经元缺血再灌注损伤,抑制缺血再灌注后神经细胞凋亡,其机制与抑制MPTP的开放有关。