小鼠TIM1,TIM2和TIM3基因的克隆与序列分析

目的：克隆小鼠TIM1、TIM2及TIM3基因全长编码区cDNA,同时对其进行序列分析.方法：采用RT-PCR方法,从小鼠活化淋巴细胞中获取TIM1、TIM2及TIM3基因cDNA全长,克隆至pMD18-T载体,选择阳性克隆进行序列测定.结果：扩增得到小鼠TIM1、TIM2及TIM3基因编码区cDNA全长分别是918bp、918bp和846bp,分别编码306、306和282个氨基酸残基,与GeneBank中发表的序列完全一致.结论：获得小鼠TIM1、TM2及TIM3基因的全长克隆,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.     

改良DDRT-PCR研究苦参碱诱导K562细胞分化相关的差异表达基因

苦参碱是传统中药苦参的有效成分之一 .我们的前期实验表明 ,一定浓度的苦参碱可诱导人白血病K5 6 2细胞向成熟方向分化[1] .为深入研究其诱导分化的分子机制 ,本文以改良的DDRT PCR技术分析苦参碱作用K5 6 2细胞前后基因表达的差异 ,并利用生物信息学的方法对差异表达的基因进行比较与分析 .1　材料与方法1 1　材料1 1 1　细胞株　对照组K5 6 2细胞与苦参碱 (0 2g L)处理组K5 6 2细胞 .1 1 2　E .coliJM10 9工程菌　引自重庆医科大学附二院肝炎研究所 .1 1 3　主要试剂　苦参碱 (Mr =2 4 8 36 ,纯度99 9% ) :由日本大正制药公司惠…     

苦参提取液诱导K_(562)细胞分化的细胞化学观察

苦参是常用的中药,广泛应用于临床各科,特别是它的抗肿瘤作用正日益受到关注。本文用苦参提取液（１２ｇ／Ｌ）作诱导分化剂,以人红白血病细胞株Ｋ５６２作实验模型,培养三天,每天作细胞化学染色。用药后Ｗｒｉｇｈｔ＇ｓ＿Ｇｉｅｍｓａ染色,细胞形态有分化成熟的趋势。髓过氧化物酶染色（ＭＰＯ）阳性,糖原反应（ＰＡＳ）阳性,ａ－醋酸荼酚酯酶（α－ＮＡＥ）阴性。对照组上述染色均为阴性。结果表明苦参有促Ｋ５６２细胞向粒系和红系分化的现象,提示苦参可能对白血病的非杀伤性治疗有作用     

NGAL蛋白诱导食管癌细胞发生自噬

以往研究证明,中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)与食管癌密切相关,改变NGAL表达能够对癌细胞的形态结构产生明显影响,但确切的作用机制不明．在酵母细胞中表达NGAL蛋白,柱层析分离纯化．筛选NGALR(NGAL receptor)高表达与弱表达的人食管癌细胞系EC1.71和EC109作为实验细胞模型．5-FAM标记NGAL蛋白,加入到细胞培养上清中,对比研究NGAL蛋白入胞情况、细胞形态学改变、细胞自噬体产生、自噬相关基因表达、细胞内铁离子与铁蛋白水平以及相关细胞信号转导激酶的活性等．结果表明,NGAL蛋白可经由内吞途径进入食管癌细胞发挥作用,致使细胞发生典型的自噬性形态结构变化,自噬体大量产生,自噬相关基因的表达发生相应变化,ERK被激活,但细胞内的铁离子与铁蛋白未受明显影响．上述结果提示,诱导细胞发生自噬是外源性NGAL蛋白经由内吞途径进入食管癌细胞发挥作用的机制之一,与NGAL蛋白跨膜转铁未见直接关联,而ERK信号转导途径可能参与了这一过程．