人神经生长因子信号肽介导β-内啡肽的分泌表达

目的:构建人神经生长因子信号肽与人β-内啡肽融合基因的真核表达载体,研究人神经生长因子信号肽介导β-内啡肽的分泌表达.方法:取得人基因组后,PCR 法获取人的神经生长因子信号肽部分序列及人β-内啡肽序列;通过 SOE-PCR法将两段 DNA 序列连接,然后插入到真核表达载体内,测序正确后扩增转染级的真核表达载体.表达载体脂质体法转染 NIH3T3细胞,转染后 48-72h 收集细胞及培养上清,RT-PCR 法检测融合基因的转录.RIA 法测定细胞外β-内啡肽的浓度.结果:成功构建全人源的分泌型表达β-内啡肽的真核表达载体,DNA 序列经测序完全符合实验设计;融合基因能够顺利地得到转录并进行表达翻译,在细胞培养上清中可检测到其产物.结论:构建的真核表达载体能够分泌表达人β-内啡肽,提示人神经生长因子信号肽序列能够发挥其介导蛋白产物分泌表达的作用.     

鞘内注射一代和三代腺病毒载体免疫反应的比较

目的:比较鞘内注射第一代与第三代腺病毒载体后引起免疫反应的差异.方法:SD大鼠 随机分为对照组、第一代腺病毒载体(Ad-NEP)组、第三代腺病毒载体(HDAd-NEP)组.各组在 注射病毒或生理盐水后不同时间点,检测血清中IL-2、IL-6、TNF-α、IgG的浓度及脾脏中C D80表达情况.结果:各项检测指标在病毒或生理盐水注射前(0d),均无统 计学差异;IL-2、TNF-α、IgG等在注射后同一时间点,Ad-NEP组均高于HDAd-NEP组(P ＜0.0 5),且两组均高于对照组(P＜0.01);注射后1d、3d,Ad-NEP组的IL-6水平显著高于HDA d-NE P组(P＜0.05),且两组均高于对照组(P＜0.01);在注射后7d,Ad-NEP组CD80表达水平高于H DAd-NEP组(P＜0.05),两组均高于对照组(P＜0.01).结论:第三代腺病毒 载体也能引起一定程度的免疫反应,但第三代腺病毒载体引起的免疫反应要较第一代腺病毒载体引起的免疫反应弱.