p53基因对人胃癌细胞系恶性生长的影响

以ｐ５３ｃＤＮＡ为探针,用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法对人胃癌细胞系ＢＧＣ８２３进行了检测,发现该细胞中ｐ５３基因存在异常,将可在真核细胞表达的重组野生型Ｐ５３质粒ｐＣ５３－ＳＮ３和突变型ｐ５３质粒ｐＣ５３－ＳＣＸ３,用指质体介导法,分别导入ＢＣＧ８２３细胞,获得了较长时间受Ｇ４１８的多个阳性克隆。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ抑迹法证实阳性克隆细胞中有外源性ｐ５３基因存在。     

p^19ARF：INK4α编码的另一种细胞周期蛋白

ＩＮＫ４α的重叠编码框架编码产生出两个不同的蛋白ｐ１６＾ＩＮＫ４ａ和ｐ＾１９ＡＲＦ。ｐ１９＾ＡＲＦ在最近的研究中表明有细胞周期阻滞作用，它发挥作用时依赖于ｐ５３。     

绿茶对人胃癌细胞株中p21,p53蛋白表达的影响

应用免疫细胞化学方法检测ＳＧＣ—７９０１胃癌细胞株中ｐ２１、ｐ５３蛋白的表达,以探讨绿茶的抗癌作用机理。结果表明：绿茶提取物明显抑制ＳＧＣ—７９０１胃癌细胞株中ｐ２１ｒａｓ、ｐ５３蛋白的表达,并有剂量效应。提示绿茶对ｐ２１、ｐ５３基因突变可能有修复作用     

甲状腺肿瘤p53mRNA及p53蛋白表达的研究

本文采用原位杂交法、免疫组织化学方法分别检测了甲状腺癌ｐ５３ｍＲＮＡ、ｐ５３蛋白的表达,结果显示：２０例甲状腺癌ｐ５３ｍＲＮＡ、ｐ５３蛋白均呈阳性反应,８例甲状腺瘤仅１例呈弱阳性反应,８例Ｇｒａｖｅｓ病全部呈阴性反应。细胞质和细胞核ｍＲＮＡ、ｐ５３蛋白灰度检测发现,甲状腺瘤细胞质、核ｐ５３ｍＲＮＡ灰度值和ｐ５３蛋白灰度值均明显高于Ｇｒａｖｅｓ病,而甲状腺癌其细胞质、核ｐ５３ｍＲＮＡ灰度值和ｐ５３蛋白灰度值又明显高于良性甲状腺瘤,提示甲状腺癌ｐ５３ｍＲＮＡ和ｐ５３蛋白的高表达可能与甲状腺肿瘤细胞分化程度有关     

p53突变蛋白在胃癌组织中的表达及免疫电镜观察

作者应用抗ｐ５３单克隆抗体Ｐａｂ１８０１（Ａｂ２美国癌基因公司产品）对３８例手术切除的胃癌组织及癌旁胃粘膜的冰冻切片标本进行ｐ５３突变蛋白表达的检测,并进一步用胶体全免疫电镜技术对ｐ５３突变蛋白的分布特征进行观察。结果：３８例胃癌组织中,２４例有ｐ５３突变蛋白高表达,阳性率６３．２％。在对应的癌旁胃粘膜中１０例为ｐ５３的弱表达,正常组织无表达。伴有淋巴结转移的２３例胃癌标本中,１８例ｐ５３高表达（７８．３％）。免疫电镜结果表现,ｐ５３蛋白主要分布于核内染色质中,胞浆中有散在的阳性区,但以核膜周边为主,紧靠核膜。本研究结果提承胃癌的发生及其肿瘤的生物学行为与抑癌基因ｐ５３的突变密切相关,ｐ５３突变蛋白可能是通过对ＤＮＡ复制的影响而参与肿瘤的形成。     

DMBA、垂体移植诱发性乳腺瘤内172~（Arg－Leu）突变型p53的特性及其与基因重排和扩增关系的研究

ｐ５３最早发现于ＳＶ４０转化的细胞系,后来几乎在所有不同类型的细胞内均检测到这种蛋白质,野生型Ｐ５８是一种有效的肿瘤抑制因子,但突变体ｐ５２可与ｒａｓ－肿瘤基因协同转化体外的腺代细胞,而且在肿瘤发生时常伴随有ｐ５３基因的突变。乳腺癌内,ｐ５３基因的突变率为４０％,并可见到某些肿瘤基因参与癌症的形成过程,暗示ｐ５３基因结构和功能的改变可能与这些基因的重排和扩增有关。本实验选择４种不同年龄的１７２~（Ａｒｇ－Ｌｅｕ）突变型ｐ５３转基因小鼠为受试动物,将同系动物的垂体腺植入小鼠的肾脏后,再以致癌剂ＤＭＢＡ处理,以使动物乳腺内的ｐ５３基因表达和诱导小鼠乳腺癌形成。从乳腺癌小鼠分别摘取乳腺组织,提取ＤＮＡ和ＲＮＡ,以Ｈ－ｒａｓ、ＰＣＮＡ、ＣｙｌｉｎＤ１、ｐ５３基因的ＤＮＡ片段作为特异性核酸探针,进行ＳｏｕｔｈｅｒｍＢｌｏｔｔｉｎｇ和ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ分析,以检测在突变体Ｐ５３表达的情况下,ＰＣＮＡ、Ｈ－ｒａｓ、ＣｙｉｎＤ１等基因在体内的变化规律。实验发现,在４组不同的受试动物中,其乳腺癌细胞的ＰＣＮＡ和Ｈ－ｒａｓ两种基因发生了基因重排,特征是其ＤＮＡ标本中分别出现了一条很强的额外杂交带,但对照动物乳腺该类     

p53的两种结合蛋白：53BP1和53BP2

ｐ５３基因是一种广谱的肿瘤抑制基因,其产物ｐ５３为一多功能的转录调节因子,可以发挥调节细胞生长、细胞凋亡和ＤＮＡ修复的作用。在人类肿瘤已发现多种ｐ５３基因的点突变,但突变不是ｐ５３蛋白质丧失功能的唯一途径。胞内蛋白可能影响其活性和功能。５３ＢＰ１和５３ＢＰ２是ｐ５３在胞浆中的两种结合蛋白。本文阐述了有关这两种蛋白质的研究进展。     

hsp70与c—myc,c—fos和p50的结构及功能联系

热休克蛋白７０基因启动子部位有ｍｙｃ原癌基因产物的两个结构位点,分别位于ｈｓｐ７０基因５＇上游－１６０和－２３０碱基处,ｍｙｃ蛋白可以与其结合调节ｈｓｐ７０基因的转录活性,ｃ－ｆｏｓ基因启动与ｈｓｐ７０启动子区域存在着一种共同的反式作用因子结合区,可能受一种共同的特异性反式作用的调节,野生型Ｐ５３对ｈｓｐ７０启动子的抑制可能与ＣＣＡＡｂｏｘ结合因子有关;ｈｓｐ７０resume     

p73基因

ｐ７３基因黄君富房殿春鲁容（第三军医大学西南医院分子生物学实验室,重庆４０００３８）关键词ｐ７３ｐ５３抑癌基因人们对抑癌基因ｐ５３在肿瘤发生中的作用已进行了较为深入的研究,ｐ５３基因的缺失及失活与５０％的人类肿瘤发生有关。人们早就认为,在复杂的生物学...     

p53蛋白多肽片段在大肠杆菌中的表达

在所有研究过的人体肿瘤组织或细胞中,ｐ５３似乎是突变频率最高的一个基因,研究和检测ｐ５３基因及其编码产物的变化将具有重要的意义。我们将野生型ｐ５３基因编码区３’端７０３ｂｐ的ｃＤ－ＮＡ片段插入到大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０中,得到了一个重组体表达质粒ｐＲＲ３３,经热诱导表达,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法证实ｐ５３蛋白多肽在大肠杆菌中得到了表达,它不仅可用于抗ｐ５３蛋白抗体的制备,而且也可用于对ｐ５３蛋白羧基端多肽功能的研究。     

p33^ING1——一种新的肿瘤抑制蛋白

ｐ３３ＩＮＧ１——一种新的肿瘤抑制蛋白黄君富房殿春罗元辉（第三军医大学西南医院分子生物学实验室,重庆４０００３８关键词ｐ３３ＩＮＧ１ｐ５３细胞生长抑制细胞凋亡在肿瘤的发生、发展过程中,抑癌基因的失活起着重要作用。研究得最多的是ｐ５３基因。ｐ５３的失活...     

bcl-2癌基因蛋白在甲状腺癌中的表达及其意义

利用免疫组织化学技术,对６４例甲状腺癌进行了ｂｃｌ－２蛋白表达的检测,同时进行ｐ５３蛋白的对照检测。结果显示,甲状腺癌中ｂｃｌ－２蛋白阳性表达率为８１．３％（５２／６４）,但未分化癌无阳性表达。ｐ５３蛋白在甲状腺癌的阳性表达率为２０．３％（１３／６４）,而未分化癌全部为阳性表达。两种抗体在甲状腺癌的阳性表达率有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。结果提示ｂｃｌ－２蛋白在甲状腺癌的表达与肿瘤细胞的分化程度有关,并与ｐ５３蛋白呈反比关系,ｂｃｌ－２与ｐ５３蛋白表达的不同分布可作为判断甲状腺癌预后的一个重要参考指标     

CD15、溶菌酶和p53的表达及其与大肠癌浸润转移的关系

应用免疫组织化学ＳＰ法检测了９０ 例大肠癌组织中ＣＤ１５、溶菌酶（ＬＺＭ） 和ｐ５３ 的表达。结果显示大肠癌中ＣＤ１５、ＬＺＭ 和ｐ５３ 表达阳性率分别为８３．３％ 、７０．０％ 和５７．８％ 。ＣＤ１５ 表达与大肠癌的组织类型和ＬＺＭ 表达无关。ＬＺＭ 和ｐ５３ 表达与大肠癌组织类型有关（Ｐ＜ ０．０５）。ｐ５３ 表达与ＣＤ１５ 和ＬＺＭ 表达相关（Ｐ＜ ０．００１）。ＣＤ１５、ＬＺＭ 和ｐ５３表达均与大肠癌的浸润和转移相关（Ｐ＜ ０．０５）。本文揭示ＣＤ１５、ＬＺＭ和ｐ５３在大肠癌的发生发展、浸润和转移过程中具有独立或相互影响作用, 其相互作用机制有待深入研究。因此认为联合检测ＣＤ１５、ＬＺＭ 和ｐ５３表达状况, 是判断大肠癌分化程度、浸润、转移和预测预后的良好指标。同时也为利用不同基因变化研究大肠癌的发病机制、探讨治疗和预防提供一种新途径。     

P53，Rb和c－myc基因在人脑原发性肿瘤中的转录表达

采用ＲＮＡ斑点杂交分析,对２１测人脑原发性胶质瘤和１１例人脑膜瘤中ｐ５３,Ｒｂ和ｃ－ｍｙｃ基因转录水平的表达进行研究,发现４８．４％的肿瘤中ｐ５３基因表达减弱,２１．９％的肿瘤中Ｒｂ基因表达减弱;７１．９％的肿瘤中ｃ－ｍｙｃ基因表达增强,在ｐ５３基因表达减弱的１５例病例中有１３例（８０％）ｃ－ｍｙｃ基因表达增强,结果表明,ｐ５３基因表达减弱和ｃ－ｍｙｃ基因表达增强与人脑原发性肿瘤的发生有关。     

p53蛋白多肽片段在大肠杆菌中的表达

在所有研究过的人体肿瘤组织或细胞中，ｐ５３似乎是突变频率最高的一个基因，研究和检测ｐ５３基因及其编码产物的变化将具有很需要的意义，我们将野生型ｐ５３基因编码３＇端７０３ｂｐ的ｃＤＮＡ片段插入到大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０，得到了一个重组体表达质粒ｐＲＲ３３，经热诱导表达，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法证实ｐ５３蛋白多肽在大肠杆菌中得到了表达，它不仅可用于抗ｐ５３蛋白抗体的制备，而且也可用     

乳腺特异性表达172~（HIS）突变型p53转基因鼠的建立

ｐ５３基因突变几乎存在于所有人类肿瘤中,尤其与严重危害妇女健康的恶性肿瘤──乳腺癌关系密切。研究表明：野生型ｐ５３基因是抑癌基因,而突变型ｐ５３基因则是癌基因──呈显性负调控突变型。本研究首次构建了这种类型的１７２ＨＩＳ突变型ｐ５３基因的转基因鼠,用以研究ｐ５３基因突变与乳腺癌发生的关系。用重组ＰＣＲ法把小鼠ｐ５３基因的第１７２个密码子ＣＧＣ突变成ＣＡＣ（由编码精氨酸突变为编码组氨酸）,得到１７２ＨＩＳ突变型ｐ５３基固。将其插入到大鼠乳清酸性蛋白（ＷＡＰ）启动子与ＳＶ４０ｐｏｌｙ（Ａ）信号序列之间。获得置于载体ｐＢＬ１１９（Ｆｉｇ．１）上的表达结构ＷＡＰ－１７２ＨＩＳｍｔｐ５３－ＳＶ４０。经过ＢｓｓＨＩＩ酶切,纯化该表达结构部分。通过显微注射,将其分别导入ＦＶＢ和Ｃ５７ＢＬ品系小鼠受精卵中,获得３２只Ｆ０代鼠。经ＰＣＲ鉴定,其中９只为转基因阳性鼠（Ｆｉｇ．２）。对其进行的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析（Ｆｉｇ．３）证实了ＰＣＲ的鉴定,并得出了每只鼠中整合的转基因拷贝数（Ｔａｂｌｅ１）。当这９只鼠哺乳第二天时,取乳腺制备ＲＮＡ,进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析,其中５只的乳腺中有转基因表达,其中３只呈较高水平表达（Ｆｉｇ．     

鼻咽癌组织p53相关蛋白的纯化

鼻咽癌是南方常见的恶性肿瘤,ＮＰＣ与ＥＢ病毒关系十分密切。通过免疫亲和层析的方法了解ＮＰＣ肿瘤标本中ｐ５３与病毒或细胞蛋白间潜在的相互作用。这种相互作用可能引起Ｐ５３在ＮＰＣ组织中累积。建立单克隆抗体ｐＡｂ１８０１,ｐＡｂ２４０１免疫亲和层析柱,从ＮＰＣ转移淋巴结分离ｐ５３结合蛋白。     

The Breeding of Mutant p53 and Neu/erb B2 Dual transgenic Mice: Both of the Genes were Over expressed Specifically in the Mammary Gland

为了研究乳腺癌发生与发展过程中突变型ｐ５３和Ｎｅｕ基因之间的相互作用,我们构建了ｐ５３／Ｎｅｕ双转基因鼠。用５只成年雄性Ｎｅｕ转基因鼠与１０只成年雌性ｐ５３转基因鼠交配,对１５０只雌性杂交后代鼠进行ｐ５３／Ｎｅｕ双转基因鼠的筛选。为此,本实验建立了ＰＣＲ一步鉴定法。即：在同一个反应管内能同时满足小鼠β酪蛋白基因、ｐ５３基因和Ｎｅｕ基因上三个片段（分别为０．５ｋｂ、１．２ｋｂ、１．７ｋｂ）的扩增反应者被断定为双转基因鼠（Ｆｉｇ．１）。传统的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析（Ｆｉｇ．２）与ＰＣＲ一步法鉴定结果相吻合。证明：该法的准确率为１００％。进一步、随机取样,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析（Ｆｉｇ．３）表明：双转基因鼠（２号）在哺乳笫二天即出现了ｐ５３基因的高表达。继而、在姓娠笫１０、１７天,哺乳笫１０、２１天也检测到该基因的表达。另外,免疫组化染色也检测到了ｐ５３和Ｎｅｕ蛋白（未展示结果）。     

肝细胞癌p53蛋白过表达的免疫组织化学研究

为探讨肿瘤抑制基因ｐ５３ 在肝癌细胞中的变化, 本实验对３８ 例人肝细胞癌组织ｐ５３ 蛋白的表达进行了免疫组织化学检测, 并与其临床和病理观察进行了比较研究。免疫组化检查显示, １５例肝癌组织ｐ５３蛋白免疫染色阳性, 其突变率为３９．５％ （１５／３８）。比较表明, 肝细胞癌ｐ５３ 蛋白的过度表达与病人的年龄、性别和肿瘤大小无关, 而与肝癌的转移和分化程度有关, 在高分化肝癌中其阳性率为９．１％ （１／１１）, 在中分化肝癌为２２．２％ （２／９）, 在低分化肝癌则高达６６．７％ （１２／１８）。因此, ｐ５３ 蛋白检测可作为肝癌预后判断的指标之一     

人p53蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达

将人ｐ５３ 基因装入 Ｐｉｃｈｉａ 分泌型质粒ｐ Ｈ Ｉ Ｌ Ｓ１ 中,酶切线性化后电穿孔导入酵母细胞进行整合,经筛选得到一高表达ｐ５３ 蛋白的克隆。 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 显示表达量约占分泌总量的３０ ％ 。 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 验证重组人ｐ５３ 存在免疫学活性。在诱导时就降低 Ｐｉｃｈｉａ 酵母系统水解酶活力等方面进行优化,经 Ｆ Ｐ Ｌ Ｃ 分离纯化得到约２００ ｍ ｇ／ Ｌ 表达量。