尿激酶原-RGDS双功能分子——构建、表达及性质研究 |
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引用本文: | 钱斌,孙迎庆,郭雁,党昕,茹炳根.尿激酶原-RGDS双功能分子——构建、表达及性质研究[J].中国科学C辑,1999,29(2):125. |
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作者姓名: | 钱斌 孙迎庆 郭雁 党昕 茹炳根 |
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作者单位: | 北京大学蛋白质工程国家重点实验室,生命科学学院生物化学与分子生物学系,北京,100871 |
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摘 要: | 利用定点突变及DNA重组技术 ,构建了在尿激酶原K区C 端的β 发夹区插入了精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 丝氨酸 (RGDS)片段的尿激酶原嵌合体基因 ,并利用昆虫杆状病毒表达系统通过感染Sf9细胞对嵌合体尿激酶原进行了高效表达 .用尿激酶原单抗亲和柱纯化表达产物 ,获得初步纯化的嵌合体蛋白 .对嵌合体蛋白进行血小板膜结合实验表明 ,此嵌合体具有依赖于钙离子的结合活化血小板膜的活性 .用生色底物Chromozym U测定嵌合体的酰胺解活性 ,结果显示 ,纤溶酶激活后的嵌合体比活为 62 0 0 0IU/mg,与文献报道的纤溶酶激活的尿激酶原比活 65 3 5 5IU/mg相近 .纤溶酶激活后的嵌合体激活纤溶酶原的反应符合米氏方程 ,其Km 值为 0 .97μmol/L ,与天然尿激酶的Km 值 1.64μmol/L相近 .嵌合体还显示了较强的体外抑制血小板聚集活性 .这些结果表明 ,此尿激酶原 RGDS嵌合体有可能成为一种新的双功能溶栓药物 .
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关 键 词: | 尿激酶原 RGDS 双功能蛋白 溶栓 抗凝 |
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