去甲肾上腺素对蟾蜍背根神经节细胞α-肾上腺素能受体的作用

在蟾蜍离体灌流背根神经节(DRG)标本上,用微电极进行细胞内记录。在51个细胞中A型神经元为46个,C型5个。此两类细胞的静息膜电位为60.06±1.34mV(x±SE)。当灌流液中滴加10~(-4)-10~(-3)mol/L去甲肾上腺素(NA)引起如下的膜电位改变:(1)超极化:幅值8.38±1.12mV(x±SE)(20/48);(2)去极化:幅值9.39±1.24mV(x±SE)(23/48);(3)无反应(5/48)。上述膜电位改变既不能由灌流液中滴加异丙基肾上腺素所拟似,也不能为心得安所阻断,因而排除了β-肾上腺能受体介导的可能性。加苯肾上腺素及可乐宁于灌流液,分别产生膜的去极化和超极化,而应用哌唑唪及育亨宾灌流,则分别阻断NA引起的膜去极化和超极化。因此认为:NA引起的DRG神经元的去极化和超极化反应分别是由胞体膜上之α_1-及α_2-肾上腺素能受体所介导的。     

Asia1型口蹄疫病毒胶体金免疫层析检测方法的建立

为建立一种快速、简便、灵敏检测Asia1型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析方法(GICA)。本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗Asia1型口蹄疫病毒的单克隆抗体,将该标记物与羊抗豚鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜(Nitrocellulose membrane)上,作为检测带和质控带。经条件优化,组装成检测Asia1型口蹄疫的诊断试纸条。用该试纸条分别对A、O、C和Asia1型口蹄疫病毒抗原以及猪水泡病病毒抗原等87份样品进行了检测,发现该试纸条不与口蹄疫病毒A、O、C型以及猪水泡病病毒抗原发生反应,特异性良好。用该试纸条对口蹄疫细胞毒(TCID50为6.25)的10倍系列稀释液进行了检测,最低可以检测到大约10?4。该试纸条与其他传统诊断方法的符合率为98.8%。初步实验确定该试纸条在4oC下可保存3个月、37oC和室温下大概可保存1周左右。该试纸条是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对现场检测具有一定实用价值。     

~(125)Ⅰ标记的Flt4多抗检测荷瘤小鼠前哨淋巴结的探讨

目的探讨125I标记的Flt4多抗(125I-Flt4PcAb)对荷瘤小鼠前哨淋巴结(sentinel lymph node,SLN)的检测,为应用Flt4PcAb进行SLN特异性定位提供实验依据。方法建立BALB/c裸小鼠后肢荷瘤模型,7周后应用125I-Flt4PcAb检测肿瘤的SLN,健侧作为对照,切取窝淋巴结探测γ射线的每分钟计数率(count per minute,Cpm),并进行HE及角蛋白免疫组化染色;分析不同状态淋巴结摄取125I-Flt4PcAb的特点。结果BALB/c裸小鼠后肢皮下注射Tca-8113细胞悬液,移植瘤成功率达100%;患侧70枚窝淋巴结中,HE染色3枚(4.3%)出现肿瘤转移;角蛋白免疫组化染色为5枚(7.1%);125I-Flt4PcAb摄取方面,肿瘤转移淋巴结、反应性增生淋巴结和正常淋巴结之间均有显著差异(P<0.05)。结论BALB/c裸小鼠后肢皮下注射Tca-8113细胞悬液可成功致瘤,但淋巴结转移率低;免疫组化染色较HE染色检测肿瘤转移更敏感;125I-Flt4PcAb能够检测到荷瘤鼠的SLN,肿瘤转移淋巴结对125I-Flt4PcAb的摄取下降。     

HMGB1/SREBP-1参与IFN-γ介导的小鼠肾小球系膜细胞内的脂质沉积

目的:探讨γ-干扰素(IFN-γ)诱导小鼠系膜细胞内脂质沉积的可能机制。方法:常规培养的小鼠系膜细胞(MMC)分为正常对照组、刺激组、刺激+空质粒组(sh-HMGB1)和刺激+质粒组(sh-SREBP-1);油红O染色观察细胞内脂质沉积;RT-PCR检测HMGB1、SREBP-1和脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达;Wesern blot检测蛋白表达。结果:油红O检测显示IFN-γ刺激组MMC细胞中出现明显脂滴;IFN-γ刺激能够上调HMGB、SREBP-1和FASmRNA及蛋白表达;沉默HMGB1能够降低IFN-γ诱导的SREBP-1和FAS上调,并减少细胞内脂质沉积;沉默SREBP-1能够减少HMGB诱导的MMC细胞内脂质沉积。结论:IFN-γ可能通过上调HMGB/SREBP-1/FAS的表达促进小鼠系膜细胞内脂滴沉积。     

125I标记的Flt4多抗检测荷瘤小鼠前哨淋巴结的探讨

目的 探讨125I标记的Flt4多抗(125I-Flt4PcAb)对荷瘤小鼠前哨淋巴结(sentinel lymph node,SLN)的检测,为应用Flt4PcAb进行SLN特异性定位提供实验依据.方法 建立BALB/c裸小鼠后肢荷瘤模型,7周后应用125IFh4PcAb检测肿瘤的SLN,健侧作为对照,切取(月园)窝淋巴结探测γ射线的每分钟计数率(count per minute,Cpm),并进行HE及角蛋白免疫组化染色;分析不同状态淋巴结摄取125I-Flt4PcAb的特点.结果 BALB/c裸小鼠后肢皮下注射Tca-8113细胞悬液,移植瘤成功率达100%;患侧70枚(月园)窝淋巴结中,HE染色3枚(4.3%)出现肿瘤转移;角蛋白免疫组化染色为5枚(7.1%);125I-Flt4PcAb摄取方面,肿瘤转移淋巴结、反应性增生淋巴结和正常淋巴结之间均有显著差异(P＜0.05).结论 BAIB/c裸小鼠后肢皮下注射Tca-8113细胞悬液可成功致瘤,但淋巴结转移率低;免疫组化染色较HE染色检测肿瘤转移更敏感;125I-Flt4PcAb能够检测到荷瘤鼠的SLN,肿瘤转移淋巴结对125I-Flt4PcAb的摄取下降.     

Asial型口蹄疫病毒胶体金免疫层析检测方法的建立

为建立一种快速、简便、灵敏检测Asial型口蹄疫病毒的胶体金免疫层析方法(GICA).本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗Asial型口蹄疫病毒的单克隆抗体,将该标记物与羊抗豚鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜(Nitrocellulose membrane)上,作为检测带和质控带.经条件优化,组装成检测Asial型口蹄疫的诊断试纸条.用该试纸条分别对A、O、c和Asial型口蹄疫病毒抗原以及猪水泡病病毒抗原等87份样品进行了检测,发现该试纸条不与口蹄疫病毒A、o、c型以及猪水泡病病毒抗原发生反应,特异性良好.用该试纸条对口蹄疫细胞毒(TCID50为6.25)的10倍系列稀释液进行了检测,最低可以检测到大约10-4.该试纸条与其他传统诊断方法的符合率为98.8%.初步实验确定该试纸条在4℃下可保存3个月、37℃和室温下大概可保存1周左右.该试纸条是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对现场检测具有一定实用价值.     

使用固定于硝酸纤维膜上的抗原筛选单克隆抗体的两种方法

<正>近年来免疫化学和放射性免疫的许多工作已经涉及到固定于硝酸纤维膜上抗原的应用。Haukes等人的点一免疫结合试验用微量抗原结合硝酸纤维膜上为筛选单克隆抗体(McAb)提供了一个方案。我们发展了一种简化了的筛选体系,即把抗原点加在一张与96孔微量滴定板同样大小的硝酸纤维膜上,用一块制成单园孔的铝模板置于有抗原点的硝酸纤维膜上面,可加入极少量(2ul)的杂交瘤上清液亦可与大量(可达200ul)杂交     

血管升压素对大鼠背根神经节神经元膜的作用

为研究血管升压素(arginine vasopressin,AVP)对大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元的作用及其机制,用细胞内微电极记录技术记录离体灌流DRG神经元的膜电位。结果如下:(1)在受检的120个细胞中,大多数(81.67％)在滴加AVP后产生明显的超极化反应。(2)滴加AVP(10μmol/L)后膜电导增加约19.34％(P<0.05)。(3)灌流平衡液巾的NaCl以氯化胆碱(CH-Cl)置代和用Cd2+阻断Ca2+通道后,AVP引起超极化反应的幅值均无明显变化(P>0.05),而加入K+通道阻断剂四乙铵(TEA)后,AVP引起的超极化反应幅值明显减小(P<0.05)。(4)AVP引起的超极化反应可被AVP V.受体拈抗剂阻断。结果捉示,AVP可使DRG大多数神经元膜产生超极化,DRG神经元膜上存在AVP V,受体,且AVP引起的超极化反应是通过神经元膜上AVP V.受体介导的K+外流所致.AVP可能参与了初级感觉信息传入的调制。     

外源H2O2和·OH对大麦幼苗根系线粒体膜脂和流动性的伤害

以大麦(HordeumvulgareL.)为材料,研究了外源H2O2和*OH对大麦根系呼吸速率、线粒体膜流动性和膜脂脂肪酸组成的影响。结果表明,10mmol/LH2O2或·OH处理4d,大麦幼苗根系呼吸速率和线粒体膜脂不饱和脂肪酸含量及脂肪酸不饱和指数下降,线粒体膜脂荧光强度增加,膜流动性下降,且H2O2或·OH处理浓度(在0.1～10mmol/L范围内)越高,膜脂流动性下降越明显。H2O2和·OH处理的同时加入同浓度的抗坏血酸(AsA)和甘露醇,膜流动性明显增强或恢复。     

一种简易SNP 检测方法的建立

目的:建立一种快速、简单的SNP(Single Nucleotide Polymorphisms)检测方法。方法:设计带生物素标记的扩增引物对检测用具有单碱基差异的野生型和突变型靶序列分别进行扩增,然后通过紫外交联的方式将相应检测靶序列的探针固定在硝酸纤维素膜上,借助Taq酶完成膜上单引物延伸,从而对探针捕获的靶序列进行延伸固定在膜上,最后使用生物素-亲和素酶联显色(ABS-ELISA)反应肉眼观察结果。结果:阳性和阴性对照探针显示正常。野生型探针和突变型探针能够分别特异性结合靶序列,并通过生物素和亲和素显色系统放大为一种肉眼可判断结果的检测形式。结论:建立了一种基于硝酸纤维素膜载体上进行核酸扩增的SNP检测方法。     

外源H_2O_2和·OH对大麦幼苗根系线粒体膜脂和流动性的伤害

以大麦 (H ordeum vulgare L.)为材料 ,研究了外源 H2 O2 和· OH对大麦根系呼吸速率、线粒体膜流动性和膜脂脂肪酸组成的影响。结果表明 ,1 0 mmol/L H2 O2 或· OH处理 4d,大麦幼苗根系呼吸速率和线粒体膜脂不饱和脂肪酸含量及脂肪酸不饱和指数下降 ,线粒体膜脂荧光强度增加 ,膜流动性下降 ,且 H2 O2 或· OH处理浓度 (在 0 .1～ 1 0 mmol/L范围内 )越高 ,膜脂流动性下降越明显。 H2 O2 和· OH处理的同时加入同浓度的抗坏血酸 (As A)和甘露醇 ,膜流动性明显增强或恢复     

用免疫点试验检测未浓缩的杂交瘤培养上清液中的同型和轻链型鼠单克隆抗体

<正>长期以来生物化学家们在核酸的工作中就广泛利用硝酸纤维素滤膜作为一种固相支持物以吸附和固定核酸。Towbin等(1979)首先证实它在从聚丙烯酰胺胶转移或贴印蛋白的用途,随后又用于检测抗体。Sharon等(1979)和Hawkes等(1982)介绍了一种点-免疫结合试验,直接应用硝酸纤维膜中的抗原点来筛选单克隆抗体和其它抗体。 单克隆抗体技术的广泛应用,在许多实验室就产生了一种需要,即从大量的单克隆蛋白中简便地检查鼠免疫球蛋白同型物(isotype)和轻链类。生产抗同型血清既费力又费钱。如果将抗体固定在硝酸纤维膜上     

加热洗脱硝酸纤维膜上保存的尿蛋白质

用膜保存尿蛋白质对于生物标志物的研发意义重大,从保存尿蛋白质的硝酸纤维膜上洗脱蛋白质的有效性,决定着保存方法被接受的程度和应用的范围。加热洗脱蛋白质的方法,通过提高硝酸纤维膜溶解时的温度等方式;并运用SDS-PAGE和LC-MS/MS分析加热洗脱方法所制备的尿蛋白质样品,将其与强烈涡旋洗脱方法和直接丙酮沉淀方法所制备的尿蛋白质样品比较。结果显示,加热洗脱方法比强烈涡旋洗脱方法获得更多的蛋白质(P0.05),且蛋白质无降解;加热洗脱方法和直接丙酮沉淀方法制备的蛋白质样品,质谱所鉴定到蛋白质重叠率无明显差异(分别是92.6%、96.8%),蛋白质丰度CV值20%的蛋白质占总蛋白质的比例均很高(分别是85.2%、94.4%)。加热洗脱法具有很好的技术重复性,操作更加高效、简单,有利于用膜保存尿蛋白质方法的推广应用。     

神经元特异性烯醇酶和癌胚抗原胶体金免疫层析联合检测

目的:应用双抗夹心胶体金免疫层析方法,实现对神经元特异性烯醇化酶(NSE)和癌胚抗原(CEA)两种肺癌肿瘤标志物的快速联合检测。方法:采用柠檬酸三钠还原法制备20nm胶体金颗粒,并分别对鼠抗NSE、CEA单克隆抗体进行标记,分别与之相配对的另一种单克隆抗体被喷在硝酸纤维素膜(NC膜)上,制成免疫层析检测试条。溶液中的抗原NSE、CEA与金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上固定的抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果:该试纸条只与NSE、CEA有特异性反应,与CA125、CYFRA21-1、TPA等肺癌标志物无交叉反应。标准样品中两种抗原的检测灵敏度分别可达到5ng/mL和3ng/mL。结论:胶体金免疫层析技术检测NSE、CEA特异性强、灵敏度高、简便快速,不需特殊仪器设备,有广泛应用价值。     

疟原虫厚血膜染色最佳条件的经验介绍

本文介绍疟原虫厚血膜染色采用一种瑞氏-姬姆萨混合快速染色法,并对其最佳条件作了初步摸索。当溶血剂(0.6%甲醛PBS)的pH值在7.0、溶血时间2分钟、染色时间6分钟获得的效果最佳。不仅缩短了染色时间,且被感染的红细胞仍保留淡红色残影。其它红细胞多被溶解。疟原虫形态完整,核红浆蓝,清晰易辨,而且标本可长期保存。克服了瑞氏或姬姆萨染色的不足,适用于临床和教学。现将操作方法简介于下:取血1小滴于玻片中央,按常规涂成直径约0.6cm的厚血膜。平置干燥后,滴加溶血剂6滴于血膜上溶血2分钟,再用同样大小的滴管加瑞氏-姬姆萨染液(4:1)配成的…     

介绍一种观察血液凝固的实验方法

取四凹玻片一块,在凹上方依顺序标上1、2、3、4字样。按下表滴加各种物品,待3％Cacl_2最后滴加后,立即用4枚大头针分别混匀,并记下时间。然后每隔30秒钟(室温低1分钟)用相应大头针挑凹内液体一次(沿一个方向),如出现纤维状细丝,则表示开始凝固。记录凝固     

CO_2加富对UV-B辐射胁迫下亚心形扁藻光合作用和膜脂过氧化以及抗氧化酶活性的影响(英文)

在CO2浓度分别为当今CO2浓度(360 mL/L)和加富浓度(5 000 mL/L)条件下,研究了UV-B胁迫对亚心形扁藻(Platymonas subcordiformis (Wille) Hazen)的光合作用、膜脂过氧化和抗氧化酶活性的影响。实验结果表明:(1) UV-B单独作用下,亚心形扁藻的干重、光合速率、叶绿素a (Chl a)和类胡萝卜素(Car.)含量显著降低,CO2加富单独作用下,亚心形扁藻的干重和光合速率显著升高,叶绿素a和类胡萝卜素含量与对照相比没有显著变化,而UV-B与CO2共同作用则使亚心形扁藻的干重和光合速率与对照相比没有显著变化,叶绿素a和类胡萝卜素含量显著降低。(2) UV-B单独作用和CO2加富单独作用都使可溶性蛋白含量显著降低,UV-B与CO2共同作用下的可溶性蛋白含量比UV-B单独作用的要高。高CO2对藻的可溶性蛋白含量的变化在很大程度上归因于Rubisco蛋白的降低。(3)UV-B单独作用下,O2-. 产生速率、H2O2 含量和MDA含量显著升高,而CO2加富单独作用下,O2-. 产生速率、H2O2 含量和MDA含量显著降低,与UV-B单独作用相比,UV-B与CO2共同作用使O2-. 产生速率、H2O2 含量和MDA含量显著降低。说明CO2加富可以减少活性氧对亚心形扁藻的氧化胁迫,同时减少UV-B对亚心形扁藻的膜脂过氧化伤害。(4) UV-B单独作用下,SOD、POD、CAT、GR和GPX活性显著升高,高CO2     

一种代替双凹载玻片观察花粉管生长的好方法

在观察花粉萌发和花粉管生长的实验中 ,离不开双凹载玻片。通过多次实践 ,我们找到一种代替双凹载玻片的简易材料——健胃片、ATP片等药片的塑料包装板。具体用法是 :1)找已用完药的塑料药片包装板 ,其凹窝的直径不大于 1cm,深度不超过 0 .5cm,凹窝底面要保持光洁 ,并将其上附着的锡膜撕掉。2 )根据凹窝的大小 ,将凹窝 2个、4个或 6个为一组 ,剪成长方形板块 (相当于载玻片大小 ) ,放在 75%酒精中 ,清洗干净备用。3)实验时 ,先在凹窝内滴加 1～ 2滴蒸馏水 ,然后往盖玻片中央滴一滴液体培养基 (0 .5%琼脂 ,2 0 %糖 ,10 0× 10 -6硼酸 ) ,再…     

油红O染色鉴定胰腺星状细胞

目的胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs)是一类胞浆内含有Vitamin A脂滴的特殊类型的细胞。油红O能够使脂肪组织及细胞内的脂滴着色。本研究的目的是采用油红O染色的方法对分离培养的PSCs进行鉴定。方法采用Histodenz密度梯度离心分离提取PSCs。异丙醇配制油红O染液,培养的PSCs应用油红O染液染色。结果油红O染色后可清晰显示PSCs内的脂滴。结论油红O染色可以特异性地显示脂滴,是鉴别PSCs的有效方法。     

牛轮状病毒单克隆抗体的制备及其应用

以纯化浓缩的HN-7株牛轮状病毒(牛RV,从河南腹泻犊黄牛粪样中分离)作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经克隆化筛选出2株(2C_7和3C_9)具群特异性的单克隆杂交瘤细胞株。2C_7与3C_9的小鼠腹水单克隆抗体(McAb)与牛HN-7、BRV007、BRV014及NCDV,猪Na86,猴SA-11和人Wa株RV细胞培养物的间接ELISA反应效价均达1∶10~5,但它们的HI和NT滴度分别≤1∶8和≤1∶100。McAb的Ig类别和IgC亚类检测结果2C_7为IgG1,3C_9为IgG2b。分别用3C_9 McAb和多克隆抗血清(PcAb)包被微量反应板进行粪样中RV抗原检测,共检测犊黄牛腹泻粪样36份、婴幼儿腹泻粪样40份,McAb和PcAb两系统检测结果的符合率分别达到97.2％(35/36)和100％(40/40)。