利用RAPD法对虹鳟鱼基因组DNA多态性研究初报

本文通过利用RAPD（随机扩增多态DNA）方法,选用20种10bp的随机引物（OPC－01－OPC—20）,用于虹鳟鱼基因组DNA多态性分析,其中发现一种引物（OPC－02）在虹鳟鱼群体中能扩增出多条带,说明该引物能反映其基因组DNA的多态性,可用于检测出不同品系间的差异。     

虹鳟鱼(Salmo grairdneri Richard)基因文库的构建及生长激素基因的克隆和亚克隆

以噬菌体EMBL3作为载体,构建了虹鳟鱼的全基因文库,制备了包装蛋白效率达4.6×10~8Pfu/μgDNA.基因文库重组噬菌的量为8.2×10~5pfu/μgDNA.同时用含虹鳟鱼生长激素基因cDNA的pAF-51△S作为探针,从该文库中筛选出两个阳性噬斑,复筛获得90％以上的阳性斑。并从阳性克隆中回收虹鳟收生长激素基因片段为6kb,亚克隆到puc-18质粒中,进行了酶切分析。     

虹鳟鱼金属硫蛋白启动子的体外扩增、克隆及其序列分析

以含有虹鳟鱼金属硫蛋白基因的质粒ＤＮＡ为模板,以合成的两段３２个寡聚核苷酸为引物,经过ＰＣＲ扩增,合成了４３３ｂｐ的片段,把其克隆到ｐＢＬ－ＣＡＴ载体中,序列分析和限制酶切图谱表明所克隆的虹鳟鱼金属硫蛋白启动子含有４３３ｂｐ,含有ＴＡＴＡ和ＣＡＡＴ序列,与Ｈｏｎｇ报导的鳟鱼金属硫蛋白启动子的序列比较,其核苷酸泊同源率为１００％。     

基于16S rDNA测序及培养基法探究虹鳟鱼贮藏优势腐败菌

为探究虹鳟鱼腐败机制,选取新鲜虹鳟鱼鱼片在0℃条件下进行贮藏。根据鱼肉样品的菌落总数和挥发性盐基氮(TVB-N)含量,确定虹鳟鱼鱼片的贮藏终点。利用传统培养基分离手段及16S rDNA高通量测序技术相结合的方法鉴定贮藏过程中的优势腐败菌。采用16S rDNA测序技术,对虹鳟鱼贮藏初期、中期及末期的腐败菌组成进行鉴定。16S rDNA高通量测序结果显示,贮藏末期的优势腐败菌属种类丰富,包括不动杆菌属(Acinetobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)和希瓦氏菌属(Shewanella)等多个菌属。利用培养基法分离的腐败菌为假单胞菌属及希瓦氏菌属,两者均包含在高通量测序菌属内。将分离到的这两个菌属接种到无菌虹鳟鱼鱼汁中进行贮藏,在贮藏过程中监测菌落总数及挥发性盐基氮含量,通过挥发性盐基氮产量因子评价优势腐败菌的致腐能力。腐败菌致腐能力结果显示,希瓦氏菌株S2的致腐能力最强。研究结果可为深入认识虹鳟鱼贮藏过程优势腐败菌提供依据,为进一步开发虹鳟鱼保鲜剂提供参考。