通过染色体外同源重组建立乳腺中表达外源基因的转基因小鼠

为研究染色体外重组方法在创建转基因动物中的应用,选取牛asl酪蛋白基因的5′及3′侧翼区和氯霉素乙酰化酶编码区,构建了两个具有3 kb相互重叠的融合基因.将这两个DNA片段末端脱磷酸后,以摩尔比1:1的比例混合,通过显微注射导入小鼠受精原核,最后获得了11个品系的转基因小鼠.对其中10个品系的小鼠的整合分析表明,所注射的两个DNA片段均发生了染色体外同源重组,而且除了 1个品系的小鼠丢失了大约1kb的序列外,其余品系小鼠的重组产物与预想的结构符合.在当代和后代的转基因小鼠乳汁中均可测到氯霉素乙酰化酶的活性.这表明融合基因在转基因小鼠乳腺中得到表达和分泌,也说明显微共注射两个相互重叠的基因片段是建立转基因动物的一个可行途径.     

不同酸水解酪蛋白对W135群和Y群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖产量的影响

目的 探索不同酸水解酪蛋白对W135群与Y群脑膜炎奈瑟菌(脑膜炎球菌)荚膜多糖产量的影响。方法 分别以NaCl质量分数为37%和14%的酸水解酪蛋白作为有机氮源配制改良半综合高盐培养基和低盐培养基,利用全自动细菌发酵罐分别在两种培养基里培养W135群和Y群脑膜炎球菌,比较这两种菌株在两种培养基中的生长时间、收获液菌密度( A 600 nm 值)、收获液去菌体后与去复合多糖后上清中的荚膜多糖含量,以及纯化后的精糖产量;比较高盐培养基收获液及其2倍稀释液中不同终含量的十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide, CTAB)溶液对多糖沉淀效果的影响。结果 W135群与Y群脑膜炎球菌在两种培养基中的培养时间差异无统计学意义( P >0.05),但高盐培养基收获液的菌密度、收获液去菌体后上清液中的多糖含量均高于低盐培养基收获液,差异有统计学意义( P < 0.05),而高盐培养基收获液纯化后的精糖产量低于低盐培养基,差异有统计学意义( P <0.05)。高盐培养液2倍稀释后,在CTAB终体积分数为0.04%时,W135群与Y群脑膜炎球菌多糖全部沉淀,而未稀释高盐培养液即使CTAB终体积分数提高到0.14%,依然也不能完全沉淀 W135群与Y群脑膜炎球菌多糖。结论 不同酸水解酪蛋白对W135群和Y群脑膜炎球菌的生长密度和荚膜多糖产量有影响,用CTAB溶液沉淀荚膜多糖时需控制收获液盐含量。     

乳山羊αsi-酪蛋白基因启动子的功能测试

小鼠乳腺上皮细胞株NmuMG于4种不同培养系统中,利用内分泌素诱导后都可形成类腺泡细胞。唯有其中以培养于EHS-Insert’系统之细胞,最早于12小时就形成类腺泡结构,以后试验而将带有5种不同表现质体的NMuMG细胞培养于EHS-Insert’系统,经体外培养3～6天,转染乳牛BCN／GFP,经删减过后的乳     

木瓜凝乳蛋白酶的酶学性质研究

以酪蛋白为底物,木瓜凝乳蛋白酶的最适反应温度为80℃(pH7.0),最适pH为3-5(37℃)。在pH为7.0、反应温度为37℃的条件下,木瓜凝乳蛋白酶的Km值为1.25g·L-1,Vmax为0.1 g·L-1min-1。低浓度的NaCl和Ca2+对木瓜凝乳蛋白酶有激活作用,盐酸胍对其有抑制作用。     

银苗的组织培养与快速繁殖

1　植物名称　银苗 (Stachysfloridana)又称地灵、银条菜、银根芽。2　材料类别　茎尖。3　培养条件　芽分化培养基 :( 1 )MS + 3%糖 (云南产食用白砂糖 ,下同 )。增殖培养基 :( 2 )MS +6 BA 0 .1mg·L- 1 (单位下同 ) +IBA 0 .2 +CH(酸水解酪蛋白 ) 1 5 0 + 3%糖 ;( 3) 1 /2MS +IAA 0 .2 +2 .5 %糖。生根培养基 :( 4 ) 1 /2MS +IAA 0 .2 +IBA 0 .1 + 3%糖。上述培养基均加入 0 .5 5 %纯化琼脂粉 ,pH5 .8,1 2 1～ 1 2 3℃高温灭菌 1 5min。培养室温度 1 8～ 2 8℃ ,光照时间 1 2h·d- 1 ,光照度1 5 0 0～ 2 5 0 0lx。4　生长与分…     

牛乳腺上皮细胞的分离培养及其生物学特性

采用胶原酶消化法和胰蛋白酶选择性消化法分离、培养和纯化牛乳腺上皮细胞。形态学观察表明，培养的细胞具有典型的上皮细胞形态特征；染色体分析结果表明，培养的细胞具有正常的染色体数目。通过荧光免疫细胞染色方法鉴定了培养的细胞表达上皮细胞特异的角蛋白5和8。该细胞在添加胰岛素、氢化可的松以及羊催乳素的无血清培养液中诱导培养时，用RT-PCR方法检测到了β-酪蛋白基因的转录。这些结果表明，分离培养的细胞是乳腺上皮细胞，这些细胞在诱导培养的条件下能够转录表达β-酪蛋白。     

云南野生早花象牙参的组织培养和快速繁殖

1植物名称早花象牙参(Roscoea cautheoides). 2材料类别幼嫩的叶片. 3培养条件(1)诱导培养基:MS 6-BA 1.5 mg·L-1(单位下同) NAA 0.1 水解酪蛋白800 椰子汁50mL·L-1;(2)分化培养基:MS 6-BA 1.0 NAA 0.1;(3)增殖培养基:MS 6-BA 0.6 NAA 0.1;(4)生根培养基:1/2MS 6-BA 0.6 NAA 0.1 活性炭0.1%.上述培养基均加0.6%琼脂、3%蔗糖,pH 5.8.培养温度(20±1)℃、光照时间10 h·d-1,光照度2 000 lx.     

Ⅰ型酪蛋白激酶的研究进展

Ⅰ型酪蛋白激酶(CKI)属丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在真核生物中广泛存在,结构高度保守。在生物生长发育过程中CKI参与多种细胞功能及发育过程的调节,具有非常重要的作用。本文从CKI的结构、生理功能、调节机制以及近年来CKI在哺乳动物、酵母和植物中的分类与功能等方面进行综述,为进一步研究其在代谢及信号转导中的作用,明确其在生长发育等调控网络中的地位提供理论指导。     

HBD-3基因的乳腺特异性表达载体的构建及真核表达

为了制备高效表达人β-防御素-3基因的转基因奶牛提供可靠的核移植供体细胞,本试验采用RT-PCR从人胎盘组织获得人β-防御素3cDNA,通过双酶切法将目的基因片段hBD插入到质粒pBCP之间,最后再通过双酶切法将目的片段BCD插入到真核表达载体pEGFP-C1中,最终构建乳腺特异性表达载体pEBCD。脂质体介导法转染奶牛胎儿成纤维细胞G418,抗性筛选3~4周后,经PCR、RT-PCR扩增检测和报告基因EGFP表达检测,得到稳定整合外源基因的转基因供体细胞;同时检测稳定转染的奶牛乳腺上皮细胞系的上清液,检测到重组人β-防御素-3蛋白可以在奶牛乳腺上皮细胞组织特异性表达。     

黑暗与光明：植物Ⅰ型酪蛋白激酶的功能探索

真核生物的CK1十分保守,从酵母和动物中的研究来看,CK1具有非常重要的功能,参与调控各个方面的生命活动。在植物中CK1家族大大倍增,如双子叶植物拟南芥有17个成员,单子叶植物水稻有15个成员,但是相关的功能报道比较少。中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所薛红卫研究组曾发现CKI在水稻中参与了油菜素内酯和赤霉素等激素信号响应过程。最近,他们以模式植物拟南芥为系统,采用遗传学和生物化学的手段,发现CK1的两个成员CK1.3和CK1．4可以以蓝光诱导的方式磷酸化蓝光受体CRY2,并促进其降解。这项工作不仅鉴定出CK1是蓝光信号途径的重要组分,并且阐明了隐花色素信号转导中一种信号消减机制,大大增进了对于植物中蓝光信号转导机制的理解和CK1功能的认识。