节丛孢属rDNA ITS区RFLPs分析

利用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对捕食线虫真菌节丛孢属进行了系统发育研究。以ＩＴＳ１和ＩＴＳ４为引物对该属１０种１２个菌株的核糖体ＤＮＡ转录间区（ＩＴＳ）进行了ＰＣＲ扩增,４种内切酶（ＡｌｕⅠ、ＨａｅⅢ、ＨｐａⅡ、ＴａｑⅠ）酶切。结果表明该属的ＩＴＳ区长度没有明显差异,其长度范围在６５８－７０５之间,酶切图谱能体现不同种间的多态性,根据４种内切酶酶切结果,利用ＵＰＧＭＡ法构建的节丛孢属分子系统树,基于体现     

传标记及其在作物品种鉴定中的应用

本文评述了用于作物品种鉴定的形态标记（morphological markers）、细胞标记（cytological markers）、生化标记（biochemical markers）、分子标记（molecular markers）的优缺点。重点评述了分子标记在作物品种鉴定中的应用。文中除对蛋白质电泳指纹图谱－－同工酶和贮茂蛋白（包括醇溶性蛋白、清蛋白、谷蛋白、球蛋白等）电泳产生的指纹图谱的应用外,较详细地介绍了近年来ＤＮＡ指纹图谱技术;包括限制片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism,简称ＲＦＬＰ)、随机扩增多态性ＤＮＡ（random amplified polymorphic DNA,简称ＲＡＰＤ）、小卫星ＤＮＡ（minisatellite DNA）、微卫生ＤＡＮmicrosatellite DNA）,简单重复序列间扩增（intersimple sequence repeats,简称ＩＳＳＲ）,扩增片段长度多态性（amplified fragment length polymor-phism,简称ＡＦＬＰ）以及ＣＡＰＳ（cleaved amplified polymorphic sequences）和ＳＮＰＳ（single mucleotide polymor-phisms）对作物品种鉴定和新品种登记,品种纯度和真实性的检验以及品种间亲缘关系的探讨和在分类研究中的贡献等。     

人类基因组的物理图谱与大规模DNA测序

１历史的回顾物理图谱的制作是与分子克隆技术分不开的。限制性内切酶的发现,导致了第一个物理图谱的完成（ＳＶ４０;Ｄａｎｎａ与Ｎａｔｈａｎｓ,１９７１）。新克隆技术,尤其是ＹＡＣ（ＹｅａｓｔＡｒｔｉｆｉｃｉａｌＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅ）和ＢＡＣ（Ｂａｃｔｅｒ...     

幽门螺杆菌L型的体外诱导

应用胃内可能影响ＮＰ变成Ｌ型的一些因素,如抗生素、胃液、胆汁等为诱导剂,进行ＨＰ一Ｌ型的体外诱导。梭芋青霉素纸片法和含药平板法可诱导出ＨＰ一Ｌ型的园球体和丝状体,在Ｌ型平板上形成典型的“油煎蛋”佯或丝状菌落。梭千青霉素诱导ＨＰ一Ｌ型纸片法浓度为１０一２００ｕｇ／片,含药平板法浓度为０．１５６一０．０１ｕｇ／ｍｌ。融羧苄青霉素诱导的“油煎蛋”样菌落不稳定易回复,丝状菌落则较稳定,在Ｓｋｉｒｒｏｗ平板上也能生长。胃液可诱导ＨＰ形成稳定的Ｌ型,这种Ｌ型为丝状菌落,涂片油镜下呈长丝体。胆汁对４株不同的ＨＰ经多次诱导均未成功,形成的ＨＰ一Ｌ型作了免疫酶（ＰＡＰ法）染色和染色体ＤＮＡ酶切图谱分析。     

蜀柏毒蛾核型多角体病毒结构多肽及基因组酶切分析

对蜀伯毒蛾核型多角体病毒（Ｐａｒｏｃｎｅｒｉａ ｏｒｉｅｎｔａ Ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ,简称ＰａｏｒＮＰＶ）形态结构、结构多肽、限制内切酶图谱等特性进行了研究。采用不连续系统垂直板ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了ＰａｏｒＮＰＶ的多角体蛋白、病毒粒子结构多肽。应用５种限制性内切酶对ＰａｏｒＮＰＶ基因组ＤＮＡ进行了酶切分析。结果表明：经热处理的多角体蛋白仅有一条带,分子量为３１．５ｋＤ,不     

幽门螺杆菌尿素酶的纯化及其特性

本文利用Ｓｅｐｈａｃｒｙ１ Ｓ－２００和Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ两步层析,从ＨＰ蒸馏水浸液中提取纯化尿素酶,并对其特性进行了测定,证明ＨＰ尿素酶各含一个６６ｋＤ和２９．５ｋＤ的亚单位,并以６个分子聚合成６２５ｋＤ大分子蛋白,有很好的抗原性,并显示特异的血清学反应。用ＨＰ超声浸液抗原和尿素酶,加入２μｇ霍乱毒素粘膜佐剂,给ＳＰＦ ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠口服免疫,可使８０％小鼠抵抗ＨＰ活菌的攻击,证明尿素酶是一种抗ＨＰ的保护性抗原。     

球形幽门螺杆菌分子生物学研究

为研究幽门螺杆菌（ＨＰ）球形变异本质,作者通过延期培养和采用亚抑菌浓度抗生素,使３株ＨＰ发生球形变异,对弯曲形和球形ＨＰ作了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹及４个毒力基因片段ＰＣＲ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱显示球形ＨＰ分子量在７４×１０４以上的蛋白含量减少,免疫印迹显示球形ＨＰ１２５×１０４蛋白条带反应减弱,而抗生素诱变的球形ＨＰ分子量为１１×１０４和６３×１０４的蛋白条带反应增强。ＰＣＲ及ＰＣＲ－ＳＳＣＰ结果表明球形ＨＰ的ｈｐａＡ,ＶａｃＡ,ＣａｇＡ和ＵｒｅＡ４个毒力基因片段未发生缺失,但在ｈｐａＡ或ＶａｃＡ基因中存在点突变     

幽门螺杆菌的基因分型方法及其应用

近几年,有关幽门螺杆菌（ＨＰ）基因分型方法及其应用的研究取得了很大进展。基因分型方法包括：质粒分型、限制性内切酶分型（ＲＥＡ）、核糖分型、染色体ＤＮＡ脉冲场凝胶电泳（ＰＦＧＥ）分型、多聚酶链反应限制性内切酶消化（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分型、任意引物ＰＣＲ（ＡＰ－ＰＣＲ）分型、ＰＣＲ单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分型和核苷酸序列分析等。基因分型方法广泛用于ＨＰ的研究,如基因图的构建、感染复发、耐药机     

板齿鼠线粒体DNA的研究

本文应用ＡｐａＩ、ＢａｍＨＩ、ＢｃｌＩ、ＢｇｌＩ、ＣｌａＩ、ＥｃｏＲＩ、ＥｃｏＲＶ、ＨｉｎｄＩＩ、ＰｓｔＩ、ＰｖｕＩＩ、ＳａｃＩ、ＳｃａＩ和ＸｂａＩ等１３种限制性内切酶对板齿鼠线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）进行限制性片段长度多态（ＲＦＬＰ）分析,并用双酶解法构建其限制性内切酶图谱。结果表明板齿鼠存在３种ｍｔＤＮＡ单倍型,可通过限制酶ＰｖｕＩＩ、ＨｉｎｄＩＩ和ＡｐａＩ区分,呈现ＤＮＡ多态性和种内遗传变异。与小家鼠、褐家鼠ｍｔＤＮＡ限制性片段的数据相比较,板齿鼠和这两种鼠ｍｔＤＮＡ存在明显差异。板齿鼠ｍｔＤＮＡ限制性内切酶图谱的建立,为进一步系统研究鼠科动物的遗传分化提供了依据。     

用NDA指纹图谱方法进行野生小家鼠的双亲判别

本文以在英格兰捕获的野生小家鼠为研究材料,尝试用ＤＮＡ指纹图谱方法判别动物后代的双亲,从冷冻鼠脑组织提取的ＤＮＡ,经限制性酶Ｈｉｎｆ－Ⅰ的酶切、凝胶电泳、尼龙膜吸附、与Ｐ＾３２标记的人或鼠ＲＮＡ探针杂交、放射自显影,最后得到ＤＮＡ指纹图谱。图谱分析表明：野生小家鼠间的亲缘关系很近,个体间的相似性系数较高,不易判别后式的双亲,建议采用简便而又准确的条带比较法,取代相似性系数法。鼠探针与鼠ＤＮＡ杂交所     

采用PCR-RFLP和RAPD对球壳孢目真菌系统学的研究

对球壳孢目真菌首次采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ进行了系统发育研究。以ＩＴＳ１和ＩＴＳ４为引物对４属１２种２４个菌株的核糖体ＤＮＡ转录间区（ＩＴＳ）进行了ＰＣＲ扩增,４种内切酶（ＡｌｕＩ,Ｈｈａ,ＭｓｐＩ,ＴａｑＩ）酶切,结果表明：主要属的ＩＴＳ区长度不同,同属不同种相同。Ｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｍ,Ｐｈｙｌｏｓｔｉｃｔａ,Ａｓｃｏｃｈｙｔａ,ＳｅｐｔｏｒｉａＩＴＳ区长度分别为６３０,５６０,５５０,５４０ｂｐ;酶切图谱属间差别明显,属内种间基本一致,暗示传统的分种可能过细,某些种的成立还有商榷的余地,ＰＣＲ－ＲＦＬＰ对确定疑难种属的地位有重要的意义。３属８种１６个菌株的ＲＡＰＤ结果表明,种内图谱相同或图谱类型相同,而种间明显不同,揭示出过去所划分的种的确存在本质的差别,但是否达到种级的差别还有待于进一步研究     

大熊猫及其近缘种rDNA序列变异和系统进化关系

应用ｒＤＮＡ间隔区Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转换技术研究大熊猫及其近缘种的分子系统关系。通过比较大熊猫、小熊猫、黑熊、马来熊、浣熊和猞猁的ｒＤＮＡ间隔区限制性内切酶图谱,用最大似然法和简约法构建它们的分子系统树。结果表明大熊猫与熊具有较近的亲缘关系,与小熊猫和浣熊的亲缘关系较远。     

捕食线早真菌rDNA ITS区间RFLPs分析

利用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对捕食线虫真菌进行了系统发育研究。以ＩＴＳ１和ＩＴＳ４为引物对３属１４种１６个菌株的核糖体ＤＮＡ转录间区（ＩＴＳ）进行了ＰＣＲ扩增，４种内切酶（ＡｌｕⅠ、ＨａｅⅢ、ＨｐａⅡ、ＴａｑⅠ）酶切，结果表明不同属的ＩＴＳ区长度没有明显差异，其长度范围在５８５￣６９５之间。酶切图谱种间差别明显，种内基三一致，同属菌株图谱没有特异笥，暗示传统的分属可能过细，某些属的成立平常 有待商榷，     

介绍几种 DNA 的限制性内切酶图谱分析方法

限制性内切酶图谱(restriction map),又称物理图谱(physical map),是将各种限制性内切酶的切点在DNA上定位,绘制成的图谱(以下简称酶谱)。1968年Meselsen等人首先发现了限制性内切酶,至今已从四百多种菌株中分离了限制酶。1973年,Danna等绘制了SV40的简单图谱。此后各种DNA的酶谱不断被绘制。酶谱的出现,对DNA分子的克隆,基因定位,核酸序列的测定以及进化比较等方面的研究都有重要意义。DNA酶谱的分析方法很多,本文只简单叙述几种。一、双酶解分析方法此法是将酶两两组合进行彻底酶解,并与     

四膜虫T.S1株rDNA分子的形态以及限制性内切酶图谱分析

用电镜以及Southern杂交技术测得从我国分离的四模膜虫T.S1株的rDNA(rRNA基因)分子为20kb(相当于12.5×10~6道尔顿)的回文二聚体结构。制定了该rDNA分子的四种限制性内切酶图谱,并与已知的四膜虫10个物种的相应的限制酶图谱作了比较分析,发现T.S1株与其中9个物种的图谱显著地不同,但是与T.australis的rDNA的7种限制酶图谱相比较,竟有6种是一致的。两者的BglI图虽有差别,但也只是一个酶切位点之差。     

三种鱼mtDNA的限制性内切酶分析

鱼类线粒体DNA(mtDNA)的限制性酶切图谱分析,对于探讨鱼类的起源和演化等方面均有十分重要的意义。但是目前有关鱼类mtDNA酶切图谱的研究较少,这主要是受方法学的限制。为此我们改良了一种鱼类mtDNA的提取法,对鲤科的草鱼(Ctenopharyngodon idellus)、鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)和鳙鱼(Aristi-chthys nobilis)的mtDNA进行了限制性内切酶酶切分析。     

用DNA指纹图谱方法进行野生小家鼠的双亲判别

本文以在英格兰捕获的野生小家鼠为研究材料,尝试用ＤＮＡ指纹图谱方法判别动物后代的双亲。从冷冻鼠脑组织中提取的ＤＮＡ,经限制性酶Ｈｉｎｆ一Ｉ的酶切、凝胶电泳、尼龙膜吸附、与Ｐ￣３２标记的人或鼠ＲＮＡ探针杂交、放射自显影,最后得到ＤＮＡ指纹图谱。图谱分析表明：野生小家鼠间的亲缘关系很近,个体间的相似性系数较高,不易判别后代的双亲,建议采用简便而又准确的条带比较法,取代相似性系数法。鼠探针与鼠ＤＮＡ杂交所得到的图谱与人探针３３．６的相比,个体的特异性更强。     

中国东部栗疫病菌群体的遗传分化

本实验采用RFLP技术,对中国东部栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)进行了群体遗传结构的研究。313个参试菌株来自10个省(市)的16个群体(子群体),样本分布在北纬24°N—41°N。各菌株的DNA分别用限制性内切酶Pst Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切,先后以10个低拷贝DNA探针和1个DNA指纹图谱探针进行了杂交和检测。结果表明,两个探针(pCB29和pMS29.1)的杂交图谱呈单态性;探针pCB19的杂交图谱显示,菌株DNA以PstⅠ酶切的为单态性,以EcoR Ⅰ酶切的则呈多态性;其他7个低拷贝探针的杂交图谱都呈多态性(Pst Ⅰ酶切)、指纹图谱探针的检测结果显示,辽宁凤城群体的菌株与中国东部其他群体的菌株相比,具有更多的限制性杂交片段,菌株间的遗传变异性也更大。     

树鼠mtDNA限制性内切酶图谱及其与小家鼠褐家鼠的新缘关系

本实验用Ａｐａ Ｉ,ＡＶａ Ｉ,Ｂａｍ ＨＩ＜ＢｃｌＩ,Ｃｌａ Ｉ,Ｅｃｏ ＲＩＥｃｏ ＲＶ,Ｈｐａ Ｉ,Ｐｓｔ Ｉ,Ｐｖｕ Ⅱ,ＳｃａＩ,ＸｂａＩ等１３种限制性内切酶分析树鼠的ｍｔＤＮＡ限制性片段长度多态性,并用双酶解法构建了其中８种酶的限制性内切酶图谱。根据限制性片段差异法和分子钟,计算并讨论树鼠和小家鼠、褐家鼠的ｍｔＤＮＡ遗传距离和亲缘关系。结果表明树鼠与褐家鼠的关系较接近,两者的分歧时间在     

中国东部栗疫病菌群体的遗传分化*

本实验采用RFLP技术,对中国东部栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)进行了群体遗传结构的研究。313个参试菌株来自10个省(市)的16个群体(子群体),样本分布在北纬24°N—41°N。各菌株的DNA分别用限制性内切酶Pst Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切,先后以10个低拷贝DNA探针和1个DNA指纹图谱探针进行了杂交和检测。结果表明,两个探针(pCB29和pMS29.1)的杂交图谱呈单态性;探针pCB19的杂交图谱显示,菌株DNA以PstⅠ酶切的为单态性,以EcoR Ⅰ酶切的则呈多态性;其他7个低拷贝探针的杂交图谱都呈多态性(Pst Ⅰ酶切)、指纹图谱探针的检测结果显示,辽宁凤城群体的菌株与中国东部其他群体的菌株相比,具有更多的限制性杂交片段,菌株间的遗传变异性也更大。