一个新的粗糙脉孢霉基因组DNA制备方法

粗糙脉孢霉基因组DNA的制备多数费工费时,并且需要液氮研磨。而一般实验室没有液氮设备。本文提供了一个不需要液氮研磨就可以快速制备粗糙脉孢霉基因组DNA的方法,使用裂解液、石英砂和苯酚振荡裂解细胞壁,然后用苯酚／氯仿抽提DNA。利用PCR从基因组扩增出粗糙脉孢霉Ⅰ号染色体右臂上的校孔转运蛋白基因片段。     

均匀设计法优化灰树花深层培养基配方

系统研究了碳源、氮源、无机盐、维生素等培养基因素对灰树花深层发酵菌丝体产量的影响 ,并通过均匀设计法优化了发酵培养基配方。结果表明 :4 6 %玉米粉、3 5 %豆饼粉、0 1%葡萄糖、0 32 %KH2 PO4 、0 0 1%MgSO4 、少量VB1的培养基配方可使菌丝体产量达到最大。采用此配方试验 ,菌丝体产量平均值达 1 77± 0 0 6g/10 0mL。     

快速制备酵母质粒和基因组DNA PCR模板

发展了一个利用煮沸法快速制备酵母质粒和基因组DNA PCR模板的程序,成功地从低拷贝的ARSCEN酵母质粒和酵母基因组扩增到了相应基因。     

转多基因水稻植株的获得

将2-3个外源目的基因与筛选标记基因hpt连在同一个载体上,用基因枪法对1个粳稻品种和4个籼稻品种进行了转化,粳稻中花8号转化频率最高为56.4%,灿稻七丝软占、特青、奇妙香、九六零转化频率分别为6.4%,2.5%,2.8%和1.7%,分子杂交实验证明,通过两次潮霉素抗性筛选的T0代再生植株100%含有hpt基因,其中70%以上含有外源目的基因的完整表达结构。遗传分析表明,大部分T1代植株中潮霉素抗敏比符合盂德尔3：1的分离规律。     

霍乱肠毒素B亚单位在转基因番茄中表达的研究

将霍乱肠毒素B亚单位（CT－B）基因及内质网引导序列（SEKDEL）克隆到质粒pRTL2和pBI121中,分别构建植物双元表达载体pBI-CTB和pBI-CTBK,CT-B基因由Ca35S启动子控制表达。采用叶盘法经根癌农杆菌介导转化番茄（金丰1号,Jinfeng1)各表达载体得到一批转基因植株。经PCR和Southern blot分析表明CT－B基因整合到了番茄基因组中;ELISA和Western blot分析表明pBI-CTB和pBI-CTBK的转基因植株能够有效表达CT－B多肽,分别占番茄叶片可溶性蛋白的0.055%和0.084%。     

植物抗病毒基因工程的研究进展

自１９８６ 年首次成功获得转基因抗病毒植物以来,植物抗病毒基因工程的研究与应用在世界各地蓬勃发展。本文综述了国内外在这方面的研究进展及最新成就,以及此领域的存在问题和前景展望。     

利用农杆菌系统将超甜定基因导入烟草

由pUR528构建中间载体pEHT9,再构建超甜定植物表达载体pBIT7。通过直接转化法将pBIT7导入农杆菌,然后利用农杆菌系统转化烟草。经PCR、PC R-S outhern和Southern杂交证实,超甜定基因已整合到烟草基因组中。 Abstract:pEHT9 was constructed from pUR528,and used for the construction of plant thaumatin expression vector pBIT7.Then pBIT7 was introduced to Agrobacterium through direct transformation.Subsequently tobacco was transformed through Agrobacterium-mediated system.It has been confirmed that thaumatin gene has integrated into the genome of transgenic tobacco by PCR,PCR-Southern and Southern blot analyses.     

一些被子植物小孢子小配子发生过程的细胞化学研究

植物的小孢子发生(包括减数分裂)和小配子发生过程的细胞-胚胎形态学的研究给人们揭示了很多重要的规律(如:相对染色体的配对与分离等等)。可是,迄今为止,我们对于这个过程的内在细胞生理变化却了解得不够,对于这个问题也仅有为数不多的文献报导。本文的目的是研究在小孢子和小配子发生的过程中,一些对细胞生活有重要意义的化学物质(如:核酸、蛋白质等)的动态,以便为进一步认识这个复杂的细胞发展过程提供资料。     

金鱼草（Antitthinum majus L．）下胚轴外植体不定芽的高频再生

本文发展的技术可以使金鱼草下胚轴外植体不定芽高频再生。添加有２ｍｇ／ｌＢＡＰ和０．５ｍｇ／ｌＮＡＡ的ＭＳ培养基上再生芽出得又快又多，淡黄色愈伤组织易于形成并存活。但主要依赖的是６－ＢＡＰ。ＭＳ培养基中含有０．１ｍｇ／ｌ或６ｍｇ／ｌ浓度的６－ＢＡＰ均能刺激芽的发育，最适浓度为２－３ｍｇ／ｌ．仅加２，４－Ｄ，也能形成正常的黄色愈伤组织。但这样形成的愈伤组织在只含有０．１－６ｍｇ／ｌ６－ＢＡＰ或含有２ｍｇ／ｌ６－ＢＡＰ和０．５ｍｇ／ｌＮＡＡ的ＭＳ培养基上均不能分化生出再生芽来。仅加ＮＡＡ，能够刺激下胚轴形成根。加入ＡｇＮＯ＿３，则抑制不定芽的再生，并导致整个外植体变成棕色而死亡。组织化学分析结果表明：不定芽的再生源于下胚轴外植体表皮细胞。在不含有任何生长调节剂的ＭＳ培养基上，再生苗均能形成根。再生植株移栽至花盆可开花结实。     

快速制备酵母质粒和基因组DNA PCR模板*

发展了一个利用煮沸法快速制备酵母质粒和基因组DNAPCR模板的程序 ,成功地从低拷贝的ARSCEN酵母质粒和酵母基因组扩增到了相应基因。