单纯疱疹病毒分子生物学分型方法的研究

联合运用HSV-1和HSV-2型特异性核酸探针对28株HSV临床分离株做了鉴定分型,并与应用HSV型特异性单克隆抗体的三种免疫学方法的检测结果进行了比较。核酸探针与单克隆抗体之间的符合率为100%,但分型率不同,核酸探针为100%,单克隆抗体为64—82%。研究结果表明,本实验所建立的HSV-McAb-APAAP桥联免疫酶染技术具有简便、敏感、实用的特点。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA克隆片段的限制酶切分析

本文采用10种限制性内切核酸酶分析了单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)335株DNA BglⅡ8种克隆片段共12个重组质粒。发现了HSV-2 DNA L链末端区域有限制酶切位点的变异并对HSV-2 DNA单一序列区域和末端重复区域的稳定性进行了初步讨论。本文应用末端标记技术和末端杂交分析法对编码糖蛋白D的HSV-2 DNA BglⅡL片段和含有形态学转化基因的HSV-2DNA BglⅡN片段进行了详细的限制性内切核酸酶物理图谱分析。     

高滴度单克隆抗体杂交瘤细胞系获得途径的探讨

为探索获得能分泌较高价单克隆抗体杂交瘤细胞系的途径,比较了用不同免疫方法得到的小鼠脾细胞制备杂交瘤,对其产生有效瘤和高价抗体分泌瘤的影响。用不使小鼠致病的病毒(如NDV)或巳灭活的病毒作为抗原时,以较高浓度加佐剂、长间隔(30天)、多次免疫效果较好。用能使小鼠感染的病毒作为免疫原时,以活病毒的亚致死剂量感染小鼠,取其脾细胞制备杂交瘤,效果最理想。有效杂交瘤产率高,分泌高效价抗体的杂交瘤细胞系也多。探讨了从免疫方法着手,定向研制高价单克隆抗体杂交瘤细胞系的可行性。     

子宫颈糜烂病毒病因的探讨

491份宫颈拭子病毒分离结果表明:糜烂宫颈单纯疱疹病毒(HSV)分离阳性率(30.8％)是正常宫颈(2.6％)的11.8倍,用人干扰素治疗一个疗程后,病毒分离率下降至疗前的1/4.36例糜烂宫颈活体组织DNA分子杂交表明,乳头瘤病毒16型(HPV-16)阳性者占52.8和,HPV-18占17.9％,HPV-6B占28.1％,HPV-11占7.7％,251例宫颈糜烂患者经人(?)D型基因工程干扰素双盲对比治疗后,总有效率达93.8％,显效率达60％,分析临床疗效与HSV分离率的变化表明,临床有效病例中有35％(49/140)在治疗后病毒阴转,有57％在疗前疗后均未分离出HSV,有5％在疗前疗后保持阳性不变,有2.9％疗前阴性,疗后阳性,上述结果表明,HSV和HPV与慢性宫颈炎有一定关系。     

抗原捕获聚合酶链式反应（AC－PCR）直接分型检测单纯疱疹病毒

用抗单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）型共同性ｇＣ和ｇＤ羊克隆抗体（ＭｃＡｂ）,包被即Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管,捕捉ＨＳＶ,同时加入３个引物：一个是ＨＳＶ─１／ＨＳＶ─２型共同性上游引物,另两个分别是ＨＳＶ─１和ＨＳＶ─２型特异性下游引物。借此建立了能直接分型检测ＨＳＶ的抗原捕获聚合酶链式反应（ＡＣ─ＰＣＲ）。ＨＳＶ─１的扩增产物为４７７ｂｐ,ＨＳＶ─２的为３９９ｂｐ两型病毒经ＡＣ─ＰＣＲ扩增后产生分子量不同的ＤＮＡ片段,致使ＡＣ─ＰＣＲ能直接分型检测ＨＳＶ。ＨＳＶ─１和ＨＳＶ─２扩增产物的克隆和序列分析表明,本方法特异性好。用本法检测Ｂａｌｂ／ｃ幼鼠中枢神经系统ＨＳＶ感染的脑标本,进一步证实本方法不仅敏感、特异,而且分型准确。     

表达HSV－2 gD基因的重组痘苗病毒保护小鼠对抗致死量HSV病霉攻击

利用ＰＣＲ方法对单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白Ｄ（ＨＳＶ－２ｇＤ）基因进行了修饰,在其５＇端删去约５００ｂｐ的非编码区,仅保留ＡＴＧ上游７个ｂｐ。将修饰后的ＨＳＶ－２ｇＤ基因插入到带有痘苗病毒天坛株ＴＫ基因区段的痘苗表达质粒ｐＪＳＡ１１７５,置于痘苗病毒Ｐ７．５ｋ早／晚期启动子控制下。将此重组质粒用脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法转染已受野型ＴＫ￣＋痘苗病毒天坛株感染的ＴＫ￣－１４３细胞,通过同源重组机制和标志基因ＬａｃＺ产物的蓝斑显色作用,以及ＢｕｄＲ试剂对ＴＫ表型的选择压力,筛选出整合有ＨＳＶ－２ｇＤ基因的重组痘苗病毒。Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交表明,ＨＳＶ－２ｇＤ基因已正确地插入痘苗病毒ＴＫ基因区内;间接免疫荧光检测显示,ＨＳＶ－２ｇＤ蛋白已得到有效表达,且主要分布于细胞膜。重组病毒免疫家兔可产生明显的抗ＨＳＶ－２ｇＤ中和抗体。用重组病毒免疫小鼠,３周后可使９４％（１７／１８）的小鼠对抗ＨＳＶ－２的致死量攻击,表明重组病毒具有明显的免疫保护作用。     

抗原捕获聚合酶链式反应（AC—PCR）直接分型检测单纯疱疹病毒

用抗单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）型共同性ｇＣ和ｇＤ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,包被Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管,捕捉ＨＳＶ,同时加入３个引物：一个是ＨＳＶ－１／ＨＳＶ－型共同性上游引物,另两个分别是ＨＳＶ－１和ＨＳＶ－２型特异性下游引物。借此建立了能直接分型检测ＨＳＶ的抗原捕获聚合酶链式反应（ＡＣ－ＰＣＲ）。ＨＳＶ－１的扩增产物为４７７ｂｐ,ＨＳＶ－２的为３９９ｂｐ,两型病毒经ＡＣ－ＰＣＲ扩增后产生分子量不同的ＤＮ     

单纯疱疹病毒感染单位核—巨噬细胞

本文综述国外近年来对单核－巨噬细胞受单纯疱诊病毒（ＨＳＶ）感染的研究成果。单核－巨噬细胞对ＨＳＶ感染具有天然的内在抗性,这种抗性受遗传基因控制,不依赖于干扰素（ＩＦＮ）。单核－巨噬细胞的这种抗性因其组织来源和分化状态的不同而有程度上的差异。佛波酯类（ＰＭＡ）,脂多糖（ＬＰＳ）,α－肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）等可削弱这种抗性,促进ＨＳＶ在单核－巨噬细胞中增殖。