红曲菌 cDNA 消减文库的构建

应用抑制性消减杂交技术,构建红曲菌产桔霉素和不产桔霉素差异表达的 cDNA 消减文库。分别从产桔霉素和不产桔霉素的红曲菌丝体中提取 mRNA,依次合成单链和双链 cDNA,经酶切成大小为 250～750bp 的片断,将产桔霉素的 cDNA 分为两组,分别与两种不同的接头连接,再与不产桔霉素的红曲菌的 cDNA 进行两次消减杂交及两次抑制性 PCR 后,将产物与 T/A 载体连接构建成功 cDNA 消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,文库扩增后得到 283 个克隆,经 PCR 法快速测定,均得到 250～750bp 的插入片断。所构建的红曲菌 cDNA 消减文库为进一步筛选红曲菌中与产桔霉素性状相关的基因奠定了基础。     

红曲菌cDNA消减文库的构建

应用抑制性消减杂交技术,构建红曲菌产桔霉素和不产桔霉素差异表达的cDNA消减文库.分别从产桔霉素和不产桔霉素的红曲菌丝体中提取mRNA,依次合成单链和双链cDNA,经酶切成大小为250～750bp的片断,将产桔霉素的cDNA分为两组,分别与两种不同的接头连接,再与不产桔霉素的红曲菌的cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR后,将产物与T/A载体连接构建成功cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,文库扩增后得到283个克隆,经PCR法快速测定,均得到250～750bp的插入片断.所构建的红曲菌cDNA消减文库为进一步筛选红曲菌中与产桔霉素性状相关的基因奠定了基础.     

3种前处理方法提取鸡脯肉中磺胺二甲基嘧啶的方法比较

分别采用磷酸盐缓冲液(PBS)提取法、免疫磁富集法和GB 29694—2013法提取鸡脯肉中的磺胺二甲基嘧啶,比较这3种方法的回收率和稳定性。当偶联液(0.01 mol/L PBS)p H为5.0、抗体偶联量为80μg、捕获时间为45 min、免疫磁珠用量为350μg时,免疫磁富集法的回收率和变异系数分别为98.8%~102.9%和4.7%~6.2%;磷酸盐缓冲液提取法的回收率和变异系数分别为40.5%~78.5%与8.7%~10.4%;GB 29694—2013法的回收率和变异系数分别为90%~107.1%与8.5%~9.8%。磷酸盐缓冲液提取法简便省时,但是其回收率偏低;GB 29694—2013法与免疫磁富集法的回收率均可高达90%,与GB 29694—2013法相比,免疫磁富集法更省时,具有较大的应用前景。