Spindle-view系统在猪卵母细胞去核中的应用

应用Spindle-view对体外成熟培养36、42、44和48h的猪体外成熟卵母细胞减数分裂纺锤体进行去核操作,并与传统去核方法(McGrath-Solter去核法,挤压去核法)相比较,结果表明:①在42~48h之间利用Spindle-view得到的猪卵纺锤体影像与极体的相对位置没有明显的变化;②Spindle-view适合用于猪体外成熟卵母细胞减数分裂纺锤体的观察及去核;去核效率与其他两种方法相比差异极显著(95.5%,42.1%,74.2%,P<0.01);③纺锤体成像是否清晰可用于猪卵母细胞的质量监控。     

七彩山鸡卵孵化的初步比较

七彩山鸡是雉鸡(Phasianus colchicus Linnaeus)被引种驯养后的商品名.它具有较高的观赏和食用价值.七彩山鸡养殖的发展,也是全面贯彻落实“加强资源保护,积极驯养繁殖,合理开发利用”的野生动物保护方针,充分发挥野生动物资源的生态、社会、经济三大效益的很有前途的养殖业[1].本实验用七彩山鸡与家鸡的卵进行孵化对比,在发育生物学和比较生物学方面为七彩山鸡繁殖提供基础资料.     

七彩山鸡与家鸡卵孵化的初步比较

七彩山鸡是雉鸡(Phasianus colchicus Linnaeus)被引种驯养后的商品名.它具有较高的观赏和食用价值.七彩山鸡养殖的发展,也是全面贯彻落实“加强资源保护,积极驯养繁殖,合理开发利用”的野生动物保护方针,充分发挥野生动物资源的生态、社会、经济三大效益的很有前途的养殖业[1].本实验用七彩山鸡与家鸡的卵进行孵化对比,在发育生物学和比较生物学方面为七彩山鸡繁殖提供基础资料.     

利用Cre/LoxP系统删除转基因山羊体内的选择标记基因

在制备转基因家畜过程中的一个关键步骤是使用选择标记基因 (Selectable marker genes,SMGs) 将转基因整合细胞从大量的正常细胞中筛选出来,这导致了SMGs整合入家畜的基因组内持续传递给后代。SMGs已被证明能够显著影响基因组内整合位点处的基因调控,也增加了对转基因动物安全评价的复杂性。为了确定转基因山羊制备过程中SMGs的删除时机和删除方法,在体细胞克隆前后两个时段内,利用Cre/loxP系统删除SMGs的可行性,同时比较了蛋白转导和质粒共转染两种Cre导入方式的删除效率。结果表明：尽管在首次对山羊成纤维细胞进行遗传修饰后即可进行SMGs删除,但两次遗传修饰导致细胞严重老化,无法用于后续的体细胞克隆羊制备。在转基因山羊的成体细胞中删除SMGs不存在上述问题,成功率高,缺点是试验周期长、耗资增大。Cre表达质粒瞬时转染能够删除SMGs,但有超过30%的无SMGs细胞克隆中整合有质粒序列。TAT-CRE蛋白质转导方法可以避免引入的新外源基因,SMGs删除率达到43.9%~72.8%,是一种较佳的SMGs删除手段。     

海藻糖对猪精子冷冻真空干燥保存效果的影响

猪精子经冷冻干燥后,在光学显微镜和电子显微镜下观察其超微结构,并借助辅助生殖技术将其注入猪卵母细胞后,进一步观察受精卵的发育情况。结果表明：海藻糖组雄原核形成率 (68.52％)、卵裂率 (59.17％) 和囊胚率 (19.16％) 优于EDTA组 (64.59％、56.26％和15.62％) 和对照组 (35.36％、52.33％和8.60％) (P＜0.05);海藻糖组的冷冻真空干燥猪精子分别在4℃下保存60、120、180 d,雄原核形成率、卵裂率和囊胚率均无显著差异 (P＞0.05);海藻糖组的冷冻真空干燥猪精子复水化后孵育1 h和2 h,卵裂率、卵裂率和囊胚率均差异显著 (P＜0.05);海藻糖处理组与EDTA处理组中的冷冻真空干燥猪精子分别在4℃和?20℃下保存后各处理组间精子形态差异不显著 (P＞0.05);海藻糖组中B级冷冻真空干燥精子百分数显著多于EDTA处理组 (P＜0.05)。超微结构分析表明,冷冻真空干燥猪精子的损伤主要表现在顶体和颈部的肿胀与缺损、尾部断裂。     

成熟培养液中胎牛血清添加量对山羊卵母细胞体外培养成熟的影响

本研究以屠宰奶山羊的新鲜卵巢为材料,回收可培养卵丘细胞-卵母细胞复合体(COC)。将可培养COC置于M199+FBS+100 IU/mL FSH+100 IU/mL LH培养微滴中,在5%CO2、95%空气、饱和湿度的CO2培养箱中39℃下培养。进行二因子三水平设计,比较基础培养液中添加FBS体积分数为0%、10%和15%时,及培养时间16 h、24 h、26 h的成熟率。结果表明:不添加FBS组的成熟率极显著(P0.01)低于其他两组,而10%FBS组与15%FBS组差异不显著(P0.05);体外培养16 h与培养24 h、26 h的卵母细胞成熟率分别为67.6%与81.7%、81.7%,差异极显著(P0.01),而后二者间未表现差异。     

猪胞浆内单精子注射研究进展

胞浆内单精子注射将体外受精和显微操作技术相结合,已成功应用于哺乳动物受精机理研究,家畜性控胚胎生产,动物转基因等领域。综述了猪胞浆内单精子注射的主要影响因素,包括卵母细胞体外成熟和预处理、精子的选择和处理、注射卵的人工激活以及操作技术的改进,为进一步提高猪胞浆内单精子注射的效率以及该技术的应用提供参考。