制备小鼠染色体新法——利用腹腔引流细胞制备染色体

利用外周血淋巴细胞体外培养法制备染色体,已被广泛应用于各类动物。在小鼠也有成功的报道,但在实际应用中还极不稳定,用同样的材料和条件,分裂相也会     

大肠杆菌galK基因与gPt基因在爪蟾卵母细胞中的表达

把含有E．Coil gal K基因和gpt基因的几种重组质粒显微注射到爪蟾(Xencpus Laevis)卵母细胞的核中,用淀粉凝胶电泳检测到了细菌基因的表达产物。E．Coli gal K基因和gpt基因在爪瞻卵母细胞中的表达依赖于SV40病毒早期启动子的存在,而小鼠β-珠蛋白启动子在爪蟾卵母细胞中缺乏活性。此外,增强子在爪蟾卵母细胞中对细菌基因的活性有较为明显的增强作用。     

家兔早期胚胎细胞发育能力的研究

本文利用胚泡注射法制作嵌合体对家兔交配后96,120和144小时的ICM细胞的发育能力进行了研究。供体胚胎取自青紫兰灰免,受体胚胎取自新西兰白兔,结果表明96和120小时供胚的ICM细胞与96小时受胚胚泡组合后均能参与发育,形成嵌合兔,144小时者未获得嵌合体。由于120小时的ICM细胞发育的2只表型为雄性的嵌合兔,其中1只不育,其性腺和外周血核型表明不育兔为xx/xy性嵌合,性腺中有处于不同发育程度的卵巢和精细管,外周血含xx和xy两种核型。本实验结果首次证明家兔交配后120小时胚泡的ICM细胞仍具有参与嵌合体发育的能力。它不仅能参与体细胞的分化,并具有形成生殖细胞的能力。交配后144小时胚泡的ICM细胞其发育能力似乎已发生了局限。     

Escherichia coli gal K和gpt基因注入小鼠受精卵的研究

含有E.coli galK和gpt基因的重组DNA pPB22用显微注射法导入昆明白小鼠受精卵,经发育,最后得到21只成年小鼠。其中1只小鼠的肝脏显示出E.coli gpt酶活性,但未检测出E.coli galK酶活性。印迹分子杂交表明,外源的pPB 22重组DNA已整合到2只小鼠的染色体上,其中包括那只肝脏中显示E.coli gpt酶活性的小鼠。     

家兔早期胚胎细胞发育能力的研究

The developmental potential of rabbit embryonic cells was studied through making chimera by separate introduction of inner cell mass from 96-h-old p. c., 120-h-old p. c., and 144-h-old p. c. of grey rabbits into 96-h-old p. c. blastocysts of New Zealand white rabbits. A total of five overt chimeras were obtained including two fertile males, two fertile females and one sterile male, from the ICM cells of 96-h-old and 120-h-old embryos but none was obtained from 144-h-old cells. Histological examination of the gonad showed that the sterile chimera derived from 120-h-old ICM cells with an ovotestis on both sides. Follicles and seminiferous tubules developed in the cortex and medulla of the gonad, respectively. Neither of them developed into functional germ cells. Analysis of karyotypes of peripheral blood showed that both XX and XY coexisted in lymphocytes. These results indicated that the sterile male chimera was a XX/XY sex chimera derived from ICM cells of donor and recipients with different sex, so as to the chimera with XX and XY genotypic cells. From the results mentioned above we may conclude that the ICM cells at 120-h-old p. c. are still pluripotential, they can not only participate in development into somatic components but also develop into germ cells. The potential of 144-h-old p. c. ICM cells seems to be rather restricted.     

由不同发育时期内细胞团构建的嵌合兔

哺乳动物嵌合体越来越受到人们的注意,因为它既可用以研究发育、遗传、免疫以及肿瘤发生中一些有意义的理论问题,而且还是使体外培养的胚胎干细胞发育成个体的唯一途径。已往大量的工作都是集中在小鼠上,有关家畜嵌合体的报道为数很少。 本文简要地报道利用胚泡注射技术制作嵌合兔,对交配后96小时和120小时的内细胞团(ICM)细胞的发育能力进行了研究。本实验以青紫蓝(毛色为灰色,眼睛为灰褐色)兔(QQ)胚泡为供体,以新西兰(毛色为白色,眼睛呈红色)兔(XX)胚泡为受体,以毛色和眼睛色素细胞作为鉴定嵌合体的指     

制作小鼠嵌合体的简易方法

自从Tarkowski(1961,1963),Mintz(1964),用胚胎聚合的方法得到了小鼠嵌合体之后,这一工作在国外受到了普遍的重视。但因哺乳动物的卵子小而脆弱,要使它在体外经受各种实验性处理后,又回到母体内继续正常发育,在实验条件上,要求十分严格,在技术上要求十分精细。Mintz(1971),介绍他们用37℃使胚胎达到聚合,用5％CO_2调节培养液的pH值。所以实验是在恒温罩内进行,或在解剖镜     

哺乳动物嵌合体

嵌合体 Chimera 一词源自希腊文,古希腊神话中用它代表羊头、狮身、蛇尾这样一些由不同种类的动物所拼凑成的怪物。这意味着人们改造自然的愿望。本世纪60年代中期,在高等哺乳动物上得到了由两个或两个以上不同遗传组成的胚胎发育成的个体,这种个体的组织器官是由基因型不同的细胞群所组成,故称之为嵌合体。有人用非自主表型(Allophe-     

萤火虫荧光素酶基因在爪蟾卵母细胞中的表达

用限制酶BamHⅠ切割质粒pDO432并经琼脂糖凝胶电泳分离,将所得荧光素酶编码序列作为插入片段。用HindⅢ和BamHⅠ切割pSVKl00去除galk基因及部分tsplice。序列作为载体,构建了一对其启动区和荧光素酶编码序列位向相反的质粒,pSV—Lucl9及pSV。Luc20。正位向的pSV—Luc20能在爪蟾卵母细胞中转录,翻译并产生活性酶蛋白。结果表明：荧光素酶基因和爪蟾卵母细胞可以构成一个监测启动子活性的有效系统。     

小鼠胚胎原始外胚层细胞的发育能力(英文)

本文利用胚泡注射技术研究了小鼠胚胎原始外胚层细胞(primitive ectoderm cells)的发育能力。从交配后第五天的129/SV-ter(灰色,GPI-1~a/~a)小鼠的胚胎中分离出原始外胚层细胞并将之注射到交配后第四天的C_(57)BL/6 J(黑色,GPI-1~b/~b)小鼠的胚泡腔内。经过显微操作后的胚泡被移回昆明白假孕鼠内发育,其出生率为83.3%,毛色嵌合体(chimeras)比例为100%。这些嵌合小鼠的磷酸葡萄糖异构酶(GPI-1)分析结果表明,注射的原始外胚层细胞参与了内、中、外三个胚层所衍生的组织和器官(如脑、血液、心脏、肾脏、生殖腺、肌肉、脾、旰等)的胚胎发生。嵌合体与C_(57)BL/6 J小鼠交配后所得的结果表明,原始外胚层细胞在嵌合体内能形成有功能的配子。上述结果说明,原始外胚层细胞与内细胞团(ICM)细胞、体外培养的胚胎干细胞(embryoderivedstem cells)一样,具有发育全能性。导入胚泡后,不仅能参与嵌合体中各种体细胞的分化,并且能经历配子发生产生有功能的雌雄配子。此外,本文还对胚泡注射技术进行了改进,改进后的方法不仅比已报道的各种方法简便,并且使注射嵌合体的比例提高到35.7%。