琉璃苣BoD6D载体的构建及转化

运用植物基因工程手段构建琉璃苣BoD6D转化载体,为提高油料作物油份中γ-亚麻酸含量奠定基础。以琉璃苣基因组DNA为模板克隆BoD6D,构建酵母表达载体并转化酿酒酵母,对酵母进行诱导表达,提取脂肪酸后进行甲酯化反应,利用气相色谱分析脂肪酸含量;同时构建植物双元表达载体,经农杆菌介导通过蘸花法转化拟南芥,最后对转基因拟南芥通过抗性筛选及PCR进行鉴定。结果表明,BoD6D编码区不含有内含子,可以直接用于后续的功能研究;成功构建了酿酒酵母表达载体pYES2-BoD6D,气相色谱检测结果表明BoD6D在酵母中能够成功的将亚油酸催化生成γ-亚麻酸;成功构建了植物双元表达载体pBI121-BoD6D,卡那霉素抗性筛选和PCR鉴定结果表明已经成功获得BoD6D的拟南芥转化植株。通过以琉璃苣基因组DNA为模板比较方便的获得有功能的BoD6D用于转基因植物研究。     

基因组改组及其在木质纤维素水解液乙醇发酵菌种选育中的应用展望

能高效代谢木质纤维素水解液中的可发酵糖、同时可耐受/分解发酵抑制剂的菌种, 是利用木质纤维素为原料生产燃料乙醇技术的关键。基因组改组技术是近些年发展起来的一项新型育种技术, 该技术已运用于食品和医药行业菌种的改良。本文综述了基因组改组技术的原理、方法、特点、及其运用, 并对其在木质纤维素水解液乙醇发酵菌种选育方面的应用进行了展望。     

骨科感染葡萄球菌属细菌临床分布与耐药性分析

目的分析骨科感染葡萄球菌属细菌的分布及耐药性,为临床治疗合理选用抗菌药物提供依据。方法对贵阳医学院第三附属医院2012年1月至2014年7月从骨科感染标本中分离出的葡萄球菌属细菌进行比较分析,微生物病原菌鉴定按照《全国临床检验操作规程》进行,药敏试验采用K-B纸片法,结果判断按美国临床和实验室标准化协会(CLSI)的标准,应用SPSS 19.0软件对结果进行统计分析。结果分离出葡萄球菌属细菌178株,其中皮表葡萄球菌93株,占52.25%,金黄色葡萄球菌81株,占45.51%;两种细菌对阿莫西林/克拉维酸、红霉素、头孢克洛、罗红霉素、氧氟沙星等耐药率分别为19.51%、0%,74.70%、39.44%,45.71%、8.33%,75.76%、44.44%,45.83%、10.00%。骨科感染表皮葡萄球菌耐药率明显高于金黄色葡萄球菌感染(P<0.05)。结论骨科皮表葡萄球菌的感染率与耐药率不断上升,耐药率明显高于金黄色葡萄球菌,应当引起骨科临床重视。     

骨科创伤患者感染病原学分布与耐药性分析

目的分析骨科创伤患者感染病原菌的分布及药物敏感性,为临床治疗骨科创伤感染患者合理用药及减少耐药菌产生提供参考依据。方法对2011年6月至2014年8月骨科创伤感染患者临床标本中检出的病原菌监测资料作回顾性分析,采用纸片扩散法检测药物敏感性。结果 590株骨科创伤患者感染病原菌中,以伤口及创面感染分离率较高,各检出299株、122株,分别占50.68%、20.68%;其中革兰阳性菌244株,占41.36%,革兰阴性菌327株,占55.42%,真菌19株,占3.22%;主要革兰阳性菌对万古霉素、替考拉宁、米诺环素、利奈唑胺,主要革兰阴性菌对阿米卡星、美罗培南、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、亚胺培南敏感度较高外,对大多数常用的抗菌药物的耐药率均较高。结论骨科创伤患者感染以伤口和创面感染多见,感染病原菌以革兰阴性菌为主,主要革兰阳性及阴性菌耐药率均较高,应引起临床医师高度重视,加强医院感染防控,合理使用抗菌药物,提高患者免疫力,减少骨科创伤患者的感染与耐药产生。     

大豆GeBP转录因子基因家族的生物信息学分析

GeBP转录因子调控植物表皮毛的生长发育,并且参与控制植物叶片的发育。该文利用生物信息学方法,在大豆全基因组范围内搜索GeBP基因家族,并从氨基酸理化性质、基因结构、染色体的物理分布、系统进化、序列比对、功能结构域、组织表达情况等基本特征方面对GmGeBP基因家族进行分析。结果表明:(1)共获得9个GmGeBP转录因子基因家族成员,其中仅2个基因含有内含子,且都只有1个内含子,表明该家族成员基因构造比较简单但稳定。(2)GmGeBP编码的蛋白分子量为39.65~49.24 kD,理论等电点为4.65~9.08;这些成员基本上都是酸性氨基酸,属于亲水性、不稳定蛋白。(3)这9个基因不均匀的分布于7条染色体上,10和20号染色体上分别分布2个GeBP基因,3、5、13、15、19号染色体上各分布1个基因。(4)系统进化分析表明,大豆与拟南芥对应的GeBP成员亲缘关系较近,分别聚类到4个分支,而与水稻的距离较远。(5)结构域分析表明,9个GmGeBP成员都包含DUF573结构域,推测该部分在GeBP转录因子中很可能是与靶标基因顺式作用元件互作的结构域。(6)通过分析大豆GmGeBP转录因子基因家族的组织表达,发现不同基因在大豆不同组织的表达量不同,具有一定的特异性。该文对大豆GeBP转录因子基因家族的分析和鉴定为进一步研究大豆表皮毛发育的分子作用提供了理论基础。     

生物膜形成机理及影响因素探究

生物膜是一种依附于载体材料的特殊微生物聚集体,其大量存在于自然环境中,并在水质净化、废水处理等领域广泛应用.本文介绍了生物膜形成基本原理,综述了有关载体界面性质、胞外多聚物(EPS)关键组分对生物膜形成及其稳定性的影响,并对各学科交叉研究生物膜提供技术思路.     

带血管髂骨移植动物模型的建立与评估

目的:探索一种相对简单稳定的大鼠髂骨皮瓣移植手术方式,为髂骨移植诱导免疫嵌合状态的研究建立可靠的动物模型。方法:实验分为3组:空白对照组,不做任何处理;旧术式组,将供者髂骨肌皮瓣移植入受者腹股沟区,吻合供者髂腰动静脉和受者股动静脉;实验组,剥离供者髂骨臀大肌,取供者的髂骨连带肌肉及皮瓣移植于受者的腹股沟区域,将供者的髂总动脉和髂腰静脉分别与受者的股动静脉吻合,随后缝合皮肤。术后所有大鼠给予环孢素A 28天,始剂量16 mg/kg/d,第三周始每周剂量减半,第28天处死大鼠并选取髂骨做病理学检测,观测骨髓细胞量,骨陷窝是否有骨细胞等,以此判断髂骨是否成活。结果:实验组共进行手术15例,皮瓣成活11例,成功率73%;病理检测皮下髂骨成活7例,成功率47%;旧术式组共进行手术8例,皮瓣成活4例,成功率50%,病理检测皮下髂骨成活3例,成功率37.5%,其中实验组动脉吻合时间(24.7±2.3)min,明显短于旧术式组(36.7±1.5)min(均P0.05),而静脉吻合时间、缺血时间,供受体准备时间并无差异(均P0.05)。结论:通过剥离供者臀大肌,改变动脉吻合对象,可以建立相对简单、稳定的髂骨皮瓣移植模型,为探索带血管骨髓移植诱导嵌合状态提供了新的动物模型。     

骨科患者医院感染与社区感染金黄色葡萄球菌的耐药性分析

目的比较医院骨科感染与社区感染金黄色葡萄球菌的耐药性,了解骨科患者感染金黄色葡萄球菌的药敏变化,分析其耐药性差异及原因,为临床合理选用抗菌药物提供参考。方法对贵州医科大学第三附属医院骨科2010年1月至2015年12月各类临床标本中分离出的金黄色葡萄球菌139株进行分析,样本区分医院感染和社区感染,对二者进行比较分析。病原菌鉴定采用VITEK-32微生物分析系统,药敏试验采用K-B纸片法,统计分析使用SPSS 19.0软件。结果骨科患者医院感染金黄色葡萄球菌检出率为19.76%,社区感染检出率为10.76%,医院感染患者检出率高于社区感染患者(χ2=8.10,P=0.004)。两种患者所检出的金黄色葡萄球菌对万古霉素(0.77%)、阿米卡星(1.96%)、利福平(4.19%)、替考拉宁(2.16%)、米诺环素(0.00%)和利奈唑胺(0.00%)等11种抗菌药物耐药率较低,可作为治疗的首选药。医院感染与社区感染的金黄色葡萄球菌对苯唑西林、头孢唑林、阿莫西林/克拉维酸、克林霉素、红霉素、阿奇霉素、庆大霉素、氧氟沙星、呋喃妥因、复方新诺明、罗红霉素、吗啉噁酮、奎奴普汀/达福普汀等17种抗菌药物的耐药率分别为70.97%、20.22%,50.00%、15.79%,50.00%、9.62%,53.13%、23.66%,82.76%、43.01%,83.33%、38.30%,22.22%、3.95%,19.05%、6.78%,21.74%、7.81%,41.38%、17.50%,66.67%、30.77%,14.29%、0.00%,14.29%、0.00%,医院感染金黄色葡萄球菌的耐药性高于社区感染的,差异具有统计学意义(P0.05)。结论骨科医院感染患者金黄色葡萄球菌感染率和耐药率均高于社区感染患者,制订治疗方案时应区别医院感染与社区感染,合理使用抗菌药物,从而减少抗菌药物的滥用和细菌耐药性的产生。     

近红外荧光染料IR-783在膀胱癌中的成像研究

目的:观察研究近红外荧光染料IR-783在膀胱癌中的特异性成像。方法:通过染料与膀胱癌细胞及正常细胞共孵育,观察近红外荧光染料IR-783是否能够实现膀胱癌细胞的选择性成像。利用细胞器示踪剂观察近红外荧光染料在膀胱癌细胞内的共定位;使用IR-783检测循环血液中及尿液中的膀胱癌细胞。结果:近红外荧光染料IR-783可被膀胱癌细胞选择性摄取。IR-783可选择性聚集在膜性细胞器如线粒体和溶酶体内,这种选择性聚集作用使IR-783可以保持较长的染色效果。近红外染料可以检测到血液或尿液极少量的膀胱癌细胞。结论:近红外荧光染料IR-783能够被膀胱癌细胞特异性吸收,可用于血液和尿液中膀胱肿瘤细胞的特异性诊断,具有重要的临床应用前景。     

羟苯磺酸钙通过抑制Ⅰ型胶原表达减轻肾间质纤维化

目的:研究羟苯磺酸钙对小鼠肾间质纤维化、Ⅰ型胶原表达的影响。方法:将C57小鼠随机分为假手术组(Sham组,n=4)、肾间质纤维化模型组(UUO组,n=5)及羟苯磺酸钙治疗组(CDT组,n=4);采用单侧输尿管梗阻制备肾间质纤维化模型,CDT组给予羟苯磺酸钙灌胃、Sham组和UUO组给予双蒸水灌胃;采用HE染色、Masson染色、免疫组化、实时定量PCR以及蛋白免疫印迹观察单侧输尿管梗阻术后14 d小鼠术侧肾脏的肾间质纤维化程度和Ⅰ型胶原表达情况。结果:与Sham组比较,UUO组小鼠术后14 d术侧肾脏肾发生显著肾间质纤维化,Ⅰ型胶原表达显著增强(Ⅰ型胶原基因相对表达量:Sham组:1.00000,UUO组:114.92289,P0.0001)。与UUO组比较,CDT组小鼠术后14 d术侧肾间质纤维化程度显著减轻,Ⅰ型胶原表达显著减弱(Ⅰ型胶原基因相对表达量:UUO组:114.92289,CDT组:45.33516,P0.005)。结论:羟苯磺酸钙通过抑制小鼠肾间质Ⅰ型胶原表达从而减轻单侧输尿管结扎小鼠肾间质纤维化。