干预气道杯状细胞CLCA对ARDS小鼠损伤程度及炎症机制的影响

目的:探讨干预气道杯状细胞CLCA的表达与功能,对ARDS小鼠肺脏损伤程度的影响,并通过体外细胞研究探讨其机制。方法:制备LPS诱导的ARDS小鼠模型(ARDS组),并在此模型上分别进行干预,包括气道雾化吸入CLCA非特异性阻断剂尼氟灭酸(NFA)(NFA+ARDS组)、气道滴注CLCA特异性抗体(ab-CLCA3)(ab-CLCA3+ARDS组)。HE染色观察各组小鼠肺部病理及炎症特征,计算肺损伤评分。运用hCLCA1-siRNA抑制人正常支气管上皮细胞系16HBE中h CLCA1的表达,采用real-time RT-PCR法验证抑制效果后,检测各组细胞合成多种炎症因子m RNA水平的差异。结果:HE染色显示,ARDS组与NFA+ARDS组相比,肺部病理改变及炎症细胞浸润程度无明显差异,肺损伤评分也没有统计学差异(正常组:2.0±0.71;ARDS组:6.8±0.45,NFA+ARDS组7.4±0.89,P0.05)。与ARDS组相比,ab-CLCA3+ARDS组肺部病理损伤及炎症细胞浸润程度明显加重,肺损伤评分也升高(正常组:1.8±0.83;ARDS组:7.6±0.55,ab-mCLCA3+ARDS组9.8±0.83,P0.05)。real-time RT-PCR检测证实成功构建hCLCA1低表达的16HBE细胞系,同时real-time RT-PCR结果显示TNF-α和IL-1β的m RNA表达水平升高(P0.05)。结论:阻断气道CLCA功能区域,可以加重ARDS小鼠肺部病理损伤程度及炎症细胞浸润水平,提示气道杯状细胞CLCA在ARDS小鼠肺部炎症形成过程中发挥抑制性调节作用。     

高脂饮食诱导肠道微生物代谢产物短链脂肪酸改变进而影响食物过敏的发生

通过回顾过敏性疾病以及高脂饮食、肥胖等的大量研究报告,探究高脂饮食以及高脂饮食带来的肥胖是否会对食物过敏的发生产生影响以及可能的机制。研究发现,高脂饮食可能会增加食物过敏发生率,降低食物过敏阈值,增加食物过敏的风险,并且高脂饮食对肠道微生物的影响是其中的一个原因。高脂饮食改变肠道微生物结构,导致短链脂肪酸产生差异,而短链脂肪酸通过G蛋白偶联受体、组蛋白乙酰化等途径引起Treg细胞分化、IgA产生以及致耐受性的DC细胞产生,影响肠道屏障的健康,因此,高脂饮食对肠道微生物结构的改变带来的短链脂肪酸的产生差异影响了肠道屏障的健康,进而导致食物过敏的阈值降低,易感性增加。     

评价空肠弯曲菌外膜蛋白PEB1 介导的重组BCG 与上皮细胞 的结合能力

目的:评价PEB1介导的屋尘螨抗原(Derp2)重组BCG疫苗(PEB1-Derp2-rBCG)与人上皮细胞的结合能力。方法:采用体外细胞培养的方法,分别将普通BCG、胞壁型Derp2-rBCG和胞壁型融合蛋白PEB1-Derp2-rBCG与HeLa细胞及人类肠粘膜上皮细胞(HIEC)进行共孵育,利用HE和抗酸染色法对各组细胞与疫苗的黏附结果进行染色,光学显微镜下计数各组的黏附率,并进行比较;对以上各组分别加入PEB1蛋白,进行黏附阻断,观察对结合能力的影响。结果:孵育24小时后,无论HeLa细胞还是HIECPEB1-Derp2-rBCG组较普通BCG组和Derp2-rBCG组的黏附率明显提高,差异有显著性(P<0.05);PEB1蛋白的加入对PEB1-Derp2-rBCG的黏附功能有明显抑制作用(P<0.05);但是,Derp2-rBCG组与普通BCG组比较没有明显差异(P>0.05),PEB1蛋白的加入对二者的黏附亦无影响(P>0.05)。结论:PEB1具有介导增强PEB1-Derp2-rBCG与上皮细胞黏附的能力。     

评价空肠弯曲菌外膜蛋白PEB1介导的重组BCG与上皮细胞的结合能力

目的：评价PEBl介导的屋尘螨抗原（Derp2）重纽BCG疫苗（PEBI-Derp2．rBCG）与人上皮细胞的结合能力。方法：采用体外细胞培养的方法,分别将普通BCG、胞壁型Derp2-rBCG和胞壁型融合蛋白PEBl-Derp2-rBCG与HeLa细胞及人类肠粘膜上皮细胞（HIEC）进行共孵育,利用HE和抗酸染色法对各组细胞与疫苗的黏附结果进行染色,光学显微镜下计数各组的黏附率,并进行比较;对以上各组分别加入PEBl蛋白,进行黏附阻断,观察对结合能力的影响。结果：孵育24小时后,无论HeLa细胞还是H匝CPEBl-Derp2．rBCG组较普通BCG组和Derp2-rBCG组的黏附率明显提高,差异有显著性（P〈0．05）;PEBl蛋白的加入对PEBl．Derp2-rBCG的黏附功能有明显抑制作用（P〈O．05）;但是,Derp2-rBCG组与普通BCG组比较没有明显差异（P〉o．05）,PEBl蛋白的加入对二者的黏附亦无影响（P〉0．05）。结论：PEBl具有介导增强PEBl-Derp2-rBCG与上皮细胞黏附的能力。     

沙门菌外膜蛋白D的原核表达及多克隆抗体制备

目的:在大肠杆菌中表达沙门菌外膜蛋白(OMP)D,纯化后制备兔抗OMPD抗体。方法:用PCR方法从鼠伤寒沙门菌中扩增出ompD基因,并插入融合表达载体pET-28a(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET28a(+)-ompD;以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性重组菌株,经IPTG诱导目的蛋白表达,在变性条件下对目的蛋白进行亲和层析纯化;以表达的OMPD蛋白免疫家兔,制备抗OMPD的多克隆抗体并进行鉴定。结果:扩增了ompD基因,测序证实正确后亚克隆于表达载体pET-28a(+)中,经PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,经诱导在大肠杆菌中表达出相对分子质量为40×103的目的蛋白并进行纯化;纯化的OMPD免疫家兔后,能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价达到1∶10000以上,且具有良好的特异性。结论:构建ompD基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达;制备出兔抗OMPD抗体,效价及特异性均良好,为进一步制备肠黏膜高亲和力疫苗奠定了基础。