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生物技术药物药代动力学研究的方法学和实验设计 总被引:2,自引:1,他引:1
生物技术药物由于自身具有的特点 ,使得其在体内的药代动力学机制比传统药物更为复杂。近年来 ,对于这类药物在体内的代谢机制的研究日趋增加 ,研究方法也日趋成熟。概述了生物技术药物的药代动力学研究方法以及实验设计的特点。 相似文献
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为了降低由人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)的广谱促分裂活性引起的潜在副作用,用中性氨基酸丙氨酸取代了hbFGF第108位的丝氨酸,构建了促分裂活性降低的hbFGF突变体(mhbFGF)。IPTG诱导突变体在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达。mhbFGF的表达量约为全菌体蛋白的30%。通过离子交换和肝素亲和层析从菌体上清中纯化目标蛋白。MTT法检测促分裂活性表明,mhbFGF的促分裂活性显著低于野生型hbFGF。纯化的:mhbFGF可用于进一步的药效和安全性研究。 相似文献
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将编码人可溶性晚期糖基化终产物受体-免疫球蛋白G Fc段(hsRAGE-IgG Fc)融合蛋白的DNA片段克隆到大肠杆菌表达载体pET-20b中,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)并表达。SDS-PAGE分析表明其表达形式为包涵体,相对分子质量约为66kDa,表达量占菌体总蛋白的38.4%。经复性后,获得纯度为96.6%的融合蛋白,得率约为29.5mg/L。经Western印迹法鉴定,该融合蛋白可与sRAGE抗体产生阳性反应。同时,hsRAGE-IgG Fc融合蛋白可以显著抑制晚期糖基化终产物(AGE)引起的ECV-304细胞NF-κB p65表达的上调,其活性与hsRAGE相似。 相似文献
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鸡传染性支气管炎病毒H株纤突蛋白S1基因的克隆及其在毕赤酵母中表达 总被引:4,自引:0,他引:4
鸡传染性支气管炎病毒(IBV)河南分离株H,经SPF鸡胚增殖,差速离心纯化病毒,SDS-蛋白酶K法抽提病毒RNA。参照IBV Bcaudette株纤突蛋白S1基因序列设计并合成引物,以其进行RT—PCR,成功地扩增出IBV H株S1基因。扩增产物经Bst YⅠ Hae Ⅲ和Pst Ⅰ酶切分析,结果表明,IBV H株S1基因的RFLP图谱与M41株S1基因的完全一致,初步断定IBV H株为Mass血清型。将IBVH株S1基因克隆于pGEM—T载体中进行序列分析,结果表明该基因全长为1611bp(从ATG到S前体蛋白裂解位点),与标准株M41和Beaudette的S1基因序列相比较,同源率分别达到97.39%和97、27%。将IBV H株S1基因亚克隆到pPICZ—A表达载体,转化毕赤酵母中,SDS—PAGE实验证实了IBV H株S1基因在毕赤酵母中得以表达,进一步用鸡抗IBV血清做Westernblot检测.证实了表达产物的抗原特异性。 相似文献
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人内皮细胞抑制生长素在毕赤酵母中的高效表达 总被引:2,自引:0,他引:2
根据人胶原蛋白ⅩⅧNC结构域C末端编码内皮细胞抑制生长素 (Endostatin)的成熟多肽序列 ,人工合成了由毕赤酵母 (Pichiapastoris)中偏爱密码子组成的内皮细胞抑制生长素基因序列。该基因以N端融合的方式正确插入毕赤酵母诱导型表达载体pPICZαA中。通过电激将线性化的重组质粒转化到毕赤酵母SMD1 1 68细胞中 ,筛选获得表达具有生物活性的内皮细胞生长抑制素的高产菌株。在摇瓶发酵水平上 ,产量达到 80mg L。而利用生物反应器进行高密度发酵 ,Endostatin的产量可达 1 2 5mg L。纯化后的Endostatin具有抑制小鼠血管内皮细胞增殖的活性 相似文献
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通过混合纤维蛋白原和凝血酶溶液与不同量(0、1、2、4 mg)的PLGA无纺丝制得力学强度提高的生物混合支架,检测各组支架对大鼠骨髓间充质干细胞(rMSC)增长的影响.用扫描电镜观察各组支架都具有多孔且孔间相通的特性.根据收缩溶胀的测量,混入PLGA的纤维蛋白支架收缩率明显小于未混合PLGA的支架.检测各组的压缩模量,混合PLGA的支架压缩模量大于未混合的支架,其差异均具有统计学意义.选择具有多向分化潜能的rMSC在混合支架上的生长,进行DNA荧光检测法测得细胞增长值,在混合PLGA无纺丝1 mg的支架上rMSC增长效果最好.实验证明纤维蛋白混合三维支架维持原纤维蛋白支架内部多孔隙三维结构,而且增大了支架的力学强度,在一定程度上提高了骨髓间充质干细胞在支架上的增长,在组织工程中是具有潜力的细胞生长三维支架. 相似文献
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基于CA_Markov模型的伊犁河三角洲景观格局预测 总被引:6,自引:0,他引:6
在遥感和水文数据的支持下,结合伊犁河三角洲的区域特点,确定了伊犁河三角洲的景观分类系统.通过景观生态学的定量分析和CA_Markov模型模拟方法,系统分析了1975—2007年伊犁河三角洲景观格局的时空演变特征,并对2020年景观格局的情景进行了模拟与预测.结果表明:在人为间接干扰和自然环境的双重影响下,1975—2007年伊犁河三角洲的景观格局变化具有一定的周期性和不稳定性;对CA_Markov模型的可利用性进行分析与检验,1990—2007年伊犁河三角洲景观变化符合CA_Markov模型应用的条件;2020年,研究区景观的斑块破碎化严重,连通性趋于弱化,与水密切相关的湖泊、沼泽和漫滩的时空变化存在很大的不确定性;分别基于1990—2000年和2000—2007年概率转移矩阵预测的2020年研究区景观格局存在显著的差异性,不同景观类型的差异程度和表现形式各异,原因在于这两个时段自然条件的非一致性和不稳定性以及各景观类型的转移方式和方向不同. 相似文献
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昆虫抗菌肽在医药上的应用 总被引:24,自引:0,他引:24
柞蚕抗菌肽有广谱杀菌作用,能抑制乙型肝料病毒DNA复制,又能选择杀伤肿瘤细胞。属于一类具有明确化学结构及杀菌功能的成份,又有新作用靶位及不同于一般抗菌素的作用机制,对动物安全、无毒、无副作用。在医药上已制成“肾肝宁”胶囊治疗肾炎及肝炎。以免疫血淋巴干冻粉制成柞蚕素胶胶囊治疗乙型肝炎,已取得临床试验批文。现将进一步把抗菌肽纯化为单体,作为治疗耐药性细菌感染的消化道炎症的新药,以克服常用抗生素的毒、副作用和易引起病菌抗药性的弱点。抗菌肽开发成一类新药有广阔的开发前景。 相似文献
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减少寡聚体形成的重组人碱性成纤维细胞生长因子的改造 总被引:1,自引:1,他引:0
采用PCR突变技术改造人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)cDNA,将扩增的cDNA片断插入表达载体pET3c的表达框架中,构建了表达菌株BL21(DE3)/pE33c-[Ser69,87]hbFGF,用IPTG诱导表达,其[Se^69,87]hbFGF的表达量占菌体总蛋白30%。通过离子交换、肝素亲和两步层析的方法获得了纯度达98%的[Se,^69,87]hbFGF样品。用MTT法测得纯化的[Ser^69,87]hbFGF样品与野生型hbFGF促Balb/c 3T3细胞增殖的比活性相当。以野生型hbFGF作对照,分析反复冻融对突变体[Ser^69,87]hbFGF形成寡聚体的影响,并在25℃和37℃的条件下分析其寡聚体的形成情况。结果表明,不管是反复冻融还是在25℃和37℃的条件下,突变体[Se^69,87]hbFGF形成的寡聚体都较野生型hbFGF明显减少。 相似文献
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筛选鉴定H7N9病毒感染BV2细胞的特异聚类microRNA(miRNA)并初步探讨这些miRNA的可能致病机制。H7N9和H1N1流感病毒感染BV2细胞,分别收集12 h、24 h和48 h的细胞并提取总RNA。并利用高通量测序技术进行miRNA测序,同时比较鉴定不同病毒特异性miRNA。筛选出了10个H7N9病毒特异聚类miRNA,其中有3个miRNA被miRBase数据库所收录。这些特异聚类miRNA调控诸多信号通路的信号传导,比如Ras信号通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、轴突导向和癌症相关基因等。该研究为miRNA调控H7N9禽流感病毒的致病机制提供了科学基础。 相似文献