β—淀粉样肽、氧应激与Alzheimer病

Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病 (ＡＤ)患者的神经病学特征是脑组织萎缩 ,出现大量的淀粉样斑块 (ａｍｙｌｏｉｄｐｌａｑｕｅｓ ;亦称老年斑 ,ｓｅｎｉｌｅｐｌａｑｕｅｓ ,ＳＰ)和神经纤维缠结 (ｎｅｕ ｒｏｆｉｂｒｉｔａｒｙｔａｎｇｌｅｓ)沉积。ＡＤ病人痴呆的程度与淀粉样斑块的发展呈正相关。老年斑的主要成分是 β 淀粉样肽 ( β ａｍｙｌｏｉｄｐｅｐｔｉｄｅ ,又称 β ａｍｙｌｏｉｄｐｒｏｔｅｉｎ ,Ａβ) ,其分子量约为 4 .2ｋＤ ,由 39～ 4 3个氨基酸残基组成。Ａβ来自一种跨膜糖蛋白———β 淀粉样质前体蛋白 (ａｍｙｌｏｉｄ ｐｒ…     

人GST-AWP1融合蛋白的原核表达及其抗体制备

为进一步研究人的一新蛋白———蛋白激酶C相关激酶 1相关蛋白 (AWP1)的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行GST AWP融合蛋白表达载体的构建、原核表达、纯化及其抗体的制备 .采用逆转录PCR(RT PCR)法从人ECV30 4内皮细胞中扩增AWP1cDNA编码区 ,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶 (GST)融合蛋白表达质粒pGEX KG中 .经酶切、序列鉴定分析后 ,用该重组质粒转化大肠杆菌BL2 1,并经异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导产生GST AWP1融合蛋白 ,继而纯化获得了分子量约 5 6kD的融合蛋白 .将此融合蛋白免疫新西兰兔 ,经ELISA和Western印迹检测获得了效价高、免疫活性强的兔抗人多克隆抗体 .结果表明成功构建了GST AWP1融合蛋白表达载体 ,在大肠杆菌高效表达了GST AWP1融合蛋白 ,并获得高效多抗 ,为下阶段深入AWP1功能研究提供了重要的基础     

星形胶质细胞条件培养液对活性氧所致的神经元损伤的防护作用

本文以活性氧叔丁基脂氢过氧化物tbOOH应激PC12神经元细胞,造成PC12神经元损伤、死亡;以分离、纯化的SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞制备的无血清条件培养液培养tbOOH损伤的神经元细胞。采用快速灵敏的MTT比色法测定神经细胞活力,用Olym—pus光学显微镜观察神经细胞的形态学变化。结果发现神经元细胞活力由0．179±0．037上升至0．563±0．025,细胞数目明显增多,细胞死亡残留碎片明显减少,表明星形胶质细胞条件培养液可能有防护tbOOH致的神经元损伤作用,具抗氧化能力。     

一种用FRAP测定细胞间隙连接介导通讯的方法

本文探讨了利用荧光漂白恢复技术(FRAP)测定体外培养小鼠大脑皮层神经胶质细胞间隙连接通讯的方法。经细胞培养、荧光染色、荧光激发、荧光漂白、激光扫描及计算 机分析等处理,结果各所选神经胶质细胞内荧光均得到不同程度的恢复,即经扫描15.3分钟后,1—5号细胞内荧光相对强度分别上升了14％、28％、43％、17.5%、12.5％,三次平均上升了18.57±10.06％,荧光恢复速率平均为1.223±0.785％/min(n=14)。表明该方法可用来测定细胞间隙连接通讯。