限制性核酸内切酶Bsp 63I特性的研究

Ⅱ型限制性核酸内切酶的发现和应用,革命性地推动了分子生物学和遗传工程的发展。不管从酶本身的理论研究或从工具酶的应用研究方面来说,都必须首先确定酶促反应系统的最适条件以及各种因素对酶活性的影响,但是目前关于这类酶促反应条件的确定,多数是根据定性实验和经验,很少是根据定量实验作动力学描述。     

一种SOD的测活方法——邻苯三酚自氧化法的改进

超氧化物歧化酶(SOD)是在医疗上具有广泛应用前景的酶。它的测活方法很多,一般是根据SOD具有抑制O_2介导的反应的能力这一原理而建立的。邻苯三酚自氧化法是其中较为简便的一种,本文对这种方法做了下述改进。材料与方法 1.仪器 M750UVIS-A型微量紫外可见分光光度计和日本岛津双光束双波长自动记录分光光度计。 2.试剂 SOD(上海生化所东风试剂厂产品),其它试剂均为分析纯。 3.邻苯三酚自氧化速率的测定取4.5ml100mM缓冲液(见表1),4.2ml蒸馏水,混匀     

一种灵敏实用的DNase Ⅰ定量测活方法

DNase I的测活方法有紫外吸收法、同位素法和荧光法等.紫外吸收法简便,但灵敏度较低.同位素法灵敏度高,但实验条件要求高,且操作复杂.荧光法灵敏度较高,也简便,但影响因素较多.我们建立了一种以固定化DNA为底物的微量紫外吸收法,它较简便,灵敏度也较高.材料与方法材料:DNase I (Seravac Laboratories出     

某些极性有机溶剂对限制性内切酶Bsp 63Ⅰ和pstⅠ酶活性的影响

1980年George等人发现Bam HI在一些极性有机溶剂中专一性发生了改变。同年Malygune等人发现在低Mn~( )(2mM)存在下,加入各种极性有机溶剂,或改变反应离子强度,某些Ⅱ型酶的专一性也发生了改变。Polisky等人曾经研究了pH和离子强度对Ecok Ⅰ的影响。发现在极性条件下,Ecok Ⅰ的识别     

一种限制性核酸内切酶的荧光测活方法

到目前为止,发现的限制性核酸内切酶已超过475种,它们都来源于原核生物。限制性内切酶是遗传工程等工作中的重要的工具酶,同时也为研究两类最重要的生物大分子蛋白质和核酸之间的相互作用提供了一个理想的模型。要深入开展酶的性质、动力学、化学修饰以及结构与功能的研究,定量测活方法的建立是一个前提。此类酶的定量测活方法已有十余种,它们各有其优缺点,但至今还没有一种方法能达到既准确灵敏、简单方便,又普遍适用的程度。     

一步肝素琼脂糖亲和层析法分离纯化限制性核酸内切酶Pst1

Ⅱ型限制性内切酶是重要的工具酶。它的提纯方法,以前一般是破碎细胞,超速离心取得酶的粗提液后,先除去核酸,后用硫酸铵部分沉淀除去部分杂蛋白,再用各种柱层析法进一步纯化。Greene等人在1978年建立了直接用酶的粗提液,经过磷酸纤维素和羟基磷灰石两步柱层析提取酶的方法,所得酶制剂中不夹杂其它脱氧核糖核酸酶。此法较简便快速,已为国内外所采用。 Baksi等人报道用一步Cibacron Blue F3GA-琼脂糖亲和层析提取BamHl等酶。George等人报道Pstl的粗提液只经过这一步柱层析     

鸭血超氧化物歧化酶(SOD)的纯化及性质研究

超氧化物歧化酶(E、C、1.15.1.1)是催化超氧阴离子起歧化反应的金属酶类,血红细胞中的SOD属Cu Zn—SOD。本文详细报道了从鸭血分离纯化SOD的改进方法(同时用猪血作对比研究)。设计了热变性、(NH_4)_2SO_4分级监析、低浓乙醇—氯仿短时去除残留血红蛋白、凝胶层析四步纯化方案,获得高产率电泳纯SOD。用紫外扫描,PAGE电泳后考马斯亮蓝和SOD活性杂色,SDS—电泳,HPLC分离和各电泳带组分的N—端测定等技术检测纯度,并进行性质研究。证明所得SOD是均一的;N—端为Ala;分子量和亚分子量各为32,359和16,500dt;并与猪血SOD对比研究其某些性质;对HPLC出现的多个活力峰及PAGE电泳显现的多条活性带进行了讨论。     

一种简便实用的限制性核酸内切酶定量测活方法

对限制性核酸内切酶进行酶学研究,无论在理论上或应用上都有着重要的意义。准确而简便的定量测活方法,是进行酶学研究的前提之一。目前这类酶的定量测活,多采用同位素标记法或微光密度扫描法,但前者受到标记底物来源、同位素半衰期和比强度的影响;后者需要昂贵的仪器,故它们的使用范围受到一定     

鸽肝线粒体DNA的研究 Ⅰ.纯化及电镜观察

线粒体DNA(mtDNA)是研究环状DNA复制、转录及其调控的一个较好模型,而且mtDNA存在一些有别于细胞核DNA的特性。此外mtDNA与核DNA还表现协作效应。迄今为止哺乳类及真菌的mtDNA已研究较多,但对鸟类的mtDNA研究尚少。鸽肝mtDNA的研究,国内尚未见报道。本文就这方面的工作先作一初步的报道。