自体骨髓干细胞移植联合奥扎格雷对糖尿病足的临床疗效探究

目的探讨自体骨髓干细胞移植联合奥扎格雷对糖尿病足（DF）的临床疗效。 方法选取2017年7月至2018年8月期间于重庆市大渡口区人民医院收治的99例DF患者为研究对象,随机分为奥扎格雷组、移植组与联合组3组各33例。全部患者入院后均给予DF的常规治疗,奥扎格雷组、移植组、联合组分别给予奥扎格雷、自体骨髓干细胞移植、自体骨髓干细胞移植联合奥扎格雷,比较干预前、干预后12周的临床症状体征、DF严重程度、生存质量的变化,以及干预后12周的新生侧支血管的分级情况。定性资料采用χ²检验或Wilcox秩和检验,定量资料组内干预前后比较采用配对t检验,多组比较先采用方差分析,然后采用Tukey检验进行两两比较。采用Pearson相关系数探讨截肢组患者生活质量评分的相关因素。 结果3组患者干预前的基线资料、疼痛、冷感、间歇性跛行的评分、踝肱指数（ABI）、Wagner分级、糖尿病特异性生活质量量表（DSQL）各维度评分与总分比较,差异无统计学意义（P > 0.05）,具有可比性。组内比较,3组干预后的疼痛、冷感、间歇性跛行的评分、DSQL生理功能、心理（精神）因素、社会关系等维度评分与总分均低于干预前,Wagner分级、ABI优于干预前,差异有统计学意义（P < 0.05）。组间比较,联合组干预后的疼痛、冷感、间歇性跛行的评分、DSQL生理功能、心理（精神）因素等维度评分与总分分别为0.83±0.36、0.83±0.31、1.36±0.63、8.9±3.2、7.5±2.5、23.7±9.2,均低于奥扎格雷组的1.13±0.39、1.26±0.59、1.89±0.73、12.5±5.2、10.1±3.1、31.7±8.8及移植组的1.08±0.33、1.11±0.55、1.72±0.60、10.9±3.6、9.3±3.3、28.8± 7.6,差异有统计学意义（F = 5.001、5.598、3.953、2.230、9.610,P均< 0.05）。联合组干预后的ABI为0.55±0.21,高于奥扎格雷组的0.43±0.20及移植组的0.42±0.16,差异有统计学意义（F = 4.051,P < 0.05）。联合组干预后的社会关系维度评分、Wagner分级为1级的比例分别为5.0±2.1、81.8%,高于奥扎格雷组的6.3±2.3、54.5%,差异有统计学意义（F = 3.953,χ²= 6.983,P均 < 0.05）。观察组干预后的新生侧支血管分级优于奥扎格雷组,差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论自体骨髓干细胞移植联合奥扎格雷能缓解DF患者的临床症状,促进溃疡愈合,促进移植术后的血管新生,提高生存质量,值得临床推广应用。     

一种预包装无渣流食对结肠镜检查患者肠道准备效果影响的随机对照研究

目的：观察一种预包装无渣流食与传统低渣饮食比较对结肠镜检查患者肠道准备效果的影响,为其作为肠道准备代餐提供临床研究依据。方法：采用随机对照干预研究,2019年11月-2020年1月解放军总医院门诊招募73名拟行无痛结肠镜检查的患者,随机分为饮食组（n=36例,检查前2日均低渣饮食）和代餐组（n=37例,检查前天低渣饮食+前1天预包装无渣流食）,比较两组检查前2日膳食营养素摄入情况和饥饿程度评分、Boston肠道准备量表（BBPS）评分、结肠镜操作时间及息肉检出率。结果：共70例受试者完成研究（饮食组35例、代餐组35例）;代餐组肠镜检查前2日蛋白质、脂肪及膳食纤维平均摄入量显著低于饮食组（P<0.05）;代餐组Boston总评分（6.49±1.12）显著高于饮食组（5.71±1.18）,且在盲肠和升结肠、降结肠到直肠部位Boston评分（2.09±0.45、2.29±0.46）均显著高于饮食组（1.80±0.47、1.90±0.54）（P<0.05）;肠道准备优良率（BBPS总评分≥8分）代餐组显著高于饮食组,且肠镜检查操作时间显著低于饮食组（P<0.05）;两组肠镜结肠息肉检出率在各部位无显著性差异（P＞0.05）,但代餐组结肠息肉总检出率（54.29%）显著高于饮食组（20.00%）（P<0.05）。结论：结肠镜检前进食预包装无渣流食较传统低渣饮食能够显著改善肠道准备效果,提高结肠息肉总检出率。     

益生菌对肥胖儿童和青少年非酒精脂肪肝的影响

目的：评估益生菌对非酒精性脂肪肝的生化指标及超声分级的影响。方法：回顾性分析64例非酒精性脂肪肝肥胖患者三盲试验。患者随机分为2组,分别服用益生菌制剂或安慰剂,治疗3疗程。结果：益生菌组,谷丙转氨酶平均水平从32.8±19.6U/L下降至23.1±9.5 U/L（P=0.002）,天冬氨酸转氨酶平均水平从32.2±15.7U/L下降至24.3±7.7U/L（P= 0.002）,患者的胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯以及腰围显著降低,而体重、身体质量指数、体重指数z评分没有显著改变;安慰剂组,研究前后各项指标无显著变化,无统计学差异。肝超声分级,益生菌组转阴17例（53.12%）、安慰剂组转阴5例（15.62%）。结论：益生菌可以有效地改善肥胖儿童非酒精性脂肪肝病症。     

异种脱细胞真皮基质联合丝素蛋白辅料对幼儿Ⅱ度烫伤的临床疗效研究

目的分析异种脱细胞真皮基质联合丝素蛋白辅料对幼儿Ⅱ度烫伤的治疗效果。 方法随机选择湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院104例Ⅱ度烫伤患儿,采用随机数字表法分为对照组（丝蛋白敷料覆盖）和试验组（异种脱细胞真皮基质联合丝蛋白敷料覆盖）,每组52例。实验结果中计量资料用 ±s表示,组间比较采用两样本t检验,治疗前后比较采用配对t检验;计量资料采用百分比表示,比较采用χ²检验,疼痛程度采用Z检验。 结果试验组患儿换药次数（2.87±0.98）?次、完全溶痂时间（8.26±3.18）d、温哥华评分（4.25±0.87）分,对照组分别为（5.64±1.02）次、（12.38± 3.02）d、（8.12±1.04）分,差异均有统计学意义（t = 14.121,6.775,20.582,P均< 0.001）。试验组患儿浅Ⅱ度创面感染率0.00%、愈合时间（8.53±1.49）d,对照组患儿分别为17.31%、（10.61±2.05） d,差异均有统计学意义（χ² = 9.853,P = 0.002,t = 5.918,P < 0.001）。试验组患儿深Ⅱ度创面感染率5.77%、愈合时间（12.90±1.64）d,对照组患儿分别为34.62%、（15.45±1.49）d,差异均有统计学意义（χ² = 13.425,P < 0.001,t = 8.299,P < 0.001）。治疗后比较,试验组患儿创面周围炎症评分（1.91±0.48）分、创面渗出物评分（2.86±0.45）?分,对照组患儿分别为（1.33±0.37）分、（2.09±0.53）分,差异有统计学意义（t = 6.901,7.986,P均?< 0.001）。试验组患儿疼痛程度与对照组比较,差异有统计学意义（Z = 41.657,P < 0.001）。 结论采用异种脱细胞真皮基质联合丝蛋白敷料覆盖治疗Ⅱ度烫伤患儿,可减少术后感染,缩短痊愈时间,降低疼痛程度,疗效优势明显。     

IL-12重组质粒联合骨髓间充质干细胞对MCF-7人乳腺癌细胞侵袭及裸鼠移植瘤生长的影响分析

目的探讨IL-12重组质粒联合骨髓间充质干细胞（BMSC）对MCF-7人乳腺癌细胞侵袭及裸鼠移植瘤生长的影响。 方法分离纯化培养BMSC原代细胞,制备BMSC条件培养基,分析BMSC条件培养基对MCF-7细胞株体外增殖和凋亡的影响;建立裸鼠MCF-7转移瘤模型,分为对照组、BMSC组、IL-12组以及联合组,各组每3 d进行一次瘤内注射,共注射3次,15 d后处死裸鼠,比较各组裸鼠肿瘤、脾脏重量。采用χ²检验、t检验以及方差分析进行统计学分析。 结果BMSC条件培养基能够抑制MCF-7细胞增殖,且随着作用时间的延长其抑制作用升高[24 h（13.42±1.93）%,48 h（16.83±1.77）%,72 h（20.21±2.01）,F = 6.271,P = 0.000]。BMSC条件培养基处理MCF-7细胞,可有效促进MCF-7细胞凋亡,且随着作用时间的延长细胞凋亡率升高[24 h（10.82±2.18）%,48 h（18.73±2.95）%,72 h（28.15±3.52）%,F = 9.215,P = 0.000]。与对照组裸鼠肿瘤体积[1 d（124.12±9.28）mm³,3 d（582.41±17.28） mm³,7 d（983.42±42.10） mm³,15 d（793.46±109.38） mm³]比较,BMSC组[1 d（132.61±12.41） mm³,3 d（378.46±23.08） mm³,7 d（542.61±58.49）mm³,15 d（329.48±47.51） mm³]、IL-12组[1 d（119.85±13.10） mm³,3 d（322.75±26.49） mm³,7 d（518.37±67.54）mm³,15 d（302.17±68.53） mm³]以及联合组[1 d（123.41±8.94）mm³,3 d（217.85±24.03）mm³,7 d（318.29±47.32） mm³,15 d（189.27±37.58）mm³]裸鼠肿瘤体积生长速度均减慢,差异具有统计学意义（F_1d=0.827,F_3d=37.583、F_7d=31.472、F_15d=15.372,P < 0.001）;处死各组裸鼠后裸鼠肿瘤质量比较,BMSC组[（529.42±98.74） mg]、IL-12组[（544.01±117.85）mg]以及联合组[（327.55±78.56） mg]均低于对照组[（877.42±120.11）mg],且联合组裸鼠肿瘤质量最低,差异具有统计学意义（F = 10.821,P < 0.001）;而裸鼠脾指数BMSC组（7.58±1.21）、IL-12组（7.63±1.09）以及联合组（10.03±1.52）均高于对照组（5.37±0.89）,联合组裸鼠脾质量最高,差异具有统计学意义（F = 13.411,P < 0.001）。 结论BMSC在体内外均具有抑制MCF-7肿瘤增殖作用,联合使用pcDNA6/IL-12对裸鼠MCF-7转移瘤抑制具有着明显的协同作用。     

白藜芦醇对去卵巢大鼠抗氧化能力的影响

目的：探讨白藜芦醇（RES）对去卵巢大鼠抗氧化能力影响。方法：48只SD大鼠随机分为6组,分别为假手术组、去卵巢组、己烯雌酚（DES,0.03mg/kg）、RES 5、15、45mg/kg组,处理90d,观察各组大鼠血清总超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）在实验中期和末期的变化。结果：实验45d和90d,白藜芦醇各组的总SOD活力（分别为210.41±5.78、200.98±12.25、211.84±9.47和179.32±4.86、182.02±8.66、182.08±8.81NU/mL）高于模型组（分别为178.84±10.41、164.60±9.64NU/mL）,差异有统计学意义（P＜0.05）,但均低于假手术组（分别为231.30±12.43、227.96±6.22NU/mL）（P＜0.05）。血清MDA含量（分别为2.86±0.55、2.76±0.34、2.64±0.67和3.81±0.45、3.60±0.66、3.27±0.41nmol/mL）则都显著低于模型组（分别为4.11±0.66、4.72±0.73nmol/mL）（P＜0.05）,而与假手术组无统计学差异（分别为2.70±0.64、3.43±0.35nmol/mL）（P＞0.05）。各组SOD和MDA实验45d与90d前后比较,变化均具有统计学意义（P＜0.05）。结论：白藜芦醇可增加去卵巢后大鼠血清中SOD活力,减少MDA浓度。     

柔性辟谷技术改善高血压的初步研究

目的：研究柔性辟谷技术对高血压患者血压、体重、体质量指数（BMI）等指标的影响,评价该技术在协助改善高血压症状中的应用价值。方法：本研究共招募30名高血压志愿者,研究过程分三个时期,即柔性辟谷前期、中期、后期各7d,每天均详细监测患者的收缩压/舒张压、BMI、体重、腰围等指标。进行柔性辟谷操作（中期）的七天时间内,以特殊益生元代餐进行柔性辟谷技术干预。测试均采用自身对照并进行统计学分析。结果：所有高血压患者在柔性辟谷测试过程中的血压、BMI、体重、腰围均出现预期性下降。经过柔性辟谷干预,志愿者的收缩压（118.40±5.92mmHg比干预前125.30±12.05mmHg）、舒张压（75.56±2.32mmHg比干预前77.25±4.72mmHg）、BMI（27.53±4.74比干预前29.47±4.99）、体重（76.31±16.95kg比干预前81.71±18.04kg）,腰围（101.40±9.49cm比干预前103.6±9.35cm）均显著下降。测试期间所有志愿者均无明显主观不适和体征。结论：柔性辟谷技术有望成为协助改善高血压症状的一种有效方法。     

综合营养干预对改善2型糖尿病患者血脂、血糖效果评价研究

目的：了解综合营养干预对2型糖尿病患者血脂、血糖的影响。方法：选取前往医院就诊的2型糖尿病患者98人,随机分为干预组（49人）、对照组（49人）。对干预组人群开展为期6个月的膳食指导和符合营养制剂补充的综合营养干预,对照组不采取相应干预措施。结果：同基线数据相比干预组人群体重、甘油三酯、总胆固醇均有降低,对照组分别增加0.1±2.6kg、0.1±0.9mmol/L、0.5±3.3mmol/L,差异无统计学意义;干预组空腹血糖、餐后0.5h血糖、餐后1h血糖、餐后2h血糖变化值分别为-0.5±2.5、-0.8±3.1、-0.7±4.1、-0.5±4.7mmol/L,对照组分别为0.2±1.9、1.2±2.8、0.5±3.4、-0.7±4.0mmol/L。结论：综合营养干预对2型糖尿病患者血糖异常可起到一定程度的改善作用。     

圈养林麝麝香分泌时间节律及影响因素

在2016年和2017年的5—8月,我们对川西马尔康麝场圈养林麝（Moschus berezovskii）的麝香分泌进行了行为与生理监测,对麝香分泌的各阶段进行了准确判定,记录了泌香启动、泌香盛期开始、泌香盛期终止及泌香结束的时间阶段及持续时间长,分析了林麝麝香分泌的时间阶段与体重和年龄等因素的关系。结果表明,马尔康麝场的雄性林麝平均泌香启动日在6月16日[（167.06±7.75）d,n=141],于6月17日进入泌香盛期[（168.52±7.67）d,n=141],6月21日[（172.17±7.26）d, n=138]泌香活动减弱,至6月25日[（176.27±8.11）d, n=131]泌香结束;雄麝体重与其泌香启动、泌香盛期停止及泌香结束时间呈显著负相关（r_PS = -0.234,P_PS =0.028;r _VSF = -0.215,P_VSF = 0.047;r _SE = -0.229,P_SE = 0.043）,即雄麝的体重越大,其泌香越早;各年龄组间的平均泌香时长差异显著（F _{17, 113} = 3.482, P = 0.003）,其中2岁雄麝平均泌香时长最长[（13.07±2.08）d, n=20],显著高于3岁[（9.38±0.76）d, n=12, P = 0.042]和4岁[（7.80±1.60）d, n=5, P = 0.013]个体;马尔康林麝平均泌香量为（11.85g±0.96）g, （n=114）,随泌香时长延长有增加趋势,但不显著（P = 0.854）。基于上述林麝雄体的泌香时间、泌香量与年龄和体重等因素间的关联,可对圈养的林麝个体间的泌香力、泌香量等进行区分和预判,作为圈养林麝驯养生产力优化的依据,并可为圈养林麝优质品系的选育提供参考。     

循环内皮微粒相关microRNA在巨噬细胞炎性反应诱发动脉粥样硬化发生中的作用机制

目的研究循环内皮微粒相关microRNA在巨噬细胞炎性反应诱发动脉粥样硬化（AS）发生的作用机制。 方法选取实验组和对照组SPF级5周小鼠各50只。实验小鼠分4组：对照组、动脉粥样硬化模型组（AS模型组）、NC-miRNA组和miRNA-19b抑制剂组,采用油红染色对AS病变的组织学进行观察,计算斑块面积相对比例,并检测生化指标的表达水平,主要包括血清中高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和甘油三酯（TG）,ELISA检测血管炎症因子TNF-α、IL-1、IL-6和IL-10的变化,Western Blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、cleaved-caspase-3和Bax表达的变化,实时荧光定量PCR检测miR-19b表达,流式细胞法检测巨噬细胞的凋亡率。多组间比较采用单因素方差分析或者重复测量的方差分析,两两比较采用LSD-t检验。 结果各组胸腔动脉斑块面积百分比：对照组为（0.00±0.00）%;AS模型组为（9.59±6.53）%;NC-miRNA组为（8.96±3.47）%;miRNA-19b抑制剂组为（3.21±2.03）%,三组间比较差异有统计学意义（F = 20.572,P = 0.002）。与对照组比较,AS模型组和NC-miRNA组TC[AS模型组（3.26±0.21）mmol/L;NC-miRNA组（3.13± 0.14）mmol/ L;F = 13.994,P = 0.002]、TG[AS模型组（0.25±0.06）mmol/L;NC- miRNA（0.21±0.02）mmol/L;F = 11.230,P = 0.011）]和LDL-C [AS模型组（1.65±0.11）mmol/ L;NC-miRNA （1.59± 0.27）mmol/L;F = 10.069,P = 0.006）]水平升高,而HDL-CAS模型组[（0.08±0.09）mmol/L;NC-miRNA （0.08±0.05）mmol/L;F = 12.450,P = 0.004）]水平含量降低。与模型组比较,miRNA-19b抑制剂组TC（1.85±0.06）mmol/L、TG（0.15±0.03）mmol/ L和LDL-C（1.21±0.10）mmol/L水平降低,HDL-C （0.11±0.05）mmol/L水平则升高（P均< 0.05）。AS模型组与对照组相比,IL-1（34.06±3.58）g/L、IL-6（92.57±31.97）g/L和TNF-α（63.01±15.65）g/L水平升高,而IL-10（16.86±1.29）g/L的水平降低,NC-miRNA组各指标亦有相同的变化趋势;miRNA-19b抑制剂组IL-1（24.85±6.21）g/L、IL-6（53.29±17.15）g/ L和TNF-α（34.51±6.47 ）g/L水平低于AS模型组和NC-miRNA组（F = 13.671,P = 0.002）,IL-10（24.94±4.72）g/L的水平则高于两组（F = 13.675,P = 0.008）。和对照组相比,AS模型组和NC- miRNA组的Bax（AS模型组3.39±0.01;NC-miRNA组0.64±0.02;F = 26.910,P = 0.000）和cleaved-PARP （AS模型组2.47±0.05;NC- miRNA组3.27±0.01;F = 13.226,P = 0.000）表达量升高。但Bcl-2（AS模型组0.67±0.02;NC-miRNA组0.64±0.02;F = 12.585,P = 0.000）表达水平下调。与NC- miRNA组相比,miRNA-19b抑制剂组的促细胞凋亡的蛋白Bax（2.16±0.02）和cleaved-PARP（1.91±0.04）表达水平下调,Bcl-2（1.05±0.01）的表达水平上调。与对照组比较,AS模型组（2.71±0.02）和NC-miRNA组（2.43±0.02）的miRNA- 19b的转录水平增加,差异有统计学意义（P均< 0.05）,miRNA-19b抑制剂组（1.52±0.01）转录水平有升高,但相较于AS模型组和NC-miRNA组的变化其增加量不显著,（F = 15.353,P = 0.002）。miRNA-19b基因转录水平：对照组为1.02±0.03;AS模型组为2.71±0.02;NC- miRNA组为2.43±0.02;miRNA- 19b抑制剂组为1.52±0.01（P均 < 0.05）。细胞凋亡率：对照组为（4.41±0.18）%;AS模型组为（7.16±0.73）%;NC-miRNA组为（6.29±0.24）%;miRNA-19b抑制剂组为（5.01±0.11）%,（F = 12.889,P = 0.008）。 结论miRNA-19b抑制剂可以减少巨噬细胞的凋亡,降低促炎症因子,可减少由于AS引起的血管厚度的增加,减少AS斑块的面积比例,使血脂中的TC、TG和LDL-C水平降低,HDL-C水平则有升高,这对冠心病的临床诊疗具有重要的临床指导意义。     

间歇式轴向压应力对组织工程骨种子细胞的黏附增殖与成骨分化促进作用的研究

目的探究间歇式轴向压应力对组织工程骨种子细胞黏附、增殖与成骨分化能力的影响。 方法构建表达绿色荧光蛋白的兔骨髓间充质干细胞（rBMSCs）作为示踪种子细胞,运用旋转细胞培养仪将松质骨支架和种子细胞共培养7 d获得组织工程骨（TEB）,实验组在第7 ~ 14天施加大小10 N、频率1 Hz、4 h/d的间歇式轴向压应力刺激,对照组常规培养,14 d后胰酶消化法获取两组种子细胞并比较其黏附、增殖和成骨分化能力。采用两组独立样本t检验进行统计学分析。 结果（1）流式细胞术显示rBMSCs被成功提取分离。（2）倒置荧光显微镜及扫描电镜显示TEB中种子细胞与支架相容性良好。（3）活体荧光成像系统及扫描电镜显示应力刺激组种子细胞的生长状况要优于非应力刺激组,前者平均荧光密度及细胞数/500倍视野均大于后者,差异均具有统计学意义（平均荧光密度：（3.75±0.34）×10⁸ vs （2.91±0.22）×10⁸,t = 2.90,P = 0.04;细胞数/500倍视野：30.50±4.43 vs 21.00±5.13,t = 3.14,P = 0.01）。（4）细胞黏附实验显示,应力刺激组种子细胞的75%细胞贴壁时间短于非应力刺激组,两组时间分别为（3.00±0.41）h、（13.33±1.70）h,差异具有统计学意义（t = 8.20,P < 0.01）,前者的最终细胞贴壁率高于后者（99.97%±0.34% vs 85.83%±1.18%）,差异具有统计学意义（t = 11.31,P < 0.01）。（5）CCK-8检测显示,在培养第48 ~ 96 h,应力刺激组种子细胞的增殖能力优于非应力刺激组,将两者的450 nm吸光度值在第48小时（0.49±0.02、0.40±0.02）、72 h（0.76±0.07、0.64±0.04）和96 h（1.58±0.07、1.34±0.13）分别进行比较,差异均具有统计学意义（t = 5.15、2.57、2.86,P均< 0.01）。（6）在成骨诱导14 d后,应力刺激组种子细胞的ALP和Ca结节染色阳性率要强于非应力刺激组：两组ALP染色阳性率分别为26.73%±4.56%、16.68% ± 3.89%,差异具有统计学意义（t =3.33,P = 0.03）;两组Ca结节染色阳性率分别为41.81%±3.56%、27.40% ± 2.35%,差异具有统计学意义（t = 3.68,P = 0.02）。 结论间歇性轴向压应力可促进组织工程骨种子细胞的黏附、增殖与成骨分化。     

两种不同营养配方预进餐对2型糖尿病住院患者血糖影响研究

目的：比较低血糖指数（GI）全营养素与高蛋白营养素2种不同营养配方预进餐对2型糖尿病患者血糖控制效果的影响。方法：回顾性分析115例2型糖尿病患营养治疗记录,其中高蛋白营养素治疗组31例为高蛋白组、低GI全营养素治疗组39例为低GI组、无肠内营养治疗干预组45例为对照组,每组都进行糖尿病饮食指导、教育并编制糖尿病膳食食谱。观察比较3组患者营养干预前,营养干预后第1d、第3d、第7d的空腹、餐后2h血糖控制情况。结果：与对照组相比,高蛋白组与低GI组空腹血糖在干预前后均没有明显差异,无统计学意义（P＞005）;餐后2h血糖在干预前、第1d没有差异,无统计学意义（P＞005）,而在第3d、第7d血糖明显下降,有统计学意义（P＜005）。与低GI组相比,高蛋白组空腹血糖和餐后2h血糖干预前后均没有明显差异,无统计学意义（P＞005）。结论：不同营养配方预进餐有利于2型糖尿病患者血糖控制,尤其是餐后2h血糖控制,2种营养配方控制血糖效果相似。     

高糖通过诱导自噬障碍促进心肌细胞H9c2凋亡

目的探讨自噬对高糖（HG）诱导的心肌细胞H9c2凋亡的影响。 方法MTT法检测H9c2细胞活力;hoechst33258染色法检测凋亡细胞;Western Blot检测H9c2细胞促凋亡蛋白Bax和自噬相关蛋白（Beclin-1和P62）的表达。各组的OD值和蛋白条带灰度值均采用析因设计的方差分析,各组间差异用单因素ANOVA分析。 结果HG能诱导H9c2细胞活力降低：12、24、48 mmol/L的HG细胞活力分别为Control组（100%）的[（79.5±2.23）%]（t = 3.143,P = 0.043）、[（54.6±3.08）%]（t = 12.425,P = 0.000）和[（37.2±2.59）%]（t = 13.761,P = 0.000）;与Control组（100%）比较,甘露醇等渗对照组的细胞活力值为[（101.0±1.27）%]（t = 0.012,P = 0.094）。HG诱导H9c2细胞hoechst33258阳性细胞增加,且能诱导促凋亡蛋白Bax表达增加：与Control组比较,12、24、48 mmol/L的HG处理组凋亡蛋白Bax/β-actin灰度值分别为（1.29±0.25,t = 2.32,P = 0.045）、（1.42±0.23,t = 10.247,P = 0.000）和（1.81±0.29,t = 16.324,P = 0.000）。HG诱导自噬障碍：与Control组比较,自噬相关蛋白Beclin-1/β-actin灰度值分别为（0.82±0.16,t = 4.243,P = 0.032）、（0.78±0.19,t = 11.341,P = 0.000）和（0.62±0.11,t = 13.455,P = 0.000）,P62蛋白/β-actin蛋白灰度值分别为（1.29±0.25,t = 4.442,P = 0.014）、（1.42±0.23,t = 13.341,P = 0.000）和（1.81±0.29,t = 15.851,P = 0.000）。自噬诱导剂雷帕霉素可逆转HG诱导的hoechst33258阳性细胞增加,且逆转HG诱导的Bax表达升高：与control组比较,HG组、HG和雷帕霉素共处理组、雷帕霉素组的Bax/β-actin灰度值分别为（1.51±0.31,t = 14.342,P = 0.000）、（1.42±0.23,t = 9.621,P = 0.004）和（1.81±0.12,t = 0.172,P = 0.124）。 结论HG可促进心肌细胞H9c2凋亡,且能诱导自噬障碍,自噬诱导剂的运用逆转了HG对H9c2细胞的凋亡作用,表明自噬障碍是HG诱导H9c2细胞凋亡的重要机制。     

支架材料对棕色脂肪源性干细胞向起搏细胞诱导分化的影响

目的观察不同三维支架材料对棕色脂肪来源干细胞（BADSCs）诱导分化成起搏细胞的效果,为构建生物起搏器提供实验依据。 方法将培养7 d的原代BADSCs分别种植到胶原海绵、明胶海绵和透明质酸水凝胶3种不同的材料中,在不同时间用光镜和扫描电镜观察细胞-支架复合体中细胞形态学的变化,免疫荧光染色检测心肌细胞、起搏细胞相关蛋白的表达。采用单因素方差分析。 结果细胞在3种支架上均能存活、增殖,LIVE/DEAD检测显示,培养3 d的胶原海绵、明胶海绵和透明质酸水凝胶3种细胞-支架复合物死细胞率分别为（46.35±1.50）%、（47.00±1.60）%和（1.76±1.08）%,其中细胞在透明质酸水凝胶中死亡率最低,并且细胞-透明质酸水凝胶复合物可自发性地搏动,三组比较差异具有统计学意义（F = 37.56,P < 0.05）。培养至2周时,胶原海绵、明胶海绵和透明质酸水凝胶中Connexin45细胞阳性率分别为（10.67±1.25）%、（13.67±1.25）%和（21.00±1.60）%,差异有统计学意义（F = 9.435,P < 0.01）,HCN2细胞阳性率分别为（11.00±1.60）%、（14.00±2.16）%和（34.33±3.68）%,差异有统计学意义（F = 17.52,P < 0.01）,HCN4细胞阳性率分别为（18.67±2.05）%、（13.00±1.60）%和（66.00±2.94）%,差异有统计学意义（F = 27.96,P < 0.01）,Sr细胞阳性率分别为（13.00±1.63）%、（14.33±1.24）%和（75.33±3.30）%,差异有统计学意义（F = 36.40,P < 0.01）,水凝胶中Connexin45、HCN2、HCN4和Sr的细胞阳性率均高于胶原海绵和明胶海绵,差异均具有统计学意义（P < 0.05）。 结论BADSCs在胶原海绵、明胶海绵和透明质酸水凝胶中均能很好地生长和分化,但透明质酸水凝胶更适用于组织工程化起搏器的构建。     

miR-214通过调控Notch1信号对口咽鳞状细胞癌细胞株增殖、侵袭及凋亡的作用机制研究

目的研究miR-214通过调控Notch1信号对口咽鳞状细胞癌（OSCC）细胞株增殖、侵袭及凋亡的作用机制。 方法在ATCC细胞库购买OSCC细胞株,分为3组：抑制组（IN组）、模拟组（SI组）及对照组（CO组）。通过Western blot法、qRT-PCR法、TUNEL法、侵袭实验及CCK-8法分析3组癌细胞中Notch1的蛋白、mRNA表达水平、细胞凋亡、迁移及增殖能力的差异性,三组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果IN、SI、CO组细胞内miR-214mRNA表达量分别为1.15±0.26,3.34±0.89,2.08±0.67,SI组分别与IN组、CO组比较,差异具有统计学意义（t = 5.281,P = 0.002;t = 2.529,P = 0.045）;SI组、IN组的Notch1-UTR表达分别为0.42±0.11、0.86±0.09,差异具有统计学意义（t = 5.362,P = 0.006）;IN、SI、CO组的OSCC细胞凋亡率分别为（0.78±0.10）﹪、（0.32±0.06）﹪、（0.56±0.12）﹪,IN组分别与CO组、SI组比较,差异具有统计学意义（t = 3.149,P = 0.020;t = 8.823,P < 0.001）;IN、SI、CO组癌细胞的增殖率分别为（0.65±0.05）﹪、（1.26±0.06）﹪、（1.89±0.04）﹪,IN组与SI组、IN组与CO组比较,差异具有统计学意义（t = 11.056,P < 0.001;t = 27.394,P < 0.001）,CO组与SI组比较,差异具有统计学意义（t = 12.365,P < 0.001）;IN、SI、CO组癌细胞侵袭率分别为（0.13±0.02）﹪、（0.89±0.13）﹪、（0.48±0.11）﹪,SI组与CO组、SI组与IN组比较,差异具有统计学意义（t = 4.176,P = 0.006;t = 10.147,P < 0.001）;IN、SI、CO组的Notch1蛋白含量分别为：2.38±1.34、0.94±0.23、1.76±0.67,SI组与CO组、SI组与IN组比较,差异具有统计学意义（t = 2.588,P = 0.041;t = 2.368,P = 0.056）;IN、SI、CO组的Notch1 mRNA表达量分别为4.26±1.06、1.45±0.38、2.46±0.87,IN组与CO组、IN组与SI组比较,差异具有统计学意义（t = 2.935,P = 0.026;t = 5.583,P = 0.001）。 结论miR-214可能与OSCC细胞株增殖呈负相关,在细胞中miR-214含量升高,可能抑制Notch1信号通路表达,从而促进癌细胞增长、侵袭,抑制癌细胞凋亡。     

骨髓间充质干细胞对重症急性胰腺炎胰腺组织修复的促进作用研究

目的观察骨髓间充质干细胞（BMSCs）抑制坏死性凋亡促进修复重症急性胰腺炎（SAP）的可能机理。 方法（1）分离、培养和鉴定大鼠BMSCs;（2）构建牛磺胆酸钠（NaT）诱导的SAP大鼠模型,并分成正常组（NC）、假手术组（Sham）、SAP模型组（SAP）、PBS治疗组（PBS）、BMSCs治疗组和Necrostain-1 （Nec-1）治疗组,并检测胰腺病理评分和血淀粉酶水平;（3）运用Western Blot和qRT-PCR方法检测各组受损胰腺组织内RIPK1、RIPK3、Caspase-8、MLKL蛋白及mRNA表达,各组均数间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。 结果BMSCs可以被诱导分化成骨、软骨、脂肪,并高表达CD44 （99.82﹪）、CD73 （99.87﹪）、CD90 （99.99﹪）、CD105 （99.78﹪）,低表达CD11b （0.65﹪）、CD19 （0.85﹪）、CD34 （0.70﹪）和CD45 （1.20﹪）。SAP组胰腺病理评分（12.90±1.79）及血淀粉酶水平（1052.41±183.12） mU/ ml均高于NC组[评分：0.40±0.52,淀粉酶水平：（236.62±33.21） mU/ ml]和Sham组[评分：0.50±0.53,淀粉酶水平：（242.31±27.94） mU/ ml]（F = 200.275,F = 143.245,P均< 0.001）,且SAP组受损胰腺组织内RIPK1、RIPK3、MLKL表达升高、Caspase-8表达降低（F = 179.905,P < 0.001）;BMSCs组和Nec-1治疗组胰腺病理评分及血淀粉酶水平均低于PBS治疗组[评分：7.20±1.23、7.00±1.05比12.60±1.65,F = 200.275,P < 0.001;淀粉酶水平：（452.21±101.68）mU/ml、（570.18±148.47） mU/ml比（972.77±204.29） mU/ml,F = 143.245,P < 0.001],同时受损胰腺组织内RIPK1、RIPK3、MLKL表达下调、Caspase-8表达升高（F = 179.905,P < 0.001）。 结论BMSCs可能通过抑制坏死性凋亡通路活化来修复SAP。     

RGMb通过BMP信号通路促进子宫内膜腺细胞的增殖

RGMb蛋白是反义导向分子（repulsive guidance molecule,RGM）家族成员之一,可在细胞水平上介导骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein,BMP）的信号通路。大量研究报道,RGMb参与调控细胞的增殖、分化、凋亡以及细胞间的黏附能力。本研究旨在探讨RGMb对子宫内膜腺细胞的作用及其分子机制。应用siRNA与过表达技术处理子宫内膜腺细胞系（Ishikawa）,采用qPCR与Western印迹技术确定其转染效率,以及BMP相关信号通路（MAPK与Smad）成员的表达。结果显示：下调RGMb基因的表达显著降低了p-ERK1/2（1.861 ± 0.1864 vs 0.885 ± 0.0869,P=0.0090）与p-Smad1/5/8（1.624 ± 0.1238 vs 1.093 ± 0.0890,P=0.0253）的表达水平。过表达RGMb基因显著升高了p-ERK1/2（1.237 ± 0.1114 vs 2.089 ± 0.1658,P=0.0130）与p-Smad1/5/8（1.139 ± 0.0562 vs 1.98 ± 0.1449,P=0.0056）的表达水平。而RGMb基因下调和过表达对p-P38 MAPK蛋白表达水平均无显著影响（P>0.05）。采用CCK-8和qPCR技术检测RGMb对Ishikawa细胞增殖活力及增殖相关基因的影响。结果显示：转染80 nmol/L RGMb siRNA显著降低Ishikawa细胞的增殖活力（0.479 ± 0.0271 vs 0.3487 ± 0.0094,P=0.0104）,同时降低增殖相关基因CCND1（1 ± 0.0366 vs 0.6719 ± 0.0236,P=0.0017）和CDK2（1 ± 0.0370 vs 0.853 ± 0.0135,P=0.0202）表达水平;转染1 μg/mL RGMb基因过表达质粒显著提高Ishikawa细胞增殖活力（0.283 ± 0.0030 vs 0.3714 ± 0.0140,P=0.0001）,同时增加CCND1（1 ± 0.0178 vs 1.375 ± 0.0356,P=0.0007）和CDK2（1 ± 0.0188 vs 1.376 ± 0.0513,P=0.0023）基因的表达水平。以上结果表明,RGMb 可能通过p-ERK1/2与p-Smad1/5/8影响Ishikawa细胞增殖活力,为进一步研究RGMb调控子宫机能的分子机制提供科学依据。     

RGMb通过BMP信号通路促进子宫内膜腺细胞的增殖

RGMb蛋白是反义导向分子（repulsive guidance molecule,RGM）家族成员之一,可在细胞水平上介导骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein,BMP）的信号通路。大量研究报道,RGMb参与调控细胞的增殖、分化、凋亡以及细胞间的黏附能力。本研究旨在探讨RGMb对子宫内膜腺细胞的作用及其分子机制。应用siRNA与过表达技术处理子宫内膜腺细胞系（Ishikawa）,采用qPCR与Western印迹技术确定其转染效率,以及BMP相关信号通路（MAPK与Smad）成员的表达。结果显示：下调RGMb基因的表达显著降低了p-ERK1/2（1.861 ± 0.1864 vs 0.885 ± 0.0869,P=0.0090）与p-Smad1/5/8（1.624 ± 0.1238 vs 1.093 ± 0.0890,P=0.0253）的表达水平。过表达RGMb基因显著升高了p-ERK1/2（1.237 ± 0.1114 vs 2.089 ± 0.1658,P=0.0130）与p-Smad1/5/8（1.139 ± 0.0562 vs 1.98 ± 0.1449,P=0.0056）的表达水平。而RGMb基因下调和过表达对p-P38 MAPK蛋白表达水平均无显著影响（P>0.05）。采用CCK-8和qPCR技术检测RGMb对Ishikawa细胞增殖活力及增殖相关基因的影响。结果显示：转染80 nmol/L RGMb siRNA显著降低Ishikawa细胞的增殖活力（0.479 ± 0.0271 vs 0.3487 ± 0.0094,P=0.0104）,同时降低增殖相关基因CCND1（1 ± 0.0366 vs 0.6719 ± 0.0236,P=0.0017）和CDK2（1 ± 0.0370 vs 0.853 ± 0.0135,P=0.0202）表达水平;转染1 μg/mL RGMb基因过表达质粒显著提高Ishikawa细胞增殖活力（0.283 ± 0.0030 vs 0.3714 ± 0.0140,P=0.0001）,同时增加CCND1（1 ± 0.0178 vs 1.375 ± 0.0356,P=0.0007）和CDK2（1 ± 0.0188 vs 1.376 ± 0.0513,P=0.0023）基因的表达水平。以上结果表明,RGMb 可能通过p-ERK1/2与p-Smad1/5/8影响Ishikawa细胞增殖活力,为进一步研究RGMb调控子宫机能的分子机制提供科学依据。     

利拉鲁肽联合二甲双胍对肥胖合并2型糖尿病患者糖脂代谢、胰岛β细胞功能及体脂的影响探究

目的探讨利拉鲁肽联合二甲双胍对肥胖合并2型糖尿病患者糖脂代谢、胰岛β细胞功能及体脂的影响。 方法选择成都市郫都区第二人民医院2017年1月至2018年12月收治的肥胖合并2型糖尿病患者141例作为研究对象,按照随机数字表法分为利拉鲁肽组47例、二甲双胍组47例与联合组47例。利拉鲁肽组采用利拉鲁肽治疗,二甲双胍组采用二甲双胍治疗,联合组采用利拉鲁肽联合二甲双胍治疗。三组疗程均为3个月。比较三组治疗前后糖代谢、脂代谢、胰岛β细胞功能和体重指数（BMI）变化,及不良反应,治疗前后比较采用配对t检验,三组间比较采用F检验,两组间比较采用LSD-t检验。 结果三组治疗后FPG、HbA1c和2hPG水平较治疗前降低,差异具有统计学意义（P均< 0.05）;联合组治疗后FPG（6.57±0.39）?mmol/L、HbA1c（7.03±0.42）%和2hPG（8.78±0.45）mmol/L低于利拉鲁肽组（7.03±0.32）mmol/ L、（7.68±0.35）%、（9.56±0.65）mmol/L（t = 6.251、8.151、6.764,P均?< 0.05）和二甲双胍组（7.06±0.39）mmol/L、（7.76±0.46）%、（9.70±0.81）?mmol/L,差异具有统计学意义（t = 6.091、8.034、6.807,P均< 0.05）。三组治疗后HDL-C水平较治疗前升高,而TC、LDL-C和TG水平较治疗前降低,差异具有统计学意义（P均< 0.05）;联合组治疗后HDL-C （1.56±0.13） mmol/ L高于利拉鲁肽组（1.29±0.14） mmol/ L（t = 9.689,P < 0.05）和二甲双胍组（1.32±0.15） mmol/ L,差异具有统计学意义（t = 8.289,P < 0.05）;而联合组TC（4.35±0.38） mmol/L、LDL-C（2.79±0.21）mmol/L和TG（2.15±0.26） mmol/ L低于利拉鲁肽组（5.18±0.43）mmol/L、（3.19±0.15）mmol/L、（2.65±0.17） mmol/L（t = 9.916、10.626、11.035,P < 0.05）和二甲双胍组（5.15±0.34）mmol/L、（3.23±0.25）mmol/ L、（2.68±0.23） mmol/ L,差异具有统计学意义（t = 10.756、9.239、10.467,P均< 0.05）。三组治疗后HOMA-β较治疗前升高,差异具有统计学意义（P < 0.05）;联合组治疗后HOMA-β（4.87±0.28）高于利拉鲁肽组（4.15±0.36）和二甲双胍组（4.08±0.41）,差异具有统计学意义（t = 10.823,10.909,P均< 0.05）。三组治疗后BMI较治疗前降低,差异具有统计学意义（P < 0.05）;联合组治疗后BMI （28.08±0.37）kg/m²低于利拉鲁肽组（29.73±0.49）kg/m²和二甲双胍组（29.61±0.43）kg/m²,差异具有统计学意义（t = 18.423,18.490,P均< 0.05）。 结论利拉鲁肽联合二甲双胍对肥胖合并2型糖尿病患者效果良好,可改善患者糖脂代谢和胰岛β细胞功能,降低体质指数,值得临床借鉴。     

Ghrelin-GHSR通路在急性低氧暴露大鼠胃炎症反应中的调节作用

由胃合成分泌的食欲刺激激素（ghrelin）可通过结合并激活生长激素促分泌激素受体,（growth hormone secretagogue receptor,GHSR）在调节胃功能方面发挥重要作用。急性低氧暴露导致的消化系统营养吸收障碍和胃肠道炎症反应是否通过Ghrelin-GHSR通路调控尚无研究。本研究采用Wistar大鼠为研究对象,随机分为4组：低氧暴露0 h组、12 h组、24 h组和48 h组,低氧干预在10.2%氧浓度的低氧房中进行。干预前后记录体重;通过分子生物学检测指标评价胃组织炎症因子含量、食欲刺激激素和下丘脑GHSR mRNA相对含量和蛋白质表达水平。本研究证实,随着低氧暴露时间的延长,大鼠体重减少量逐渐增加（12 h：3.73±3.08 g、24 h：8.77±5.04 g、48 h：12.53±6.16 g）;胃组织炎症因子IL-2、IL-4、IL-10、TNFα和MCP-1蛋白含量在低氧12 h后增加（4816.9±983.7 / 9074.5±1107.8 / 18895.1±2967.5 / 37.1±9.8 / 143.5±12.5 pg/mL vs. 166.1±34.6 / 38.3±4.2 / 1429.6±123.9 / 1.7±0.3 / 13.5±2.1 pg/mL）,随着低氧时间延长,炎症因子水平逐渐下降至正常水平（24 h：846.4±94.8 / 1269.8±167.9 / 5769.7±892.6 / 7.5±2.1 / 39.3±8.5 pg/mL;48 h：546.5±97.3 / 374.9±84.9 / 1889.7±982.3 / 2.1±0.8 / 24.6±6.4 pg/mL）;低氧12 h后胃组织食欲刺激激素 mRNA水平较0 h组下降（0.49±0.06 vs. 1, P < 0.05）,48 h后上升（3.79±0.54 vs. 1, P < 0.01）,胃组织的食欲刺激激素蛋白含量在低氧24 h和48 h后均出现上升（1.23±0.15 / 1.16±0.12 vs. 1, P < 0.05）;下丘脑GHSR mRNA在低氧48 h后上升（1.99±0.29 vs. 1, P < 0.01）,蛋白质水平在低氧24 h和48 h后均出现下降（0.35±0.06 / 0.48±0.04 vs. 1, P < 0.05）。表明急性低氧暴露会导致Ghrelin-GHSR通路下调,进而促进胃组织炎症反应,而随着低氧暴露时长的延续,Ghrelin-GHSR通路可通过下调胃中炎症因子水平而避免消化系统的进一步损伤。