枯草杆菌脂肪水解酶LipA和LipB

源自枯草杆菌的分泌型脂肪水解酶LipA及LipB已经被克隆、表达并表征. 它们的分子结构特点、催化机理也已经被深入研究. 枯草杆菌脂肪水解酶因为具有较好的食品工业及化学工业等方面的应用潜力,已经吸引了越来越多的关注. 通过定向进化及高通量筛选的方法对酶分子进行改造,提高其热稳定性及立体选择性是近年的研究热点. 结合国外及本研究组的工作,本文对LipA和LipB的生化性质、结构特点以及采用基因工程突变的方法进行分子改造等方面的研究进展做一简要综述. 另外,对其中一些研究论文做了简要的评价,并提出对未来工作的展望.     

Aeropyrum pernix K1磷脂酶A2的克隆、表达及其性质

从超嗜热需氧古细菌AeropyrumpernixK1中抽提出染色体基因组,经PCR扩增得到磷脂酶A2基因,用带有His-tag标记的pET15b作为表达载体,在大肠杆菌BLP中成功地诱导表达。表达产物经过Ni-螯合柱一步得到纯化。SDS-PAGE检测只有一条带,其准确分子量为17,871kD。对纯化后的磷脂酶A2测定其酶活性和生物活性,得出其最适反应温度为90℃,最适pH范围为7.8~8.2。至此首次成功地在大肠杆菌中表达了古细菌嗜热磷脂酶A2,这将为以后对该酶的结构和功能以及耐热机制研究打     

Aeropyrum pernix K1磷脂酶A2的克隆、表达及其性质

从超嗜热需氧古细菌AeropyrumpernixK1中抽提出染色体基因组,经PCR扩增得到磷脂酶A2基因,用带有His-tag标记的pET15b作为表达载体,在大肠杆菌BLP中成功地诱导表达。表达产物经过Ni-螯合柱一步得到纯化。SDS-PAGE检测只有一条带,其准确分子量为17,871kD。对纯化后的磷脂酶A2测定其酶活性和生物活性,得出其最适反应温度为90℃,最适pH范围为7·8~8·2。至此首次成功地在大肠杆菌中表达了古细菌嗜热磷脂酶A2,这将为以后对该酶的结构和功能以及耐热机制研究打下很好的基础,同时有利于古细菌研究领域的扩展。