橘小实蝇成虫肠道可培养细菌群落结构分析

【目的】研究橘小实蝇(Bactrocera dorsalis) 3个种群(实验室正常喂养种群、实验室无菌糖水喂养种群和野生种群)成虫肠道可培养细菌的群落结构组成。【方法】利用16S rRNA基因的聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)分析技术,结合菌落形态观察和生理生化特征鉴定细菌种类。【结果】从橘小实蝇3个种群成虫肠道600株可培养细菌得到53种不同细菌遗传型,分属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、肠球菌科(Enterococcaceae)和芽孢杆菌科(Bacillaceae)等3个科。其中肠杆菌科是肠道可培养细菌最优势的细菌种类。同样以序列相似性大于97%的菌株归为相同的细菌种类为标准,找到了橘小实蝇3个种群可培养细菌的共有菌种,结合菌落形态观察和生理生化特征鉴定,确定共有菌种为肠杆菌属5株,克雷伯氏菌属2株,柠檬酸杆菌属1株,泛菌属1株,肠球菌属2株,以及芽孢杆菌属4株。【结论】通过研究橘小实蝇成虫肠道可培养细菌群落结构组成,可为探讨肠道菌群对寄主的生理功能和生态学意义奠定基础,最终为利用微生物防治此类害虫提供新思路。     

胚胎干细胞周期调控的研究进展

胚胎干细胞（embryonic stem cells,Escs）具有自我复制和多潜能分化的特性。相对于体细胞,胚胎干细胞的细胞周期调控非常特别。比如,G1期较短;P53、RB等调控细胞周期“检验点”的蛋白分子功能“异常”等。胚胎干细胞细胞周期调控的研究对于研究胚胎干细胞的自我复制和多潜能性,都具有重要指导意义。该文将重点比较体细胞和胚胎干细胞在细胞周期调控方面的差异,并对近年来有关小鼠和人胚胎干细胞的细胞周期调控的研究进展进行介绍。     

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M融合蛋白的重组腺病毒的构建及其对小鼠的免疫原性

利用口蹄疫病毒(FMDV)2A蛋白具有自我裂解的功能,将其作为连接肽将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的GP5和M蛋白编码基因串联,置于复制缺陷型腺病毒载体的表达盒中,通过一次转录和翻译,可以同时实现2个蛋白的表达,以发挥GP5蛋白的病毒中和优势和M蛋白的细胞免疫优势作用。分别利用RT-PCR、间接免疫荧光和Western blotting等方法,对获得的重组腺病毒(rAd-GP5-2A-M)进行检测,结果均证明GP5-2A-M蛋白不仅获得了正确表达,而且能自我裂解为GP5和M蛋白。以单独表达GP5(rAd-GP5)、M(rAd-M)和融合表达GP5-M(rAd-GP5-M)的重组腺病毒为对照,研究该重组腺病毒在小鼠体内诱导免疫应答情况,结果表明,虽然4种重组腺病毒均能诱导小鼠产生特异性抗体和细胞免疫反应,但重组腺病毒rAd-GP5-2A-M所诱导产生的体液免疫和细胞免疫应答水平最高。本研究结果提示,利用具有自动裂解功能的FMDV2A多肽构建PRRSV复合基因工程疫苗是一种切实可行的新策略,也为构建其他动物病毒病的基因工程疫苗提供了新思路。     

脑膜炎奈瑟氏菌外膜蛋白NhhA的克隆表达及免疫学分析

通过克隆脑膜炎奈瑟氏菌NhhA基因GNA0992于原核表达载体pET 20b,在大肠杆菌BL21（DE3）中实现了可溶性表达,表达量约占菌体蛋白总量的20%。经初步纯化后免疫小鼠,对其免疫原性进行了初步分析。结果显示,经3次腹腔免疫,血清IgG滴度达到23186,同时杀菌力实验显示NhhA能诱导针对B群脑膜炎奈瑟氏菌的补体依赖的杀菌反应。证明了NhhA是一种良好的抗原,为疫苗开发的蛋白靶标筛选工作奠定了基础。     

兔出血症病毒在体外诱导细胞凋亡

The apoptosis of RK13 cells induced by RHDV was investigated with DAPI staining,DNA ladder,Caspase 3 activity and flow cytometry,etc.The results showed that nuclear staining of infected cells with DAPI showed gradually morphological changes of the nuclei.As shown in the paper,a canonic oligonucleosome-sized DNA ladder was observed in cells harvested at 24h,48h and 72h post-infection,confirming that DNA fragmentation was induced by RHDV infection.The results of flow cytometry showed that about 63 % of cells ...     

树鼩脑微血管内皮永生化细胞系的建立及最适D-半乳糖浓度诱导BMECs衰老细胞模型的探讨

目的 建立树鼩永生化脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells, BMECs),明确D-半乳糖对BMECs衰老的影响，探索其潜在机制。方法 用携带SV40T基因的慢病毒转染BMECs,传至50代后进行形态观察、生长曲线测定以及免疫荧光和核型鉴定；再用不同浓度D-半乳糖(D-galactose, D-gal)诱导BMECs,通过细胞增殖实验确定最适诱导条件，用衰老相关β半乳糖苷酶染色分析细胞衰老情况，Western Blot检测衰老相关蛋白p53的表达水平，超氧化物歧化酶和脂质氧化检测试剂盒检测细胞内氧化应激水平。结果 永生化的细胞生长状态较好，不同代次的细胞形态一致，单个细胞呈短梭形或多角形，整体呈典型的铺路石状；细胞生长曲线显示细胞数量在第2～5天时处于对数生长期，在第6天时达到高峰，之后缓慢增长进入平台期；免疫荧光显示该细胞特异蛋白vWF和CD31及永生化基因SV40T为阳性；细胞核型结果显示永生化细胞染色体数目与滇西亚种树鼩的染色体数量相符；D-gal诱导BMECs抑制细胞增殖，有时间和浓度依赖性；实验组，即浓度为10 g/L的D...