本生烟eIF4Es基因克隆及其酵母双杂交诱饵载体构建

由木薯褐色条斑病毒(Cassava brown steak virus, CBSV)和乌干达木薯褐色条斑病毒(Uganda Cassava brown steak virus, UCBSV)引起的木薯褐色条斑病毒病,是危害木薯的主要病害之一。目前尚无有效防治方法,并且特别是缺乏CBSV/UCBSV抗性育种材料。真核翻译起始因子4E (eukaryotie translation initiation factor4E, eIF4E)不仅参与蛋白质的翻译起始,并且Potyviruses的复制和翻译也依赖于eIF4E与病毒基因组连接蛋白(virus genome linked protein, VPg)的相互作用,目前发现的植物隐性抗病基因大部分都是eIF4E家族的等位基因。本研究利用生物信息学方法和RT-PCR技术获得本生烟(Nicotiana benthamiana) eIF4E家族的8个基因,聚类分析显示它们分别编码eIF4E、eIF4E的异构体和类似帽结合的蛋白。为筛选与CBSV/UCBSV相互作用的本生烟eIF4E家族蛋白,本研究进一步构建了这8个基因的Lex A-酵母双杂交系统的诱饵载体,并导入酵母细胞EGY48 (p8op-LacZ)进行细胞毒性和自激活检测。结果显示导入重组质粒的EGY48 (p8op-LacZ)酵母细胞在SD/-His/-Ura缺陷型培养基上生长良好,在SD/-Trp/-Ura缺陷型平板上不生长,并且在SD/Gal/Raf/-His/-Ura/X-Gal培养基上不显蓝色,说明重组质粒表达产物不仅对该酵母细胞无毒性,而且对下游报告基因无自激活作用,可用于该系统的互作蛋白筛选研究。本研究为利用酵母双杂交系统发现与CBSV/UCBSV相互作用的本生烟eIF4E基因,探索通过基因编辑与CBSV/UCBSV互作的寄主因子进行抗CBSV/UCBSV分子育种提供科学依据。     

福建地区94例女性阴道念珠菌感染分离株分型研究

目的 对福建地区临床阴道分泌物分离出的（94株）念珠菌菌株进行分类鉴定,并通过分子生物学及API试验分析传统科玛嘉分类方法的准确性.方法 ①通过科玛嘉显色培养基鉴定菌种,并观察菌株显微镜下形态学表现.②通过ITS区段分子生物学序列分析进行菌种鉴定.③将科玛嘉试验与ITS区段序列分析结果与化验室检验报告结果对比,将鉴定差别菌株进一步行API试验及LSU区段序列分析.结果 ①94株念珠菌经鉴定结果为白念珠菌78株、光滑念珠菌10株、近平滑念珠菌3株、热带念珠菌1株、酿酒假丝酵母菌1株及其中1株为光滑念珠菌及近平滑念珠菌混合感染.②科玛嘉试验可良好的鉴定念珠菌,但对于少见菌种（如酿酒假丝酵母菌）仍缺乏特异性.③一般化验室通过简单菌落形态学及简易科玛嘉检测鉴定仍存在一定误差率（10/94）.④分子生物学方法鉴定菌种准确性高,且可从基因序列分析中鉴定包含C.parapsilosis sensu strico,Candida metapsilosis以及Candida orthopsilosis的近平滑念珠菌复合体菌种.结论 福建地区女性外阴感染的菌种仍以白念珠菌为主,但非白念珠菌的感染也占据相当的比例（16/94）,而在检测方法上,分子生物学技术较科玛嘉试验更能准确的鉴定念珠菌菌种.     

须癣毛癣菌分类进展

须癣毛癣菌以往被视为单一的菌种,然而随着形态学和分子生物学等试验的研究,逐步探索并明确须癣毛癣菌的菌间分类及有性型的关系.本文综述了须癣毛癣菌在亲宿主性、交配试验、形态学和生理学试验、及分子生物学试验所进行的研究.     

基于DNA条形码技术的楠属和润楠属5种木材的识别

楠属与润楠属的许多树种的木材都属于珍贵木材,这些木材的解剖构造特征非常相似,仅仅依据传统的识别方法难以将这些木材准确识别出来。通过采用分子生物学中的DNA条形码技术对5种来自于楠属和润楠属的木材进行分子鉴定,试图从分子水平识别5种木材。以楠属的闽楠(Phoebe bournei)、桢楠(Phoebe zhennan)、紫楠(Phoebe sheareri)和润楠属的建润楠(Machilus oreophila)、刨花润楠(Machilus pauhoi)为研究对象,采用Qiagen试剂盒法提取木材总DNA,并分别对5个树种的ycf3、psb C-trn S、rpo C1和ITS这4段DNA序列进行PCR扩增,并对PCR产物进行测序和序列的比对分析。测序分析所得5个树种的ycf3序列中,共有6个多态性位点,根据其差异可将桢楠、建润楠、刨花润楠从中区分出来,但是闽楠和紫楠之间不能区分。psb C-trn S序列的比对结果显示共有7个多态性位点,可以将紫楠、建润楠和刨花润楠区分出来,但其余两个树种难以区分。5个树种的ITS序列仅有1个多态性位点,可以对两个属间进行区分,不能进行种间的区分。5个树种的rpo C1序列完全一致,不能用于区分这几个树种。综合来看,将ycf3和psb C-trn S这两段DNA条形码结合起来对比分析,可以将5种木材在分子水平区分开来。从5个树种的ycf3序列构建的系统发育树来看,几个树种基本可以正确聚类,作为区分几个树种的参考。     

采前6-苄基腺嘌呤处理对葡萄品质和贮藏生理特性的影响

以‘红地球’葡萄和‘克瑞森无核’葡萄为试材,研究了采前6-苄基腺嘌呤（6-BA）处理对果实采收时的品质及采后贮藏特性的影响。结果表明,采前20mg·L-1 6-BA处理可以显著提高两种葡萄果实单粒重和单穗重,有效控制贮藏过程中果实腐烂与落粒,显著抑制葡萄的呼吸速率,维持果实硬度,延缓可滴定酸的下降,提高贮藏期间可溶性固形物的含量,抑制果实细胞膜透性的增加,保持细胞膜的完整性,提高葡萄的贮藏品质。     

赣州市结核病防治规划实施情况分析

目的详细了解赣州市结核病防治规划实施情况,为今后结核病防治工作提供依据。方法由赣州市疾病预防控制中心执行卫生部统一制定下发的《全国结核病防治规划(2001-2010年)终期评估方案》和《终期评估调查表》,进行单位自查与市级组织检查验收。通过验收的《终期评估调查表》全部录入计算机,进行资料分析。结果《规划》期间全市投入用于结核病防治的各种费用总计4 517.04万元。登记活动性肺结核63 427例,其中涂阳患者33 339例(初阳27 621例、复阳5 718例),涂阴27 408例,完成初治涂阳任务指标平均达到99.64%,治愈率平均达到91.11%。结论经实施《全国结核病防治规划(2001-2010年)》,赣州市结核病的防控措施无论是软件还是硬件都得以完善,并且病人及时得到发现与有效治疗。     

以随机系数模型衡量内视镜胆囊切除手术成本管理绩效

使用随机系数模型估计医疗组织成员的学习率,衡量组织学习的绩效,并且实证性地采用中国台湾地区全民健康保险数据库,比较台湾医学中心医院对内视镜胆囊切除手术成本控制的学习绩效。通过研究的理论性与实证性,组织管理者可以从微观的角度了解到组织内部的学习能力与不同团体和组织之间的学习率差异。     

须癣毛癣菌的形态学及分子生物学鉴定

目的对临床上分离自人(36株)及狐狸(5株)的须癣毛癣菌菌株进行新的分类系统鉴定,并检测传统的分类方法是否能满足临床鉴定需要。方法①观察原鉴定为须癣毛癣菌菌株在沙氏培养基、1%蛋白胨培养基、溴甲酚紫乳固体葡萄糖琼脂培养基(BCP-MSG)和显微镜下形态学及尿素酶、毛发穿孔等生理学试验表现。②通过ITS区段和LSU区段分子生物学序列分析进行新的分类系统的菌种分型,并对传统形态学和生理学鉴定方法进行检测。结果①41株须癣毛癣菌形态学及生理学试验符合须癣毛癣菌(38株)和红色毛癣菌(3株)菌落的特点。②ITS区段序列分析发现ITS区段能将须癣毛癣菌和红色毛癣菌准确的鉴定到种,但无法明确其种内分型;而LSU区段序列分析可对36株(36/38)须癣毛癣菌有性型做出明确的鉴定。结论传统实验室鉴定方法仍具有其有效性及可靠性。通过分子生物学鉴定,临床分离的须癣毛癣菌皆为指(趾)间毛癣菌(38/38),而LSU区段的序列分析鉴定狐狸源性菌株皆属于本海姆节皮菌,有别于大多数人源性菌株有性型为万博节皮菌,对于须癣毛癣菌的菌种鉴定更优于ITS区段,但分子生物学试验还需结合形态学的观察,才能够对菌种做出正确的鉴定。     

基于转录组分析的金针菇冷诱导原基形成的调控网络

金针菇是低温结实型菌类,原基形成需要低温诱导,子实体发育也需要较低的温度,因此在工厂化生产过程中能源消耗大,生产成本高。本研究利用转录组测序对金针菇菌丝体和原基进行RNA-Seq分析,筛选得到7 935个差异表达基因,在原基形成后,有4 025个基因上调表达以及3 910个基因下调表达。通过GO注释和KEGG通路注释等生物信息学手段对代谢途径进行分析,可推测冷诱导形成原基的代谢调控为：当金针菇菌丝细胞接受到冷信号后,糖分转运相关的基因表达量下降,导致碳源摄取效率下降,因而糖酵解途径大部分相关基因表达量下调,进而导致三羧酸循环的底物乙酰辅酶A（乙酰CoA）合成量减少,整个细胞能量产出下降。此负反馈信号使细胞内储存的脂质进行氧化代谢的基因表达上调,产出乙酰CoA以供三羧酸循环产能。此负反馈导致不饱和脂肪酸的合成基因表达上调,以调节细胞流动性;同时磷脂和鞘脂代谢通路的相关基因表达大多上调,合成增多,细胞膜的组分因此改变,因此细胞进行重构进入另一种状态。与DNA复制、RNA转录和蛋白质合成的相关基因表达均大部分上调,表明了原基形成时细胞正处于增殖旺盛时期。本研究结果从分子水平上揭示了金针菇原基的形成伴随着能量来源的转变,各个代谢途径的相互调控以及相关基因的表达影响,为有目的培育高温型金针菇新品种,减少栽培能耗提供理论依据。