高纯度T4DNA连接酶的简便快速纯化

我们采用简便、快速、重复性好的肝素-琼脂糖和蓝色葡聚糖-琼脂糖柱两次亲和层析方法,纯化得到了高纯度的T4-DNA 连接酶。纯化了近690倍,比活高达5900单位/毫克蛋白。没有检测到脱氧核糖核酸酶的污染。聚丙烯酰胺-S.D.S.电泳显示清晰的一条蛋白带。     

球孢白僵菌转录因子BbMSN2与其结合基序变体的结合特性分析

球孢白僵菌是一种广谱性杀虫真菌,为了探索其转录因子BbMSN2识别启动子核心序列的能力,本研究外源表达并纯化了BbMSN2蛋白,合成了3个含有不同数量核心序列(AGGGG/ CCCCT)的核酸探针和6个核心序列点突变的核酸探针,将BbMSN2蛋白和核酸探针体外结合,通过凝胶迁移实验检测核酸探针及结合蛋白的迁移情况。研究发现,目的蛋白与含有核心序列的核酸探针结合时,核酸探针发生了凝胶迁移现象,其中核心序列数量对凝胶迁移的协同效益不显著。但目的蛋白与核心序列点突变核酸探针结合时,凝胶迁移现象明显减弱。上述结果表明,转录因子BbMSN2可以和含有核心序列核酸探针结合并发生相互作用,且对识别序列具有很强的特异性。本研究为深入探索BbMSN2转录调控机制奠定了试验基础。     

A prourokinase-RGDS chimera——Construction, expression and characterization

A tetrapeptide, RGDS, was inserted into proUK kringle domain G118-L119 by the construction of a mutant proUK-RGDS gene. The gene was expressed in the baculovirus expression system. Immunoaffinity chromatography was used to purify the chimera and protein with purity over 90% was achieved. The chimera was tested for its platelet membrane binding function and showed a calcium-dependent platelet binding activity. Amidolytic activity of the chimera was tested. The result indicated that specific amidolytic activity of plasmin activated chimera was 62000 IU/mg, comparable to the previously reported 65 355 IU/mg of plasmin activated natural proUK. Activation of plasminogen by the chimera after plasmin treatment followed Micbieal-Menten kinetics, and the Km was 0.97 μmol/L, which was also comparable to 1.64 μmol/L of native urokinase. The chimera also showed intensive ability to inhibit platelet aggregation in vitro. These results indicate that this chimera might be useful as a bifunctional thrombolytic agent.     

鸟类成髓细胞增生症病毒反转录酶的纯化

本文提供一种较简便快速的肝素-琼脂糖亲和层析,随后对含50%甘油的磷酸缓冲液透析浓缩的方法,从鸟类成髓细胞增生症病毒(AMV)纯化反转录酶,只需一天半时间,酶的比活提高约600倍,达到12,000单位/毫克蛋白,收得率高,每克AMV 可得到约30,000单位的反转录酶,不含有DNase 及RNase 活性。对该酶的某些性质,如金属离子、模板、引物长度以及某些抗肿瘤药物对酶活性的影响进行了初步的研究。     

盐酸羟考酮对肠道肿瘤术后患者镇痛效果及免疫功能的影响

目的:探讨盐酸羟考酮对肠道肿瘤术后患者的镇痛效果及免疫功能的影响。方法:选择2014年6月至2016年12月我院收治并行手术治疗的肠道肿瘤患者50例,按照随机数字表法分为羟考酮组及芬太尼组,每组各25例。羟考酮组患者于手术结束前15 min给予盐酸羟考酮5 mg静脉注射;芬太尼组患者于手术结束前15 min给予芬太尼50 ug静脉注射。两组术后分别启动盐酸羟考酮与芬太尼静脉自控镇痛。观察两组术后3 h(T_0)、6 h(T_1)、12 h(T_2)、24 h(T_3)、48h(T_4)视觉模拟评分(VAS)、Ramsey镇静评分变化;检测麻醉前、T_2、T_3、T_4血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)水平以及CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+、NK细胞水平,并对比两组术后不良反应发生情况。结果:T_1、T_2时点羟考酮组Ramsey评分显著低于芬太尼组(P0.05),T_0、T_3、T_4时点两组Ramsey评分比较无统计学差异(P0.05)。T_2、T_3、T_4时点两组患者血清TNF-α、IL-6和IL-10较麻醉前均显著升高(P0.05),羟考酮组TNF-α、IL-6和IL-10显著低于芬太尼组(P0.05)。T_2、T_3、T_4时点两组患者CD4~+、CD4~+/CD8~+显著降低,CD8~+显著升高(P0.05),羟考酮组CD4~+、CD4~+/CD8~+显著高于芬太尼组,CD8~+显著低于芬太尼组(P0.05),T_2、T_3时点两组患者NK细胞显著降低,羟考酮组NK细胞显著高于芬太尼组(P0.05)。两组患者术后恶心、呕吐、呼吸抑制、头晕、皮肤瘙痒发生率比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:盐酸羟考酮对肠道肿瘤患者免疫功能影响较小,适合肠道肿瘤患者。     

尿激酶原-RGDS双功能分子——构建、表达及性质研究

利用定点突变及DNA重组技术 ,构建了在尿激酶原K区C 端的β 发夹区插入了精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 丝氨酸 (RGDS)片段的尿激酶原嵌合体基因 ,并利用昆虫杆状病毒表达系统通过感染Sf9细胞对嵌合体尿激酶原进行了高效表达 .用尿激酶原单抗亲和柱纯化表达产物 ,获得初步纯化的嵌合体蛋白 .对嵌合体蛋白进行血小板膜结合实验表明 ,此嵌合体具有依赖于钙离子的结合活化血小板膜的活性 .用生色底物Chromozym U测定嵌合体的酰胺解活性 ,结果显示 ,纤溶酶激活后的嵌合体比活为 62 0 0 0IU/mg,与文献报道的纤溶酶激活的尿激酶原比活 65 3 5 5IU/mg相近 .纤溶酶激活后的嵌合体激活纤溶酶原的反应符合米氏方程 ,其Km 值为 0 .97μmol/L ,与天然尿激酶的Km 值 1.64μmol/L相近 .嵌合体还显示了较强的体外抑制血小板聚集活性 .这些结果表明 ,此尿激酶原 RGDS嵌合体有可能成为一种新的双功能溶栓药物 .     

人乙型肝炎病毒(HBV)adr亚型基因组的多态性

由乙型肝炎adr亚型病毒(HBVadr)携带者26人的混合血清,得到了HBVadr基因组克隆株(PADR)158株,对这些克隆株进行四种限制性内切酶(BglⅡ,HindⅢ,PstⅠ,XhoⅠ)切点测定,并对其中S株的13种限制性内切酶图谱进行比较研究,发现同为adr亚型病毒,其基因组的限制性酶切图谱存在差异。另外,通过HindⅢ)切点得到的12个克隆株(PADR-H),也进行了酶切图谱分析。在这170个克隆株中,已经发现了5种类型的HBVadr基因组限制性酶切图谱,其中有6种酶(AvaⅠ,EglⅠ,BglⅡ,HincⅡ,HindⅢ,HpaⅠ)的7个变异点。本文报道了HBVadr基因组的多态性现象。     

鸟类成髓细胞增生症病毒反转录酶的纯化

本文提供一种较简便快速的肝素-琼脂糖亲和层析,随后对含50%甘油的磷酸缓冲液透析浓缩的方法,从鸟类成髓细胞增生症病毒(AMV)纯化反转录酶,只需一天半时间,酶的比活提高约600倍,达到12,000单位/毫克蛋白,收得率高,每克AMV可得到约30,000单位的反转录酶,不含有DNase及RNase活性。对该酶的某些性质,如金属离子、模板、引物长度以及某些抗肿瘤药物对酶活性的影响进行了初步的研究。     

绍兴黄酒酒药中酵母菌的物种资源

酒药是绍兴黄酒酿造中使用的重要糖化发酵剂。2013年绍兴黄酒冬酿期间,从绍兴地区5个主要黄酒生产企业,采集古越龙山、会稽山、塔牌、沈永和、女儿红及鉴湖等6个品牌酒药样本,在数量、种类和分布规律等方面对黄酒酒药内酵母菌物种资源进行了系统研究。研究发现,会稽山酒药和沈永和酒药蕴含酵母菌数量较多而且与其他样本相比差异显著（P<0.01）,而塔牌酒药中酵母菌数量显著少于其他5个品牌（P<0.05）。遵循酵母菌分类原则,从绍兴黄酒酒药中分离鉴定出3种酵母菌,扣囊复膜孢酵母Saccharomycopsis fibuligera、酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae和隐球酵母Cryptococcus sp.。其中,扣囊复膜孢酵母Saccharomycopsis fibuligera在6个品牌黄酒酒药内的分布占有绝对优势,该种酵母菌可能对绍兴黄酒酒药的生产性能来说至关重要。比较分析酒药中酵母菌物种资源,可以为阐明绍兴黄酒的发酵机制提供基础数据和理论基础。     

高纯度T4DNA连接酶的简便快速纯化

我们采用简便、快速、重复性好的肝素-琼脂糖和蓝色葡聚糖-琼脂糖柱两次亲和层析方法,纯化得到了高纯度的T4-DNA连接酶。纯化了近690倍,比活高达5900单位/毫克蛋白。没有检测到脱氧核糖核酸酶的污染。聚丙烯酰胺-S.D.S.电泳显示清晰的一条蛋白带。