回收凝胶中蛋白样品的电泳方法

近年来聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄电点聚焦电泳已成为分析和纯化蛋白质的主要手段之一。从凝胶中回收蛋白样品的方法很多,我们参考了其中Otto和Strabfors等人的方法并加以改进,经过了一些摸索,建立了一种从凝胶中回收蛋白样品的电泳方法。此法稳定可靠,简易快速,回收率高,值得推广。材料与方法 1、圆盘电泳玻管(10cm×0.5cm),胶浓度6.2％,电极缓冲液(Tris-Gly,pH8.8),样品     

不经染色直接从SDS-PAGE制备凝胶中准确切下所需蛋白条带的方法

蛋白样品的垂直板SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)不但是一种最常用的蛋白分析方法,也经常用于蛋白质的制备。从电泳凝胶上纯化蛋白,一般都要先用考马斯亮蓝染色,然后切下所需的蛋白条带。这里介绍一种可以不染色,直接从SDS-PAGE制备凝胶上准确切割所需蛋白条带的方法。与染色后切胶的方法相比,这种方法简单、省时,分离到的蛋白容易从胶中洗脱回收,并可明显提高回收率,而且省去了令人烦怖的从回收的蛋白中脱去染色时结合的染料的问题。作者曾用此方法分离过多种蛋白,屡试不爽。这种方法与一般的SDS-PAGE制备电泳的差别主要在电泳结束后对凝胶的处理上。     

简易电泳洗脱蛋白方法

制备电泳的连续洗脱与切下目的蛋白谱带洗脱是从聚丙烯酰胺凝胶回收蛋白质常用的两种方法。切带回收蛋白可采用浸泡提取,化学解聚凝胶及电泳洗脱多种途径。相对比较,电泳洗脱蛋白回收率较前二者高些,因此人们多采用此法。但是,目前广泛使用     

电泳后凝胶中DNA的回收方法

本文根据文献和笔者近年来的研究工作,分述电泳后凝胶中核酸的洗脱、回收方法及其优缺点,以供从事这方面工作的同行参考。一、电泳回收法(一)柱状电泳洗脱法1.从聚丙烯酰胺凝胶中洗脱:Allet等于1973年报告以内切酶RI切割λDNA,用梯度     

从凝胶中回收DNA的一种简便方法

从凝胶中回收DNA的方法已见多种报道,其中的电洗脱法较实用,已有几种装置作为商品出售。Wu等的方法无须任何专门设备,而是在DNA电泳区带前方挖槽,槽内嵌半透膜,使样品自凝胶泳入槽内的缓冲液中。该方法说来简单,实际操作却很费劲,尤其在样品数量大或重复操作时,更觉不便。我们按照Wu等的工作原理,制成一种电洗脱器,可使DNA的回收操作变得简单而高效。     

高粱属A-PAGE 图谱的建立及在种子鉴定中的应用

以高粱、苏丹草等5种高粱属植物的种子为材料,利用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)检测其醇溶蛋白.同时研究了丙酮处理、样品上样量和凝胶浓度对电泳的影响.结果表明:样品经丙酮处理后,在上样量为32μg、凝胶质量分数为15%时电泳可以得到清晰的A-PAGE图谱,据此可以鉴定5种高粱属植物.     

从非变性聚丙烯酰胺凝胶回收纯化DNA样本

介绍一种从非变性聚丙烯酰胺凝胶中回收和纯化目标DNA片段的方法,经比较回收纯化前后PCR产物的电泳结果,表明该方法具有简单快捷和效率高的优点。     

小麦中高分子量麦谷蛋白的高效分离回收

以普通小麦小偃6号为材料,研究从SDS-PAGE中快速回收和累积蛋白亚基的方法。采用制备电泳(17 cm×17 cm×1.5 mm)进行分离,KC l快速染色,将目的蛋白条带切下,置于透析袋中电洗脱回收蛋白亚基。结果表明,在蛋白提取过程中加入四乙烯吡啶与常规方法相比能够更好地分离高分子量麦谷蛋白14和15亚基,回收后的14亚基经电泳检测为单点纯。本方法为高效分离回收小麦中高分子量麦谷蛋白提供了新的技术思路。     

人琼脂糖电泳凝胶中回收DNA的几种简便方法

介绍两类从普通琼脂糖电泳凝胶中回收ＤＮＡ的简便,快捷,高效且廉价的方法,第一类为电泳洗脱法,方法ａ．利用１．５ｍＬ微量离心管,１ｍＬ吸头,尼龙网膜和透析膜做成的一个小装置,快速有效回ＤＮＡ,最终回收率为７０％左右,方法ｂ：不用ＤＥＡＥ－纤维素膜,而用透析膜在凝胶中作出横隔挡在ＤＮＡ条带前,最终回收率为５０％左右,第二类为冰冻融解法,最终回收率也在５０％左右,如果联合使用冰冻融解法和电泳洗脱法,回收     

常规聚丙烯酰胺凝胶电泳快速检测胰蛋白酶抑制剂的方法

ＳＤＳ—ＰＡＧＥ－　明胶电泳是检测蛋白酶抑制剂的常用方法,基本原理为：聚丙烯酰胺凝胶中加入ＳＤＳ和明胶,　　ＳＤＳ使蛋白酶抑制剂发生可逆变性。电泳完毕,用　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－　１００恢复凝胶板中蛋白酶抑制剂的活性,凝胶板置于蛋白酶溶液里保温,含蛋白酶抑制剂部位的明胶不被蛋白酶水解而呈现蛋白染色带。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ一明胶电泳检测蛋白酶抑制剂时,在同一块凝胶板上可同时检测酸性、碱性及中性的蛋白酶抑制剂,但电泳后处理（包括复性,酶解,漂洗和染色）时间长（约２０ｈ）,而且对于同一样品中分子量相近的蛋白酶…     

一种检测聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质免疫活性的方法

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)已成为最有效的分离蛋白质手段。在免疫学研究中,经常遇到的问题是从聚丙烯酰胺凝胶中回收被分开的蛋白质组分,然后测其免疫活性。从聚丙烯酰胺凝胶中回收蛋白质的方法已有许多报道,其中以Hartvig的方法为最简便。该法以溴酚蓝为指示剂,利用电泳系统本身使     

上槽泄露导致双向电泳凝胶高分子量区域垂直拖尾

本文探讨了电泳系统上槽泄露引起双向电泳凝胶蛋白点纵向拖尾问 题.上槽泄露导致上槽SDS损耗,电流增大以及局部温度升高从而导致双向 电泳凝胶高分子量区域蛋白点纵向拖尾.上槽泄露与上槽设计存在不足,使 用者不适当操作以及上槽维护不良有关.对Ettan DALT six电泳系统而言, 一旦出现上槽泄漏问题,建议更换改良后的新版上槽.电泳过程中应避免上 槽泄露,SDS的不足或损耗,电流过大和电泳液温度过高.     

木本植物蛋白提取和SDS-PACE分析方法的比较和优化

在几种木本植物上对4种常用蛋白提取方法、4种凝胶染色和脱色方法及影响蛋白定量和SDS-PAGE电泳的因素进行了比较研究,发现：利用改良丙酮沉降法提取蛋白,不仅提取效率高,而且杂质干扰少,得到的电泳结果,蛋白条带清晰,数量多;将常规凝胶染色和脱色液中的乙醇改用为甲醇可大大改善染色和脱色效果,获得了没有背景或背景很浅的电泳结果。通过研究确定了一套优化的适用于木本植物的蛋白提取、定量、凝胶制备、电泳、染色、脱色以及干胶制备的方法。利用这一优化方法对胡杨细胞盐胁迫蛋白进行了研究,发现了与高水平盐胁迫有关的66kD蛋白和与盐胁迫和干旱胁迫均有关的28kD蛋白,获得了满意的蛋白SDS-PAGE分析结果。     

蛋白电泳铜染色后胶中生物活性IL-2的回收

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)已广泛用于蛋白质样品组分分析。通常的方法染色后蛋白质和肽即固定在凝胶上,尽管凝胶用SDS平衡后可对蛋白质进行洗脱或转移,但由于回收率低、耗时,同时回收的蛋白只能保存其抗原性而生物活性丧失,因而限制了SDS-PAGE在蛋白质回收领域中的应用。最近     

SARS冠状病毒囊膜E蛋白的重组表达与单克隆抗体制备

从基因库中调取SARS冠状病毒囊膜E蛋白基因序列,用连接PCR方法合成完整片段。测序确认后与人免疫球蛋白（IgG）序列Fc段连接并克隆至原核表达载体pPRO EX Hta中。从SDS—PAGE凝胶中回收表达产物后免疫BALB／c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体（mAb）。连接PCR扩增出231bp的DNA,测序结果与GenBank公布的序列一致,与人IgG序列Fc段基因连接后克隆至原核表达载体,在大肠杆菌中获得较好表达。表达产物经SDS—PAGE后,在相对分子质量（Mr）约37000处可见1条明显的诱导表达条带。Western印迹的结果表明,该电泳带与SARS患者的恢复期血清呈特异性免疫反应,,从SDS—PAGE凝胶中回收表达产物并免疫BALB／c小鼠,制备出2株抗E蛋白的mAb。这些mAb与SDS—PAGE凝胶上Mr约为37000的蛋白带也呈现很强的免疫反应。所获得的重组表达E蛋白及特异性mAb为进一步建立SARS病毒感染早期诊断的方法奠定了基础。     

粘虫颗粒体病毒增效因子的分离纯化及其生化性质

粘虫颗粒体病毒经０．０２ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ碱溶,先用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００凝胶过滤层析柱从病毒蛋白粗提中分离增效因子,然后选用ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换层析柱进一步纯化增效因子,得到少量电泳纯的增效因子蛋白样品。     

木本植物蛋白提取和SDS-PAGE分析方法的比较和优化

在几种木本植物上对４种常用蛋白提取方法、４种凝胶染色和脱色方法及影响蛋白定量和ＳＤＳＰＡＧＥ电泳的因素进行了比较研究,发现：利用改良丙酮沉降法提取蛋白,不仅提取效率高,而且杂质干扰少,得到的电泳结果,蛋白条带清晰,数量多;将常规凝胶染色和脱色液中的乙醇改用为甲醇可大大改善染色和脱色效果,获得了没有背景或背景很浅的电泳结果。通过研究确定了一套优化的适用于木本植物的蛋白提取、定量、凝胶制备、电泳、染色、脱色以及干胶制备的方法。利用这一优化方法对胡杨细胞盐胁迫蛋白进行了研究,发现了与高水平盐胁迫有关的６６ｋＤ蛋白和与盐胁迫和干旱胁迫均有关的２８ｋＤ蛋白,获得了满意的蛋白ＳＤＳＰＡＧＥ分析结果。     

一种高效、快速从凝胶中回收DNA的方法

目的:介绍了一种从普通琼脂糖电泳中回收DNA的简便、快捷、高效且廉价的方法.方法:利用0.5 mL离心管、1.5mL离心管、尼龙膜做成的一个小装置.把含有DNA的凝胶放在膜上,离心,收集从管底流出来的液体,用乙醇沉淀DNA.结果:最终回收率为60%左右,回收率大约为市售试剂盒的90%,接近市售DNA回收试剂盒.结论:该方法操作简单,回收率高,无其他试剂污染.     

从琼脂糖凝胶中高效回收DNA技术的探讨

用两只离心管制成的凝胶过滤装置,从电泳后的琼脂糖凝胶中回收DNA片段的简易方法。它依次包括以下步骤：凝胶过滤装置的制作、凝胶切割、凝胶低温冷冻、低温高速离心、ddH20洗胶、DNA纯化和回收效果检测等。用此方法回收的DNA片段产率高、质量纯,可直接用于分子生物学实验的后续操作,如载体连接、PCR模板获得、DNA探针制备、基因测序等。其优点是：DNA片段的回收率高（90％以上）,质量好;操作简便,耗时短;回收装置简单,成本低廉,可进行商品化开发。     

蛋白质的印迹法

所谓印迹法就是生物样品(如核酸、蛋白质等)先经过凝胶(琼脂、聚丙烯酰胺等)电泳后,载有样品区带或点子的凝胶通过压片扩散或电泳迁移,把凝胶中分离的样品转移到硝酸纤维素滤纸上,并用一定的探针进行检测的方法。