长白落叶松转录因子LobHLH34克隆及表达分析

为了解转录因子bHLH在长白落叶松（Larix olgensis）中的功能,探究该基因在长白落叶松不同组织中及不同逆境胁迫下的表达特性,从长白落叶松根、茎和叶3个不同部位的转录组数据中获得bHLH34基因全长序列,并设计引物,克隆得到长白落叶松bHLH34基因,其完整的开放阅读框（ORF）长度为696 bp,共编码231个氨基酸。构建亚细胞定位表达载体,瞬时转化毛果杨（Populus trichocarpa）原生质体,在激光共聚焦显微镜下观察显示,LobHLH34基因定位在细胞核内。系统进化树分析结果显示,长白落叶松与云杉（Picea asperata）、卷柏（Selaginella tamariscina）树种该基因的亲缘关系较近。利用qRT-PCR技术分析了bHLH34基因在长白落叶松中的组织表达特异性和应对非生物胁迫的表达。结果表明LobHLH34基因在长白落叶松的根、茎、叶中均有表达,其中在茎部表达量最低,在叶中相对表达量最高。LobHLH34基因在NaCl、PEG和ABA处理时,不同器官中的表达量也有所不同。推测长白落叶松bHLH34基因参与了植物的生长、发育、响应逆境胁迫的过程,且在不同器官中具有特异性。     

苍术多糖与正丁醇部位对脾虚大鼠线粒体自噬的影响

多糖与正丁醇部位是苍术的健脾活性部位，本文从线粒体自噬的角度探讨苍术活性部位对脾虚大鼠的调节作用，进而阐释其健脾机制。采用透射电镜观察大鼠胃窦组织线粒体超微结构；采用qRT-PCR和Western blot法检测大鼠胃窦组织线粒体PINK1、Parkin、LC3和P62 mRNA及蛋白表达水平；采用比色法检测大鼠胃窦组织三磷酸腺苷(adenosine-triphosphate, ATP)、H₂O₂水平，JC-1荧光探针法检测线粒体膜电位(MMP)水平。结果表明，与模型组相比，麸炒苍术多糖(FD)、麸炒苍术正丁醇部位(FZ)、生苍术多糖(SD)与生苍术正丁醇部位(SZ)均不同程度改善了脾虚大鼠胃窦组织线粒体结构损伤，且自噬溶酶体数量增多；FD、FZ、SD与SZ均能显著下调PINK1、Parkin、p62 mRNA与蛋白表达，上调LC3II蛋白表达、LC3II/I值；FD与FZ组ATP、MMP水平显著上升，H₂O₂水平显著下降，SZ组ATP、MMP水平显著上升，SD组H₂O