矮牵牛中查尔酮合成酶基因A (chsA) 2个启动子的克隆和分析

查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)是类黄酮类物质生物合成途径中的第一个关键酶,其控制基因chs为超家族基因.根据前人报道的矮牵牛查尔酮合成酶基因A(chsA)启动子的保守序列设计1对特异性引物,从矮牵牛基因组DNA中通过1次PCR同时扩增出长为550 bp和354 bp的启动子(分别命名为PchsA-L和PchsA-S,GenBank登录号:EF199747和EF199748),其中PchsA-L与PchsA-S相比,除个别碱基有差异外,在88～269 bp多出一段182 bp的序列,其中103～201 bp含有典型的内含子特征.应用DNAStar软件分析表明2条序列均含有普通启动子的保守序列TATA box、CCAAT box、capsite(CCATAA),并含有花中特异表达启动子的特征序列TACPyAT box、anther box(TAGAAGTGACAGAAAT)、G-box(CACGTG)、box1元件(ATGTCACGTGCCATC)和box2元件(TGTGTTGAAGGTTTGCTA).对克隆启动子所用的矮牵牛后代群体进行分析,130个单株中只含有PchsA-S的有13株,只含有PchsA-L的有20株,同时含有2个启动子的有97株.2个启动子在后代中发生了分离,但其分离比并不符合1∶2∶1.克隆启动子所用的矮牵牛有14条染色体,为二倍体.DNA印迹表明2个启动子在基因组中均是多拷贝.qRT-PCR分析显示:未经过紫外光处理的花中以及经过紫外光处理的花中,PchsA-L启动子驱动的chsA基因与PchsA-S启动子驱动的chsA基因表达都未见明显差异;在紫外光处理的幼苗叶片中表达量相应地比紫外光处理的花中的表达量增高;在紫外光处理的幼苗叶片中,PchsA-L启动子驱动的chsA基因比PchsA-S启动子驱动的chsA基因表达量显著增高;而未经过紫外光处理的幼苗叶片中,PchsA-L启动子驱动的chsA基因、PchsA-S启动子驱动的chsA基因都没有检测到明显的表达信号.结果表明:在矮牵牛中chsA基因存在2个独立的启动子PchsA-L和PchsA-S;启动子PchsA-L中182 bp类内含子特征的序列具有显著提高chsA基因在紫外光处理的幼苗叶片中表达量的功能.     

转查耳酮合酶基因矮牵牛共抑制的研究

查耳酮合酶是花色素合成途径的一个关键酶. 将查耳酮合酶基因(chalcone synthase A, chsA)导入矮牵牛(Petunia hybrida)后, 转基因植株的外源与内源chsA基因一起发生共抑制, 导致花色改变. 将β-葡糖苷酸酶基因(uidA)连在chsA基因下游形成融合基因, 通过土壤农杆菌介导的途径转化矮牵牛. 利用GUS组织染色检测到共抑制的发生具有发育特异性, 在花组织发育时期开始发生, 发生的起始需要内源基因与外源基因的相互作用. RNA原位杂交实验表明, 共抑制的发生没有组织特异性, 且初步表明共抑制发生后, RNA可能是在细胞质中发生降解的.     

重瓣矮牵牛的组织培养和快速繁殖

1　植物名称　重瓣矮牵牛 (Petuniahybrida)。2　材料类别　花朵。3　培养条件　培养基 :( 1 )MS + 6 BA 1 .0mg·L- 1(单位下同 ) +NAA 0 .1 ;( 2 )MS + 6 BA 2 .0 +NAA0 .1 ;( 3)MS + 6 BA 0 .5 +NAA 0 .1 ;( 4 )MS + 6 BA0 .5 +NAA 0 .0 2 ;( 5 ) 1 /2MS +NAA 0 .5 ;( 6) 1 /2MS+NAA 1 .0。上述培养基均加入 0 .7%琼脂 ;( 1 )～( 4 )加 3%蔗糖 ,( 5 )和 ( 6)加 2 %蔗糖 ;pH 5 .8。培养温度为 ( 2 5± 2 )℃ ;光照度 1 5 0 0～ 2 0 0 0lx ,光照1 4h·d- 1 。4　生长与分化情况4.1　无菌材料的获得　从田间选取生长健壮、…     

二倍体矮牵牛花粉母细胞异常减数分裂的观察与核型分析

以夏季高温时期二倍体矮牵牛花蕾为材料,采用常规制片法,对花粉母细胞异常减数分裂进行观察并选取终变期进行染色体核型分析。结果发现:异常减数分裂主要表现为具有多核仁、二价体提前分离成单价体、赤道板外的染色体,姊妹染色单体提前分离、不均等分离,落后和丢失染色体,具有微核的三分体和四分体,中期Ⅱ纺锤体定位发生异常出现融合纺锤体和八字形纺锤体可导致2n花粉产生;矮牵牛终变期核型公式为K(2n)=2x=14=10m+4sm(2SAT),其中第1、4、5、6、7号为中部着丝粒染色体,第2号(具有随体)、3号为亚中部着丝粒染色体,染色体相对长度组成为2n=14=4M_1+10M_2,核型分类为2A型。研究表明,矮牵牛异常减数分裂可导致2n花粉和不育花粉的产生,利用终变期进行核型分析具有材料丰富、二价体形态清晰不需人为配对分析等优点,为矮牵牛细胞学研究提供了新方法。     

矮牵牛的离体培养和快速繁殖

InvitroCultureandRapidPro阴切nonofCommonpetunianHua,WENChun－Xu（PbeedeyIfes～lrchIndddeofHdri,SAsfor050061）1植物名称矮牵牛（Petun。htwde）,又名碧冬茄。2材料类别茎尖、带芽的茎段。3培养条件（回）诱导培养基：l／3MS＋6－BAImg／L（单位下同）＋IBA0．02＋GellanGum（进口琼脂）2g／L;（2）增殖培养基：MS＋6．BA0．5～1＋IBA0．2;（3）生根培养基：l／2MS＋IBA0．5。培养基含蔗糖25g／L,（2）和（3）附加普通琼脂55g／L。PH58,高压灭菌。培养温度22～25”C,光照度1500IX,照光10～12h／d。毛生…     

矮牵牛花同源异型基因fbp2的克隆及其对烟草花形态的影响

以矮牵牛（Ｐｅｔｕｎｉａ　ｈｙｂｒｉｄａ　Ｌ．）栽培品种为材料,取开放前的花蕾分离ｍＲＮＡ,反转录合成ｃＤＮＡ,以ｃＤＮＡ为模板,通过ＰＣＲ扩增,对获得的目的片段进行序列分析。结果表明,分离的目的片段含有６８６个核苷酸（含有起始密码和终止密码）。核苷酸序列与文献报道相比,同源率为９９．６％,只有３个碱基发生改变,５’端的ＭＡＤＳ盒区域完全相同。将得到的矮牵牛花同源异型基因ｆｂｐ２的ｃＤＮＡ（ｙｆｂｐ２）与ＣａＭＶ３５５启动子和ＮＯＳ３’终止子融合,构建了表达载体ｐＢＢＰ２。表达载体通过农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ＬＢＡ４４０４（ｐＡＬ４４０４）介导转化烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．）叶片,在含有１００ｍｇ／Ｌ卡那霉素的抗性培养基上再生成株。对抗性株进行总ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交和总ＲＮＡ的点杂交,证明目的基因已导入烟草细胞中,整合到烟草基因组上,并且在烟草细胞中转录。同源异型基因ｆｂｐ２导入烟草后导致烟草花型改变,在雄蕊上产生了花瓣。     

激活标记——一种有效的基因功能鉴定技术

激活标记技术是植物基因克隆与基因功能鉴定的一种重要的方法。已经在拟南芥、矮牵牛、杨树、番茄和水稻等多种植物中应用,并成功分离鉴定了一系列的功能基因。文章介绍了用激活标记方法克隆鉴定多个与植物生长发育相关的功能基因技术。     

矮牵牛花药培养及植株再生研究

采用花粉发育双核期的矮牵牛花药,研究不同浓度植物生长调节剂配比及不同浓度蔗糖和麦芽糖对花药诱导率的影响。结果表明,采用6-BA和IBA组合诱导效果较好;NH+6-BA 1.5mg/L+IBA 1.5mg/L花药诱导率较高;麦芽糖诱导效果明显比蔗糖好。     

应用微量注射技术转化植物细胞

<正> 应用微量注射使一部分染色体转入矮牵牛的细胞中。此间,一位农业生物学者报道了用此技术把 DNA 片段形式的基因组稳定地整合到植物体中的情况。由于这种基因组太大,采用病毒或质粒载体进行转移是难以进行的。1980年以来科学家们很成功地把基因注入到动物     

乙酰水杨酸(阿司匹林)对矮牵牛开花的影响

本文探讨乙酰水杨酸对矮牵牛试管苗现蕾时间、开花率和花期延续时间的影响。矮牵牛（Petunia hybrida）是我院实验室的组培试管苗。阿司匹林为市售阿司匹林肠溶片（Aspirin entericcoated tablets,Asp）,主要成分乙酰水杨酸【2-（乙酰氧基）苯甲酸】。采用1／2MS＋0．1mg．L^-1矮壮素【2-氯乙基三甲基氯化铵】培养基,矮牵牛在此培养基中预培养1．2个月后,选用生长状况一致的未现花蕾的幼苗植株为试材。试验分为（1）：土培,将阿司匹林肠溶片研磨至细粉状,兑水成不同浓度,使用前震荡,悬浊液浇灌于土中;再将经预培养的组培苗移入土壤中,每盒3—4株。