犬细小病毒VP2基因在枯草芽孢杆菌中的表达及鉴定

从犬细小病毒/犬瘟热二联苗中提取CPV基因组,根据GenBank发表的CPV-VP2基因序列设计一对引物,对VP2基因进行PCR扩增,并克隆至TA Cloning(R) Kit Dual Promoter( pCRⅡ),获得克隆栽体pCRⅡ-VP2.将重组质粒亚克隆到枯草芽孢杆菌表达载体pHT43上,获得重组表达栽体pHT43-VP2.经双酶切鉴定及序列比对分析后,将pHT43-VP2载体转化入枯草芽孢杆菌WB600中进行诱导表达,产物使用PAGE胶蛋白回收法纯化.结果表明,在69 kD处存在目的蛋白,ELISA检测发现,纯化后的目的蛋白与阳性血清存在特异性反应.     

提高叶绿体色素抽提效率的方法探讨

菠菜是“叶绿体色素提取和分离”实验中的常用材料。但受菠菜生长的季节性限制 ,有的季节采集不到 ,用其它植物绿叶 (树叶、蔬菜叶、野生植物叶 ) ,尤其是四季均可采到的常绿植物叶片替代 ,按教材的提取方法操作 ,所得到的色素提取液呈黄绿色 ,色素含量低 ,展层后 ,色素带颜色浅 ,有的色素带不能显现 ,实验效果差。分析其原因主要是 :1)对于角质层厚、机械组织多的绿叶 ,按常规方法研磨 ,组织、细胞破碎率低 ,提取出的色素绝对量少 ;2 )对含水量较高的蔬菜叶等 ,因过多水分的存在 ,降低了丙酮对色素分子的抽提效率。因此 ,实验中如何增加叶…     

一株产纤维素酶细菌的筛选、鉴定及产酶条件优化

目的：筛选1株产纤维素酶的细菌。方法：通过对从腐烂朽木及其附近土壤中得到的样品进行富集培养、分离纯化得到16株纤维素分解菌,经刚果红染色鉴定和液体发酵培养后对其进行了菌种初步鉴定及产酶条件的初步优化。结果：获得1株纤维素酶分泌量较高的细菌LT3。结论：LT3为革兰氏阳性菌,菌体成杆状,经发酵优化培养后,较适产酶条件为甘蔗渣20g/L,pH7.0、30℃培养120h,CMC酶活为71.17U/mL,滤纸酶活为33.37U/mL。通过克隆其16S rDNA序列,对其进行系统进化分析,鉴定为蜡状芽孢杆菌。     

天然兔源噬菌体单链抗体库的构建与鉴定

目的:构建天然兔源噬菌体单链抗体库。方法:采用RT-PCR法从未免疫的兔子脾脏中克隆得到抗体重链可变区(VH)与轻链可变区(VL)基因,重叠PCR将VH和VL拼接成scFv片段,将scFv连接到噬菌粒pComb3XSS上,电转入XL1-Blue菌中,得到单链抗体库,并用此抗体库筛选抗肌酸激酶抗体。结果:构建了容量为4×108,基因重组率95%的单链抗体库,DNA指纹图谱显示抗体库多样性良好。以肌酸激酶为抗原,从该库中筛到3株抗肌酸激酶的抗体。结论:分析表明构建的天然兔源单链抗体库质量良好,可用于快速筛选、制备多种单链抗体。     

李产区橘小实蝇转移为害规律研究

[目的]明确橘小实蝇Bactrocera dorsarlis(Hendel)在李产区不同寄主间的转移为害规律,为制定控制其种群的策略和防治技术提供参考和依据.[方法]选择广西李主产区,调查橘小实蝇潜在寄主种类、潜在寄主果实成熟期、寄主受害率及橘小实蝇成虫在各寄主上的转移为害规律,采用Pearson相关性分析与主成分分析方法分析影响橘小实蝇发生的气象因子.[结果]李产区不同月份成熟的11种瓜果中,李受害率最为严重,最高达22％,枇杷、酸梅、黄皮、沙糖橘、皇帝柑、柚和柿可作为橘小实蝇的潜在寄主;橘小实蝇的转移为害规律为枇杷(4月)→三月李、三华李、酸梅和黄皮(5-8月)→沙糖橘、皇帝柑、柚和柿(9-10月)→柿(11月);李产区橘小实蝇始见日和终见日分别为4月26日和12月22日,全年共有2个成虫发生高峰期,分别为7月上中旬和9月中下旬,其发生规律与气温显著相关.[结论]明确了李产区橘小实蝇的转移为害规律及其与气象因子的相关性,建议李产区应在4月份集中防治枇杷上的橘小实蝇有利于减轻对李的危害.     

利用帕金森症的果蝇模型测试具有神经保护作用的化学活性分子(英文)

帕金森症的果蝇模型对解析疾病的分子细胞机制贡献极大.为探讨利用地中海黑腹果蝇的疾病模型来筛选新型治疗帕金森症药物的可能性,我们构建了基于DJ-1A和PINK1两个遗传致病因子的帕金森症果蝇模型,测试抗氧化和消炎活性分子米诺环素和辅酶Q10对脑多巴胺浓度的影响.结果表明,米诺环素对DJ-1A果蝇模型有明显保护作用,能显著提高脑多巴胺的浓度,但是对PINK1果蝇模型没有保护作用;辅酶Q10对两种模型均有保护作用.因此,帕金森病的果蝇模型能够反映药物分子的特异性作用,为筛选新的帕金森病治疗药物提供了一条便捷的途径.