红曲菌 cDNA 消减文库的构建

应用抑制性消减杂交技术，构建红曲菌产桔霉素和不产桔霉素差异表达的 cDNA 消减文库。分别从产桔霉素和不产桔霉素的红曲菌丝体中提取 mRNA，依次合成单链和双链 cDNA，经酶切成大小为 250～750bp 的片断，将产桔霉素的 cDNA 分为两组，分别与两种不同的接头连接，再与不产桔霉素的红曲菌的 cDNA 进行两次消减杂交及两次抑制性 PCR 后，将产物与 T/A 载体连接构建成功 cDNA 消减文库，并转染大肠杆菌进行文库扩增，文库扩增后得到 283 个克隆，经 PCR 法快速测定，均得到 250～750bp 的插入片断。所构建的红曲菌 cDNA 消减文库为进一步筛选红曲菌中与产桔霉素性状相关的基因奠定了基础。