香菇C91-3转录本Unigene 24277基因克隆表达及其生物学活性的研究

通过对香菇C_91-3转录本Unigene 24277基因的生物信息学分析,克隆表达含RCC1结构域的Unigene 24277基因,并研究其抗肿瘤活性。从香菇C_91-3菌丝体中提取总RNA,反转录合成cDNA,并利用Rapid Amplification of cDNA Ends（RACE）技术获得基因全长。NCBI数据库分析提示其含有RCC1结构域。PCR扩增RCC1结构域,将其克隆产物与pET-32a（+）载体连接,热转化至E.coil Rosetta-gami（DE3）中诱导表达,纯化、复性后,通过MTT法研究其抗肿瘤活性。结果显示原核表达载体构建成功,重组蛋白成功诱导表达,并初步证明了重组蛋白具有抑制肿瘤细胞增殖活性的功能,为后续抗肿瘤机制的探究奠定了基础。     

灵芝多糖对荷瘤小鼠肿瘤免疫系统的影响

目的:观察灵芝多糖对荷瘤小鼠免疫系统的影响.方法:纯系BALB/c小鼠30只,用U14瘤细胞荷瘤建立动物模型,随机平均分为三组:灵芝多糖治疗组、环磷酰胺治疗组、生理盐水对照组.观察灵芝多糖对荷瘤小鼠NK细胞活性、淋巴细胞转化率、TNF-α等免疫指标的影响.结果:灵芝多糖能够显著提高治疗组小鼠的NK细胞活性、淋巴细胞转化率和血清中TNF-α、IL-2的含量.结论:灵芝多糖能够显著提荷瘤小鼠免疫系统的活性.     

灵芝菌丝发酵提取液减肥作用的初步探讨

目的:对灵芝菌丝发酵提取液的减肥作用进行初步研究.方法:用高营养饲料建立营养性肥胖小鼠模型后,治疗组用灵芝菌丝发酵提取液灌胃,对照组用无菌生理盐水,观察体重变化.结果:灵芝菌丝发酵提取液能明显降低肥胖小鼠体重.讨论:灵芝菌丝发酵提取液具有减肥、降低体重作用.     

铜绿假单胞菌分泌性蛋白的抗肿瘤效应

目的探讨3株不同来源的铜绿假单胞菌分泌性蛋白的抗肿瘤活性。方法将3株不同来源的铜绿假单胞菌经LB培养基对其过夜静置培养,离心获得上清液,采用硫酸铵盐析沉淀蛋白质,再经PBS透析除盐。然后将蛋白作用于人肝癌细胞Hep-G2、宫颈癌细胞HeLa、肺癌细胞A549和人永生化表皮细胞HaCaT,CCK-8检测其对细胞的毒性作用,吉姆萨染色观察凋亡细胞形态变化。结果 SDS-PAGE证实成功获得不同分子量的分泌蛋白,CCK-8结果显示混合蛋白对3种不同肿瘤细胞的生长均有不同程度的抑制作用,且其抑制作用存在一定的时间和浓度依赖性,但对人正常细胞无明显抑制作用。吉姆萨染色初步显示细胞形态为凋亡状态。结论初步证实该3株铜绿假单胞菌产生的分泌性蛋白具有不同程度的抗肿瘤作用,为进一步分离纯化具有抗肿瘤活性的单一蛋白质及研究其抗肿瘤机制提供依据。     

湛江高桥红树林和盐沼湿地的大型底栖动物次级生产力

为了比较湛江高桥潮间带不同植物生境的大型底栖动物次级生产力,根据2010年4个季度湛江高桥潮间带生境的大型底栖动物数据,运用Brey经验公式计算不同植物生境的大型底栖动物次级生产力.结果表明:湛江高桥红树林和盐沼湿地不同生境大型底栖动物平均次级生产力为11.77 g AFDM·m-2·a-1.其中,无瓣海桑生境次级生产力最高,为18.16 g AFDM·m-2·a-1,其次是桐花树、盐地鼠尾粟和木榄生境,分别为17.67、8.34和2.92 g AFDM·m-2·a-1.在4种生境中,木榄生境的年生产力/年均生物量(P/B)最高,为2.38,其次是无瓣海桑、盐地鼠尾粟和桐花树生境,分别为1.23、0.99和0.48.湛江高桥潮间带不同植物生境大型底栖动物次级生产力和P/B值的差异主要与总有机碳含量、食物类型和动物个体大小有关.     

组胺H3受体激活剂高通量筛选细胞模型的研究

摘 要 目的 建立基于报告基因的组胺H3受体（H3R）激活剂的高通量筛选模型,用此模型对收集到的中草药化合物组分进行筛选,以发现新的组胺H3R激活剂。 方法 将H3R基因质粒（H3R/pCDNA3.1-hygro）与报告基因质粒（3XCRE-LUC）按3：1的比例共转染入HEK293细胞,建立了稳定的H3R配体的报告基因筛选细胞株。激活剂与细胞表面H3R结合后,激活相应的信号通路,调节Forskolin刺激后的报告基因的表达,通过测定荧光素酶报告基因表达水平的变化,评估激活剂影响H3受体的生物活性。 结果 通过对筛选条件,如激活剂孵育时间、Forskolin终浓度、化合物溶剂的选择、溶剂DMSO终浓度等的优化,建立了可靠的筛选方法,并对多种中草药萃取物进行了筛选,找到了两种对H3R有活性的中药组分。结论 建立的细胞模型可以有效的应用于以组胺H3受体为靶点的高通量药物筛选。     

乳酸杆菌代谢产物对一些常见菌黏附阴道上皮细胞的抑制作用的初步探讨

目的 探讨乳酸杆菌代谢产物对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌黏附阴道上皮细胞的抑制作用.方法 刮取健康妇女阴道上皮细胞进行体外培养,观察在乳酸杆菌代谢产物的干预下大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌黏附阴道上皮细胞的情况.结果 和结论 乳酸杆菌代谢产物能够明显抑制大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌对阴道上皮细胞的黏附.     

灵芝多糖抗肿瘤作用的初步探讨

目的 :初步探讨灵芝多糖对小鼠肿瘤的抑制作用。方法 :观察灵芝多糖对 S180 、U14腹水型荷瘤小鼠生存期的影响 ,了解灵芝多糖对 S180 、U14、H2 2 肿瘤细胞有无直接杀伤作用 ,以寻找治疗肿瘤的新方法。结果 :灵芝多糖能够显著延长荷瘤小鼠的生存期 (P<0 .0 5) ,治疗组小鼠的生存期比对照组小鼠的生存期明显延长 ,但是灵芝多糖对肿瘤细胞无直接杀伤作用 (P<0 .0 5)。结论 :灵芝多糖抗肿瘤作用是通过机体的免疫系统介导的。     

定量评价天敌昆虫控害功能的稳定同位素方法

天敌在区域性多作物农田景观系统中辗转捕食害虫,对调节和控制害虫种群数量发挥着非常重要的作用。明确天敌昆虫的食物来源和扩散规律是定量评价其控害功能的重要环节。其中,稳定同位素标记方法是追溯生物个体的食物来源和探究其运动规律的重要手段。本文首先介绍该标记方法的基本原理,接着以天敌昆虫龟纹瓢虫Propylea japonica(Thunberg)为例,应用稳定同位素碳标记方法追溯其在棉花和玉米农田景观系统中取食来源与食物比例;最后叙述了稳定同位素方法的应用前景和存在的问题。     

香菇C_(91-3)转录本Unigene8290基因结构域片段的克隆表达及其抗肿瘤活性初步研究

目的通过对香菇C91-3转录组进行筛选,并克隆表达含RCC1(染色体浓缩调控蛋白)和ANK(锚蛋白)结构域的Unigene8290基因,研究其抗肿瘤活性。方法从香菇C91-3菌丝体中提取总RNA,反转录合成cDNA,并利用Rapid Amplification of cDNA Ends(RACE)技术获得基因全长。生物信息学分析其结构域。设计特有引物,采用PCR技术扩增该结构域,将其克隆产物与pET-32a(+)载体连接,热转化至E.coil Rosetta-gami(DE3)中诱导表达,纯化、复性后,通过MTT法研究其抗肿瘤活性。结果生物信息学显示Unigene8290基因具有RCC1和ANK结构域,琼脂糖凝胶电泳与测序结果显示Unigene8290基因的结构域片段与pET-32a(+)载体重组成功,SDS-PAGE与Western blot结果显示Unigene8290蛋白成功表达,MTT结果显示该重组融合蛋白对HepG2细胞生长具有明显的抑制作用,并且其抑制作用存在一定的时间和浓度依赖性。结论成功诱导Unigene8290的RCC1和ANK结构域蛋白表达,并初步鉴定其具有抑制HepG2肿瘤细胞增殖活性的功能。