色氨酸残基在内切葡聚糖酶分子中的作用

内切葡聚糖酶的化学修饰研究表明：色氨酸残基可能位于活性位点,与底物结合有关．荧光光谱测定指出该酶的荧光几乎都来自色氨酸残基,酶分子中色氨酸微环境对ｐＨ变化非常敏感,降低ｐＨ导致了酶分子构象发生了较大变化,配基结合使酶分子色氨酸微环境产生了改变,引发了与ｐＨ诱导不同的构象变化．     

β-葡萄糖苷酶的分离纯化和性质研究

β－葡萄糖苷酶是纤维素酶的重要组分之一,它不仅可水解纤维二糖和寡糖,更可解除纤维二糖对β－１,４－内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶的抑制,提高水解速率和程度．利用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０层析法从黑曲霉变异株Ｌ－２２中分离提纯了β－葡萄糖苷酶,该酶是由两个分子量相同的亚基组成的二聚体,每个亚基分子量为２０３ｋＤ．该酶最适ｐＨ为４．８,ｐＨ稳定范围在３．６～６．４;最适温度是６０℃,温度稳定范围为４～６０℃;酶分子含糖量为８．３５％．它是一个酸性β－葡萄糖苷水解酶,专一性地水解β－糖苷键．而不水解α－糖苷键,对短链底物表现了相对高的活力．用动力学分析和共价化学修饰方法探讨了与该酶活力有关的必需基团．由ｐＨ对ｌｇＶｍ和ｌｇＶｍ／Ｋｍ的影响,推测出酶活性部位至少有两个可解离基团为酶活性所必需,它们在酶－底物复合物中的ｐＫｅｓ１和ｐＫｅｓ２的值分别为４．０和５．６,在游离酶中的ｐＫ值分别为４．２和５．９．由此可初步判断这两个可解离基团可能为组氨酸和含羧基的氨基酸,它们与酶的催化和底物结合可能有关．     

A prourokinase-RGDS chimera——Construction, expression and characterization

A tetrapeptide, RGDS, was inserted into proUK kringle domain G118-L119 by the construction of a mutant proUK-RGDS gene. The gene was expressed in the baculovirus expression system. Immunoaffinity chromatography was used to purify the chimera and protein with purity over 90% was achieved. The chimera was tested for its platelet membrane binding function and showed a calcium-dependent platelet binding activity. Amidolytic activity of the chimera was tested. The result indicated that specific amidolytic activity of plasmin activated chimera was 62000 IU/mg, comparable to the previously reported 65 355 IU/mg of plasmin activated natural proUK. Activation of plasminogen by the chimera after plasmin treatment followed Micbieal-Menten kinetics, and the Km was 0.97 μmol/L, which was also comparable to 1.64 μmol/L of native urokinase. The chimera also showed intensive ability to inhibit platelet aggregation in vitro. These results indicate that this chimera might be useful as a bifunctional thrombolytic agent.     

RGDS-尿激酶原嵌合体的构建与表达

利用定点突变及ＤＮＡ重组技术,构建了在尿激酶原Ｋ区Ｃ端的β发夹区插入了精氨酸－甘氨酸－天冬氨酸－丝氨酸〔ＲＧＤＳ〕片段的尿激酶原嵌合体基因,并利用昆虫杆状病毒表达系统通过感染Ｓｆ９细胞对野生型及嵌合体尿激酶原进行了高效表达,表达量分别为１２００～１８００ＩＵ／（１０６细胞·ｍｌ）和１８００～２４００ＩＵ／（１０６细胞·ｍｌ）．经过ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ离子交换层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤层析及超滤浓缩对野生型及突变型进行了部分纯化,并对其性质进行了初步研究．表明突变体尿激酶原保留了全部尿激酶原的纤溶酶原激活活性,并具有很强的抗血小板聚集活性．ＲＧＤＳ－尿激酶原嵌合体兼有溶栓及抗栓活性     

含RGD的配基与其受体相互作用研究进展

RGD配基与其受体相互作用目前已成为一个研究热点, 许多粘附蛋白是通过RGD序列与其整合素结合的, 它参与许多生物学过程. 文章主要就RGD序列肽与糖蛋白Ⅱb／Ⅲa的相互作用及其在抑制血小板聚集上进行了较为全面的综述, 并介绍了RGD序列肽在基础科学及医疗上的应用前景.     

尿激酶原-RGDS双功能分子——构建、表达及性质研究

利用定点突变及DNA重组技术 ,构建了在尿激酶原K区C 端的β 发夹区插入了精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 丝氨酸 (RGDS)片段的尿激酶原嵌合体基因 ,并利用昆虫杆状病毒表达系统通过感染Sf9细胞对嵌合体尿激酶原进行了高效表达 .用尿激酶原单抗亲和柱纯化表达产物 ,获得初步纯化的嵌合体蛋白 .对嵌合体蛋白进行血小板膜结合实验表明 ,此嵌合体具有依赖于钙离子的结合活化血小板膜的活性 .用生色底物Chromozym U测定嵌合体的酰胺解活性 ,结果显示 ,纤溶酶激活后的嵌合体比活为 62 0 0 0IU/mg,与文献报道的纤溶酶激活的尿激酶原比活 65 3 5 5IU/mg相近 .纤溶酶激活后的嵌合体激活纤溶酶原的反应符合米氏方程 ,其Km 值为 0 .97μmol/L ,与天然尿激酶的Km 值 1.64μmol/L相近 .嵌合体还显示了较强的体外抑制血小板聚集活性 .这些结果表明 ,此尿激酶原 RGDS嵌合体有可能成为一种新的双功能溶栓药物 .     

β—葡萄糖苷酶的分离纯化和性质研究

采用分子筛和离子交换层析技术从黑曲霉Ｌ－２２菌株发酵液中分离提纯了一个由两个相同的亚基组成的β葡萄糖苷酶。研究了其酶学性质和底物专一性。     

真菌和细菌纤维素酶的差别及内、外切葡聚糖苷酶的底物专一性

通常认为纤维素的降解过程,首先是纤维素酶（纤酶）分子吸附到纤维素表面,然后,内切葡聚糖苷酶（内切酶）在葡聚糖链的随机位点水解底物,产生寡聚糖;外切葡聚糖苷酶（外切酶）,从葡聚糖链的非还原端进行水解,主要产物为纤维二糖,需要两类酶的"协同"才能完成对纤维素的降解。纤维素酶分子由催化结构域（ｃａｔａｌｙｔｉｃｄｏｍａｉｎ,ＣＤ）、纤维素结合结构域（ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ－ｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎ,ＣＢＤ）和一个连接桥（ｌｉｎｋｅｒ）三部分组成。近年来,纤维素酶分子结构与功能的研究取得了实质性的进展。不同…