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2.
T7启动子具有真核生物聚合酶Ⅱ顺式作用因子的功能   总被引:1,自引:0,他引:1  
根据a-鹅膏蕈碱(a-amanitin)对真核生物RNA聚合酶的选择性抑制,以氯霉素乙酰转 移酶基因(CAT)作为报道基因进行体内表达实验,证明T7噬菌体启动子可为真核生物RNA 聚合酶Ⅱ所启动。应用建立的竞争性DNA-蛋白质凝胶泳动技术,分别以TATA框、CAAT 框、GC框和八核苷酸序列(octamer)为竞争性寡核苷酸分子,发现人工合成的T7启动子可能 与 TFⅡD起始转录因子结合,形成 DNA-核蛋白质结合物。将 TATA框和八核苷酸序列分别 接入T7启动子上游,CAT实验显示八核苷酸序列可以增强RNA聚合酶Ⅱ对T7启动子的转录 起始作用。实验结果表明T7启动子可作为RNA聚合酶Ⅱ的顺式作用因子。  相似文献   
3.
抗菌肽 (Antibacterialpeptides)原指昆虫体内经诱导产生的一类分子量在 4kD左右 ,具有抗菌活性的碱性多肽物质[2 ] 。这类抗菌剂最初是从昆虫、哺乳动物、两栖动物等的防御系统中分离得到的。抗菌肽对革兰氏阳性及阴性细菌、病毒、原虫和发生病变的真核细胞等有杀伤作用 ,具有很强的广谱抑菌作用 ,但对正常哺乳动物细胞无杀伤作用[3 ] 。蛙皮素还具有抗肿瘤活性而没有溶血活性[4 ] ,虽然蜂毒素具有溶血活性 ,但其溶血功能区位于C端的亲水区域[5] ,两者的极性区域正好相反。据研究表明抗菌肽都会形成两亲螺旋结构的…  相似文献   
4.
根据天蚕抗菌肽A(cecropin A,CA)N端第1~7个 氨基酸残基、 蜂毒素(melittin,M)N端第5~12个氨基酸残基,以大肠杆菌偏爱的密码子设计合成了杂合肽CA(1~7)-M(5~12)基因,同载体pGEMEX-1连接后转化大肠杆菌JM109,经打点杂交筛选和序列测定,获得一个与设计一致的克隆。将此克隆中的质粒亚克隆至JM103(DE3) ,经IPTG诱导、BrCN切割和抑菌圈试验表明,克隆的杂合肽基因在JM109(DE3)中获得了表达。 Abstract:According to the studies of David Andreu and other scientists,we designed and synthesized a gene encoding shortened cecropin A-melittin hybrid.This hybrid consists of CA(1-7) and M(5-12).The gene was inserted into pGEMEX-1 in the site of EcoRI and BamHI.A positive clone was obtained by hybridization and DNA sequencing and was expressed in JM109(DE3).  相似文献   
5.
通过血管注射、腹下注射、唾液腺注射等3种不同途径将野生型小鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)感染免疫缺损型小鼠CM17 SCID(sevele combined immunodeficiency,严重免疫缺损综合症),在感染后不同的时间内分别取唾液腺、脾、肝、肺和肾脏测定其病毒滴度,以及测定感染后SCID小鼠的死亡率.同时通过唾液腺注射RvM43突变株,测定病毒在唾液腺中的滴度.结果显示:经尾部血管途径注射的体内唾液腺、肺、脾、肝和肾脏的病毒滴度高峰期和SCID小鼠死亡时间均显著性早于经腹下注射、唾液腺注射途径、除唾液腺器官外,经唾液腺注射途径肺、脾、肝和肾脏的病毒的出现时间晚于经尾部血管和腹下注射途径.经唾液腺注射后,唾液腺中突变型RvM43在各时间点的病毒滴度及高峰出现时间与野生型相同.由此可知,从唾液腺感染小鼠后:MCMV病毒在唾液腺中的生长不受M43基因突变的影响,小鼠巨细胞病毒不同途径感染免疫缺损型小鼠CMl7 SCID的体内生物学效应有差异.因此有必要通过不同途径感染宿主来研究MCMV基因的体内功能.  相似文献   
6.
将合成血清胸腺因子(STF)基因插入表达型大肠杆菌质粒pWR590对大肠杆菌C600进行转化,用同位素探针杂交捡出阳性克隆,以合成STF多肽的抗体用ELISA方法及放射免疫分析证明克隆株能表达出STF多肽。  相似文献   
7.
从重组质粒rBS上切下柞蚕抗菌肽D基因片段,切去终止密码后连接到重组穿梭质粒pVT-GF上碱性成纤维细胞生长因子cDNA的5′端,使密码框正确排列,构建成融合基因重组质粒pVT-CDGF,转化到酵母中进行表达。转化子酵母蛋白粗提物用E.coliK12D31作指示菌进行抑菌圈测试,初步检出具有抑菌活性,用ELISA检测证明其具有碱性成纤维细胞生长因子的抗原性。  相似文献   
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