波形蛋白介导猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞作用的初步研究

为了研究波形蛋白在介导PRRSV感染过程中的作用,根据GenBank中已发表的波形蛋白序列,设计特异性引物,利用RT-PCR方法从Marc-145细胞中扩增目的基因,克隆入pET-28a,转化表达菌BL21(DE3)中进行诱导表达,用SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,将表达产物纯化后免疫BALB/c小鼠制备血清,用病毒阻断实验验证PRRSV与波形蛋白及其抗体的关系。用ELISA方法确定了重组波形蛋白与PRRSV结构蛋白N蛋白和囊膜蛋白GP5蛋白之间的关系。结果表明,成功的从Marc-145细胞中扩增出全长的波形蛋白基因,将其克隆入pET-28a,诱导后得到高效表达,表达蛋白纯化后免疫小鼠抗体效价达到105,病毒阻断实验表明波形蛋白能部分阻断PRRSV感染,其抗血清能完全阻断PRRSV感染。ELISA结果表明波形蛋白能与N蛋白结合而不与GP5蛋白结合。此结果为PRRSV感染的细胞的受体机制增添了新的内容,为PRRSV感染过程中受体间的相互作用关系研究奠定基础。     

波形蛋白在实验性肾间质纤维化上皮-间充质转分化中的表达及意义

目的明确肾脏纤维化中波形蛋白表达在上皮-间充质转分化观察中的意义。方法雄性SD大鼠12只,随机分成假手术组和模型组,模型组行单侧输尿管梗阻术。造模后14天处死大鼠,分别采用免疫组织化学染色和Western印迹法对梗阻侧肾组织波形蛋白和α平滑肌肌动蛋白作定性和定量检测。并通过体外实验用TGF-β1刺激诱导人近端小管上皮细胞株(HK-2)发生上皮-间充质转分化。采用间接免疫荧光法对E-钙粘蛋白和波形蛋白进行染色,采用激光共聚焦显微镜观察细胞形态改变,并用蛋白印迹法定量检测HK-2细胞波形蛋白和α平滑肌肌动蛋白表达水平。结果萎缩和扩张的肾小管上皮细胞出现波形蛋白和α平滑肌肌动蛋白表达,肾组织中波形蛋白和α平滑肌肌动蛋白表达量显著增加;正常的HK-2细胞,细胞形态为不规则圆形,TGF-β1刺激后细胞伸展成长梭形;细胞α平滑肌肌动蛋白表达水平显著增加,波形蛋白表达水平无显著变化。结论体内实验研究上皮-间充质转分化,将波形蛋白作为间充质细胞标志物具有较好的参考价值,而体外研究中,其标志作用尚存在争议。     

类风湿性关节炎成纤维样滑膜(FLS)细胞中DDR2相互作用分子的筛选鉴定及其对FLS细胞侵袭能力的影响

目的:在类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜(FLS)细胞中筛选并鉴定盘状结构域受体2(DDR2)的相互作用蛋白,并研究其对FLS细胞侵袭能力的影响。方法:首先利用免疫沉淀结合SDS-PAGE分离鉴定DDR2互作蛋白波形蛋白,进而采用免疫沉淀和激光共聚焦实验,进一步验证波形蛋白是DDR2的相互作用蛋白,最后采用Transwell实验考察波形蛋白对RA FLS细胞侵袭能力的影响。结果:Ⅱ型胶原刺激引起RA FLS细胞中DDR2的磷酸化水平升高,DDR2被活化,活化前后共有8个DDR2相互作用蛋白发生变化,经质谱分析,其中变化最大的是波形蛋白和膜联蛋白A2;在HEK293T细胞中,免疫共沉淀结果显示Fc DDR2与波形蛋白存在相互作用;激光共聚焦结果显示在RA FLS细胞中,DDR2和波形蛋白存在共定位;下调RA FLS细胞中波形蛋白的表达后,细胞的侵袭能力较对照组显著下降。结论:波形蛋白是DDR2的相互作用蛋白,Ⅱ型胶原可引起RA FLS细胞的DDR2磷酸化水平升高,并通过波形蛋白促进RA FLS细胞的侵袭。     

中间纤维与疾病

中间纤维(intermediate filament,IF)与微管、微丝一起组成细胞骨架的蛋白质纤维网络体系。三种骨架纤维中最复杂的是IF,它由最大的基因家族所编码,组成了一个包含73个成员的蛋白大家族。IF除了支架作用还形成复杂的信息平台,并与各种激酶、受体和凋亡蛋白相互作用。目前,已知80多种人类相关疾病包括皮肤起泡、肌肉萎缩症、心肌病、早衰综合征、神经退行性疾病和白内障等与IF有关,且数量仍在增长。其中,IF的变异至少与30多种人类组织特异性疾病有关,在几种神经退行性疾病、肌肉疾病或其他相关疾病还会出现特征性的包涵体。IF可作为细胞类型的标志,其抗体被广泛应用于病理诊断,因此研究这些疾病与IF之间的相互联系、揭示它们的作用机制对全面认识IF在细胞和组织中所起的作用以及对临床疾病的治疗有着重要意义。     

大鼠牙胚成釉细胞中波形蛋白的免疫组化研究

目的：观察和研究波形蛋白在大鼠牙胚成釉细胞中的分布状况,探讨其在牙釉质形成中的作用。方法：取生后1,3,6,9d大鼠下颌切牙牙胚,用免疫组织化学方法显示其成釉细胞中的波形蛋白,并进行观察。结果：在1,3,6d的标本的成釉细胞中有不同程度的波形蛋白的阳性反应产物沉积。结论：在成釉细胞分泌形成牙釉质的过程中,有波形蛋白的存在,它们与成釉细胞的分化和牙釉质基质的形成相关。     

胚胎小肠Cajal细胞的发育研究

目的研究人胚胎小肠cajal细胞的发育变化规律。方法采用全层铺片结合切片的免疫细胞化学技术。结果Cajal细胞呈酪氨酸激酶受体(Kit)和波形蛋白(vinlentin)免疫反应阳性。在胚胎发育早期,cajal细胞较少,为单层,稀疏分布于肌间神经丛周围,细胞为梭形,可见两个短而小的突起,未见分支;随着胎龄的增加,Cajal细胞数量增多,胞体增大,突起伸长,并出现分支。此时,肌间神经丛周围的Cajal细胞出现两层,其长轴彼此垂直,分别平行于环行肌和纵行肌。与此同时环行肌层内亦可见少许Cajal细胞;出生前,肌间神经丛部位的Cajal细胞接近成熟,两层细胞的突起进一步增多、伸长,彼此间形成与成人相似的完整的细胞网络。此时深肌丛附近亦可见少量Cajal细胞。结论人的小肠Cajal细胞发育有一定的时间顺序,即肌间神经丛周围最先出现,肌内次之,深肌丛较晚,出生前肌间神经丛周围的Cajal细胞已经接近成熟。这种发育演变若发生异常,可能导致某些胃肠动力障碍性疾病。     

波形蛋白在不同年龄大鼠脊髓后角表达

目的:检测波形蛋白(Vimentin)在不同年龄大鼠脊髓后角的表达,探讨Vimentin在大鼠脊髓成熟和衰老过程中的表达变化.方法:对新生(7天龄)、成年(2月龄)、老年(24月龄)大鼠脊髓进行Vimentin和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光双标染色,并进行荧光强度的定量分析.结果:新生组Vimentin阳性产物荧光强度(59.73±9.92)较强,成年组Vimentin阳性产物荧光强度(43.26±7.99)较新生组弱,老年组Vimentin阳性产物荧光强度(40.65±6.84)较成年组弱,两组间差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:脊髓后角新生组、成年组、老年组Vimentin的表达随着年龄的增长而降低.     

Vimentin在肿瘤转移中的作用及药物研究进展

波形蛋白(vimentin)是存在于间充质细胞中的一种中间丝蛋白,近些年研究显示vimentin与肿瘤发生、转移密切相关。波形蛋白调节细胞骨架蛋白、细胞粘附分子等蛋白间的相互作用,参与肿瘤细胞和肿瘤相关内皮细胞、巨噬细胞的粘附、迁移、侵袭和细胞信号转导。其高度动态的聚合解聚间的平衡和其复杂的磷酸化形式可能是vimentin参与肿瘤转移过程及细胞-细胞间相互作用的调节机制。Vimentin在肿瘤中的功能提示,其可能是抗肿瘤转移治疗药物研究的新靶点。     

猫内侧膝状体年龄相关性形态学变化

目的比较青年猫和老年猫内侧膝状体神经元及S100蛋白与波形蛋白表达的年龄相关性变化。方法Nissl染色显示内侧膝状体结构及神经元,免疫组织化学方法示S100免疫反应阳性（S100-IRS100-immunoreactive）细胞及波形蛋白免疫反应阳性（Vimentin-IR Vimentin-immunoreactive）细胞。光镜下观察,利用图像分析软件进行图像采集分析。结果青年猫和老年猫内侧膝状体神经元数量及胞体直径无明显改变（P〉0.05）;与青年猫相比,老年猫内侧膝状体各分区中S100-IR细胞与Vimentin-IR细胞密度均显著增大,且免疫阳性反应强度增强（P〈0.01）,提示老年会导致内侧膝状体S100与波形蛋白表达显著增强。结论在衰老过程中,内侧膝状体处于静息和激活状态的星形胶质细胞均出现明显的增生,这对维持老年个体内侧膝状体神经元的正常形态和功能,从而延缓老年性听觉功能衰退可能具有重要作用。     

盆底超声参数预测剖宫产术后压力性尿失禁的效能及其与盆底组织E-cadherin和Vimentin表达的关系研究

摘要 目的：研究盆底超声参数预测剖宫产术后压力性尿失禁（SUI）的效能及其与盆底组织钙粘附蛋白E（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）表达的关系。方法：选取2020年1月～2021年1月湖南省妇幼保健院收治的124例剖宫产患者。将其按照是否发生SUI分为SUI组18例以及无SUI组106例。对所有患者均进行盆底超声检查,比较两组静息期（R）、张力期Valsalva动作（V）的膀胱尿道后角（PUA）以及膀胱颈到耻骨联合下缘水平垂直距离（BNS）,膀胱颈移动度（BND）、尿道旋转角度（UR）。通过受试者工作特征（ROC）曲线分析盆底超声参数预测剖宫产术后SUI的效能。另外,对比两组盆底组织E-cadherin和Vimentin mRNA水平,采用Pearson相关性分析各项盆底超声参数和盆底组织E-cadherin、Vimentin mRNA表达的相关性。结果：SUI组R-PUA、V-PUA、BND以及UR均高于无SUI组,而R-BNS以及V-BNS均低于无SUI组（均P＜0.05）。ROC曲线分析结果：各项盆底超声参数联合预测剖宫产术后SUI的效能均优于各项参数单独预测。SUI组盆底组织E-cadherin mRNA水平低于无SUI组,而Vimentin mRNA水平高于无SUI组（均P＜0.05）。经Pearson相关性分析发现,R-PUA、V-PUA、BND、UR均和盆底组织E-cadherin mRNA水平呈负相关关系,与Vimentin mRNA水平呈正相关关系;而R-BNS、V-BNS均和盆底组织E-cadherin mRNA水平呈正相关关系,与Vimentin mRNA水平呈负相关关系（均P＜0.05）。结论：盆底超声参数预测剖宫产术后SUI的效能较高,且和盆底组织E-cadherin、Vimentin表达有关。