水稻草矮病毒NS6基因在大肠杆菌中的表达及植物表达载体的构建

Large amount of disease-specific protein(SP) accumulated in the rice plant cells infected by rice grassy stunt virus(RGSV). It was deduced that the protein was encoded by NS6 gene on genomic vRNA6 and thus referred to as NS6 protein.But its function is unknown. In an effort to prove the above deduction and to elucidate the function of NS6 protein of RGSV, we constructed a bacterial expression plasmid pGTNS6 producing a fusion protein of glutathione S-transferase (GST) and NS6 protein, and a plant expression vector pCBTNSv6 containing NS6 gene. A recombinant plasmid pTNSv 6 containing the coding region of NS6 gene and the non-coding region at its 5' terminus, cloned by RT-PCR from purified RNAs of Shaxian isolate of RGSV, was used as the start point. Western blot analysis showed that the fusion protein reacted strongly with antisera raised against RGSV-SP, which served as evidence of the deduction.EHA105 of Agrobacterium tumefasciens containing pCBTNSv6 has been obtained and the transformation of rice is underway.     

水稻齿叶矮缩病毒Pns10蛋白的原核表达、抗血清制备及初步应用

水稻齿叶矮缩病毒Pns10蛋白由基因组片段S10编码。从RRSV福建沙县分离物(RRSV-F)中获取该病毒的全基因组,根据RRSV泰国分离物核苷酸序列设计特异性引物获得S10编码区,利用Directional TOPO克隆技术,将S10连接至克隆表达载体pET100/D-TOPO构建重组质粒,并进行了序列测定和分析。重组质粒经IPTG诱导在BL21star(DE3)E.coli中高效表达约35 kD Pns10蛋白。将Pns10蛋白免疫新西兰大白兔制备了特异性的抗血清,间接ELISA法测定抗血清效价为1∶7 680,Western blot分析表明抗血清特异性强。表达产物及抗血清在Pns10蛋白的结构和功能研究中具有重要的应用价值,制备的抗血清可用于水稻病株和传播介体的检测以及病毒病的诊断。     

两个水稻品种（系）酵母双杂交cDNA文库的构建和比较分析

"武育粳3号"和"KT95-418"为两个遗传背景基本一致而对水稻条纹叶枯病表现为明显抗性差异的粳稻(Oryza sativa L.ssp. japonica)品种(系).利用SMART技术合成双链cDNA后,通过SfiⅠ酶切位点将cDNA片段定向插入到改造的载体NpGADT7中,构建了两品种(系)水稻的酵母双杂交cDNA文库.检测结果表明:所构建的两个文库库容量均大于1.0×106 cfu;初始文库滴度分别为1.0×1010 cfu/mL和5.0×1010 cfu/mL,扩增文库滴度均为1.0×1011 cfu/mL;两文库重组率均大于95 %;"武育粳3号"文库cDNA插入片段长度集中分布在700 bp～800 bp之间,"KT95-418"集中分布在750 bp～1 000 bp之间;小规模测序结果表明两文库中全长基因的比例均超过60 %.两品种(系)水稻酵母双杂交cDNA文库的构建为筛选分离抗病相关的变异基因及开展寄主与水稻条纹病毒(Rice stripe virus, RSV)互作的研究奠定了基础.     

呼肠孤病毒科的系统发育分析

运用邻接法(neibor-joining,NJ)、最大似然法(maximum likehood,ML)对国际病毒分类委员会(Intemational Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)第八次报告中所有已报道的呼肠孤病毒科外层衣壳蛋白序列进行了系统发育分析.结果表明:两种方法构建的系统树拓扑结构基本一致,尽管部分分支略有差异,但都能够反映出科内各属的系统发育关系,分析结果支持了该科的分类地位.同时还比较两种建树方法的异同点,并对建树产生的差异原因作了探讨.     

毛头鬼伞多糖CCP60a对TMV外壳蛋白的影响

对毛头鬼伞（Coprinus comatus Muell．ex Fr．）子实体中的多糖CCP60a进行了提取分离及检测,研究了不同温度条件下CCP60a对烟草花叶病毒（TMV）外壳蛋白体外聚合的影响,并用Western blotting法研究了CCP60a对TMV外壳蛋白表达的影响。结果表明,经沸水浸提、乙醇分级沉淀、DEAESephadex A-25离子交换柱层析、Sepharose-6B凝胶柱层析和抗TMV活性跟踪检测可得到均一的多糖CCP60a。随温度的提高,CCP60a处理组在320nm处的吸光度值增加幅度明显小于对照组,表明CCP60a对TMV外壳蛋白体外聚合有一定的抑制作用。Western blotting检测结果显示,CCP60a可以使TMV外壳蛋白的表达明显降低。     

孔石莼(Ulva pertusa)质体蓝素基因的克隆及基因特征分析(英文)

采用cDNA末端快速扩增的办法,从孔石莼(Ulva pertusa)中克隆获得质体蓝素基因。该基因完整的cDNA为787bp,包括40 bp 5’端非编码区和327 bp的3’端非编码区,以及一个420 bp的开放阅读框架,编码139个氨基酸的蛋白质。该基因编码质体蓝素的前体肽,其N端41个氨基酸残基为信号肽,后面为98个氨基酸残基的成熟肽。从Genbank中选择了13个质体蓝素的前体肽基因进行序列比对分析和构建进化树。孔石莼质体蓝素基因与其它质体蓝素基因的同源性为48.2%至78.8%。该进化树将来源于6种藻类植物的7个质体蓝素基因聚类在一起,显示出它们较近的进化关系。同样,也表现出11种生物的分子进化关系。序列比对结果显示,在质体蓝素的基因序列中存在两个高度保守的基序,它编码质体蓝素蛋白的铜结合活性位点。     

毛头鬼伞(Coprinus comatus)多糖的理化性质及体外抗氧化活性

毛头鬼伞(Coprinus comatus)子实体经热水浸提、乙醇沉淀、脱蛋白和真空干燥后得到毛头鬼伞多糖。经定性化学反应和光谱鉴定,毛头鬼伞多糖不含蛋白质、核酸、酚类物质和糖醛酸,为非淀粉类中性多糖,均分子量为947 kD,完全酸水解后经气相色谱分析确定其糖基组成及其摩尔组成比为葡萄糖∶甘露糖∶半乳糖=10.5∶1.7∶1。通过对脱氧核糖体系产生的羟基自由基(.OH)的清除作用和邻苯三酚自氧化系统产生的超氧阴离子自由基(O2-.)的清除作用,对毛头鬼伞多糖体外抗氧化活性进行的研究结果表明:该多糖具有一定的抗氧化活性。     

拮抗菌SB1的鉴定及其抗菌物质的分析

对番茄根系菌株SB1的抗菌活性进行测定,结果表明该菌株对多种植物病原真菌、细菌具有明显的抑制作用,表现出广谱抗菌活性。通过菌体形态、生理生化反应及16SrDNA序列分析,鉴定菌株SB1为枯草芽孢杆菌内生亚种。以青枯雷尔氏菌为指示菌,测定了菌株SB1抗菌物质的理化性质及组成。结果表明,其抗菌物质表现出良好的热稳定性、水溶性和醇溶性,且对紫外线照射和蛋白酶K处理不敏感。高效液相色谱分析结果进一步显示菌株SB1的抗菌物质中含有抗菌肽Surfactin。     

天然抗烟草花叶病毒大分子物质研究进展

天然大分子物质主要包括蛋白、核酸和糖类.本文主要阐述了植物、动物和微生物中天然抗烟草花叶病毒大分子物质的研究与应用现状.关于这些大分子物质的抗病毒机理是多方面的,主要包括抑制病毒的侵染、对植物病毒增殖过程中的干扰和抑制作用、诱导植物的抗病性反应等,并对今后的研究进行了展望.     

孔石莼凝集素蛋白基因的克隆与表达

根据孔石莼(Ulva pertusa)凝集素(Lectin)蛋白cDNA全长序列(GenBank登录号:AY433960)设计引物,以其总DNA为模板,采用PCR技术扩增蛋白DNA序列,经克隆、测序获得基因序列。结果表明,孔石莼凝集素蛋白(UPL)基因序列长约为670 bp,含有一个大小为56 bp的内含子。此外,设计带酶切位点的引物,以UPL-cDNA为模板,扩增其开放阅读框,并与表达载体pGEX-2T连接,构建原核表达载体pG2T-UPL,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达大小约为47 kD的目的蛋白。