A亚群禽白血病病毒囊膜基因gp85片段在大肠杆菌中的表达

将RAV－1囊膜基因gp85片段来克隆到表达质粒pET-21d( )中得到重组表达质粒pET-21d-RAV-1env(BelⅡ/SalⅠ）序列分析表明该插入片段的核苷酸序列和阅读框都与RAV－1囊膜基因相应序列相同。用其转化大肠杆菌BL21（DE）3并经IPTG诱导,SDS－PAGE分析表明RAV－1囊膜基因融合蛋白表达产物约20kD,与理论值相符;IPTG诱导起始时间比诱持续时间对表达量的影响更大。     

鸡传染性支气管炎病毒H株纤突蛋白基因的RT-PCR/RFLP分型

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)属于冠状病毒科冠状病毒属,可引起鸡呼吸道、输卵管、肾脏、肠道及腺胃等多部位病变.近年来,由于新的IBV变异毒株不断出现,从而导致鸡传染性支气管炎病的不断爆发,造成严重的经济损失[1].IBV的基因组为单股RNA,约27.6kb,该基因主要编码3种主要结构蛋白:纤突蛋白(S)、膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N),其中S蛋白成熟裂解为S1和S2两个蛋白亚基.S1蛋白是IBV的主要免疫原基因,可刺激机体产生中和抗体,决定病毒的组织亲嗜性,在病毒血清学分类中起主要作用[1,2].H株是1993年在河南省分离的典型肾病变IBV毒株,我们对IBV的H株S1基因进行了RT-PCR及酶切分析,并将其PCR产物克隆入质粒载体,为进一步研究IBV的H株分子生物学特性和研制IBV基因工程疫苗打下基础.     

禽呼肠孤病毒变异株的分离鉴定

从病鸡肝分离到一株病毒,经电镜检查、理化特性分析、核酸电泳和中和试验等证明它为禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）。该病毒只在鸡胚肝细胞（ＣＥＬｉ）上产生细胞病变（ＣＰＥ）,在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和Ｖ＿（ｅｒｏ）细胞上不增殖,它对热无敏感,Ｍｇ￣（２＋）不能增强其对热的稳定性,其基因组中的４个小节段的迁移率与ＡＲＶＦＤＯ和Ｓ＿（１１３３）株明显不同,表明它是不同于ＦＤＯ和Ｓ＿（１１３３）的ＡＲＶ变异株。     

直接用酚和氯仿快速提取质粒

质粒的提取是分子克隆技术中最关键的步骤之一,在对大量样品的抽提和筛选时工作量很大。提取质粒的方法很多,有碱裂解法、煮沸法等「１」,所用试剂较多,耗时较长,这些方法均要用酚和氯仿抽提以去除菌体蛋白,以免影响酶切分析。Ｂｉｊｉ,Ｔ,Ｋｕｒｉｅｎ等（１９９４）提出用乙醇溶菌法快速提取质粒,作者试验多次结果均不理想,经过改进直接用酚和氯仿溶解菌体来快速提取持粒,得到了满意的结果。用该法提取质粒ＤＮＡ,产量     

鸡传染性支气管炎病毒H株纤突蛋白S1基因的克隆及其在毕赤酵母中表达

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)河南分离株H,经SPF鸡胚增殖,差速离心纯化病毒,SDS-蛋白酶K法抽提病毒RNA。参照IBV Bcaudette株纤突蛋白S1基因序列设计并合成引物,以其进行RT—PCR,成功地扩增出IBV H株S1基因。扩增产物经Bst YⅠ Hae Ⅲ和Pst Ⅰ酶切分析,结果表明,IBV H株S1基因的RFLP图谱与M41株S1基因的完全一致,初步断定IBV H株为Mass血清型。将IBVH株S1基因克隆于pGEM—T载体中进行序列分析,结果表明该基因全长为1611bp(从ATG到S前体蛋白裂解位点),与标准株M41和Beaudette的S1基因序列相比较,同源率分别达到97．39％和97、27％。将IBV H株S1基因亚克隆到pPICZ—A表达载体,转化毕赤酵母中,SDS—PAGE实验证实了IBV H株S1基因在毕赤酵母中得以表达,进一步用鸡抗IBV血清做Westernblot检测．证实了表达产物的抗原特异性。     

禽白血病病毒p19基因末端片段在大肠杆菌中的表达

根据禽白血病病毒（ALV）p19基因末端序列合成一条82 bp的双链DNA片段,将其克隆到表达质粒pGEMEX-1中,序列分析结果与设计的相符。重组表达质粒转化的大肠杆菌BL21（DE3）经IPTG诱导后产生34kD融合表达产物,与理论值相符;Western-blot分析表明该表达产物能与兔抗ALV血清发生反应。     

鸡传染性支气管炎病毒H株纤突蛋白基因的RT-PCR/RFLP分型

鸡传染性支气管炎病毒(ＩＢＶ)属于冠状病毒科冠状病毒属,可引起鸡呼吸道、输卵管、肾脏、肠道及腺胃等多部位病变。近年来,由于新的ＩＢＶ变异毒株不断出现,从而导致鸡传染性支气管炎病的不断爆发,造成严重的经济损失[1]。ＩＢＶ的基因组为单股ＲＮＡ,约27.6ｋｂ,该基因主要编码3种主要结构蛋白:纤突蛋白(Ｓ)、膜蛋白(Ｍ)和核衣壳蛋白(Ｎ),其中Ｓ蛋白成熟裂解为Ｓ1和Ｓ2两个蛋白亚基。Ｓ1蛋白是ＩＢＶ的主要免疫原基因,可刺激机体产生中和抗体,决定病毒的组织亲嗜性,在病毒血清学分类中起主要作用[1,2]。Ｈ株是1993年在河南省分离的典型肾…     

禽白血病病毒p19基因末端片段在大肠杆菌中的表达

根据禽白血病病毒（ALV）p19基因末端序列合成一条82bp的双链DNA片段,将其克隆到表达质粒pGE-MEX-1中,序列分析结果与设计的相符。重组表达质粒转化的大肠杆菌BL21（ＤＥ３）经ＩＰＴＧ诱导后产生３４kD融合表达产物,与理论值相符;Western-blot分析表明该表达产物能与兔抗ＡＬＶ血清发生反应。     

A亚群禽白血病病毒囊膜基因gp85片段在大肠杆菌中的表达

将RAV-1囊膜基因gp85片段亚克隆到表达质粒pET-21d(+)中得到重组表达质粒pET-21d-RAV-1env(BglII/SalI),序列分析表明该插入片段的核苷酸序列和阅读框都与RAV-1囊膜基因相应序列相同.用其转化大肠杆菌BL21(DE3)并经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表明RAV-1囊膜基因融合蛋白表达产物约20kD,与理论值相符;IPTG诱导起始时间比诱导持续时间对表达量的影响更大.