胶质细胞源性神经营养因子(△N39)-R9神经营养活性和透过血脑屏障的研究

为了研究胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在中枢神经系统疾病中的治疗应用,运用基因突变、蛋白质融合表达和蛋白质纯化技术获得分子质量较小的GDNF(△N39)活性片段.将HIV-1 Tat蛋白转导区(protein transduction domain,PTD)的9个碱性氨基酸49RKKRRQRRR57模拟物9个精氨酸(R9)与GDNF(△N39)活性片段融合表达,获得纯度达95%以上的GDNF(△N39)-R9融合蛋白.将GDNF、GDNF(△N39)、GDNF(△N39)-R9分别加入原代培养的中脑多巴胺能神经元和转染GDNF受体GFRαl和Ret的PC12细胞中,观察它们的神经营养活性和毒性.运用脑微血管内皮细胞株B-Endo 3,观察GDNF(△N39)-R9蛋白穿越血管内皮细胞膜的功能;运用脑血管内皮细胞和Matrigel铺板模拟血脑屏障,Transwell法检测Tat-GDNF(△N39)蛋白穿越脑血管内皮细胞和外周胶质膜的能力.结果显示:GDNF(△N39)-R9蛋白具有类似GDNF的神经营养活性,促进原代培养的中脑多巴胺能神经元和稳定表达GFRα1和Ret受体的PC12-GFRα1-Ret细胞株的存活,没有显示毒性,并且能很好地穿过脑微血管内皮细胞层和模拟的血脑屏障.     

胶质细胞源性神经营养因子(ΔN39)-R9神经营养活性和透过血脑屏障的研究

为了研究胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF) 在中枢神经系统疾病中的治疗应用,运用基因突变、蛋白质融合表达和蛋白质纯化技术获得分子质量较小的GDNF(ΔN39)活性片段. 将HIV-1 Tat 蛋白转导区 (protein transduction domain,PTD) 的9个碱性氨基酸⁴⁹RKKRRQRRR⁵⁷模拟物9个精氨酸(R9)与GDNF(ΔN39)活性片段融合表达,获得纯度达95%以上的GDNF(ΔN39)-R9融合蛋白. 将GDNF、GDNF(ΔN39)、GDNF(ΔN39)-R9分别加入原代培养的中脑多巴胺能神经元和转染GDNF受体GFRα1和Ret的PC12细胞中,观察它们的神经营养活性和毒性. 运用脑微血管内皮细胞株B-Endo 3,观察GDNF(ΔN39)-R9蛋白穿越血管内皮细胞膜的功能;运用脑血管内皮细胞和Matrigel铺板模拟血脑屏障,Transwell法检测Tat-GDNF(ΔN39)蛋白穿越脑血管内皮细胞和外周胶质膜的能力. 结果显示：GDNF(ΔN39)-R9蛋白具有类似GDNF的神经营养活性,促进原代培养的中脑多巴胺能神经元和稳定表达GFRα1和Ret受体的PC12-GFRα1-Ret细胞株的存活,没有显示毒性,并且能很好地穿过脑微血管内皮细胞层和模拟的血脑屏障.     

不同剂量地佐辛用于腹腔镜妇科手术超前镇痛的效果观察

目的：观察不同剂量地佐辛用于腹腔镜妇科手术超前镇痛的效果。方法：将90例ASAI．II级、年龄18~60岁拟行腹腔镜妇科手术的患者随机分成3组,每组30例,A组给予地佐辛0．1mg／kg开皮前15rain静脉注射;B组给予地佐辛0．15mg／kg开皮前15min静脉注射;C组给予地佐辛0．2mg／kg开皮前15min静脉注射,采用VAS评分评估术后镇痛效果并观察术后辅助镇痛药物的使用和不良反应的发生情况。结果：B、c组术后2、4、6、8h的VAS评分明显低于A组（P〈0．05）;C组术后2、4h的Ramsay评分明显高于A、B组（P〈0.05）;A组术后辅助镇痛药的使用率明显高于B组和C组（P／0．05）;3组不良反应的发生率比较均无统计学差异（P〉0．05）。结论：开皮前15rain静注地佐辛0．15mg／kg用于腹腔镜妇科手术镇痛效果好,且不增加不良反应的发生率。     

右美托咪定在血管外科介入手术麻醉中的应用

目的:探讨靶控输注不同浓度右美托咪定对血管外科介入手术的效果。方法:选择周围血管疾病成年患者60例,随机分为I、II、III三组,每组20例。各组右美托咪定靶控输注浓度分别为0.2μg/kg/h,0.3μg/kg/h和0.4μg/kg/h,术中监测并记录各组手术开始前(T1),手术开始10 min(T2),手术开始30 min(T3),手术开始60 min(T4)四个时间点的平均动脉压(MAP),心率(HR),血氧(Sp O2),脑电双频指数(BIS)。结果:T2、T3、T4时平均动脉压Ⅰ组与Ⅱ组比较P0.05,Ⅰ组与Ⅲ组比较P0.05。T2时Ⅲ组与Ⅰ、Ⅱ组比较P0.05,T3、T4时Ⅱ、Ⅲ组与Ⅰ组比较均P0.05。结论:右美托咪定靶控输注浓度为0.3μg/kg/h和0.4μg/kg/h时,对血管外科介入手术能产生良好的镇静作用,并且可保证术中循环的稳定。     

果蝇限制端粒转座子的分子机制

端粒是保护线性染色体末端的核酸-蛋白复合物。与常见的真核生物短重复序列组成的端粒不同,黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)端粒DNA由反转座子组成,其转座行为被果蝇宿主严格限制在端粒,既实现延长端粒的功能,也减少转座子跳跃对基因组的损伤。但果蝇宿主是如何完成如此精确调控的机制尚不明确。目前已知的全基因组范围抑制转座子表达包括H3K9me3参与的异染色质形成途径和piRNA路径,而近期研究发现果蝇端粒保护蛋白参与端粒反转座子的特异调控。本文主要综述了端粒保护蛋白在调控端粒转座子中的具体功能。对果蝇端粒转座子调控的研究有利于更好地理解宿主与转座子协同进化的分子机制。     

Bmi1过表达通过促进增殖、抑制凋亡纠正活性维生素D缺乏引起的骨量降低

摘要 目的：探索B淋巴瘤Mo-MLV插入区1（B cell-specific MLV integration site-1, Bmi-1）过表达能否通过促进增殖、抑制凋亡改善1,25-二羟基维生素D (1,25-dihydroxy vitamin d,1,25(OH) ₂D)缺乏引起的小鼠骨质骨量丢失。方法：取8月龄Bmi-1 ^Tg 、Bmi1 ^Tg 1α(OH)ase^+/-与 1α(OH)ase^+/-小鼠以及同窝野生型（wild type, WT）小鼠椎骨组织,通过流式细胞术及TUNEL染色检测间充质干细胞周期变化及凋亡水平,通过PCNA染色及免疫组织化学染色检测小鼠椎骨组织中Bcl-2、Caspase-3等指标的变化,通过Western blot检测小鼠椎骨中Caspase-3、CDK4、CDK6、OPN、OCN等蛋白表达量的差异,通过ALP染色检查成骨细胞骨形成水平。结果：在骨髓间充质干细胞中过表达Bmi1可以通过促进增殖,抑制凋亡、增加成骨细胞骨形成来纠正1α(OH)ase^+/-小鼠的骨量降低。结论：Bmi1是1,25(OH) ₂D的关键下游靶点,在防止1,25(OH) ₂D缺乏引起的骨丢失方面起着至关重要的作用。     

禽传染性支气管炎病毒Nsp2蛋白与宿主蛋白eIF2α的互作鉴定

Nsp2蛋白是冠状病毒的非结构蛋白,在病毒早期感染中具有重要作用。【目的】为初步筛选可能与禽传染性支气管炎病毒(avian infectious bronchitis virus,IBV) Nsp2蛋白互作的宿主蛋白,鉴定Nsp2蛋白与真核翻译起始因子2α亚基(eIF2α)的相互作用。【方法】以pCAGGs-Flag-Nsp2和pCAGGs-Flag载体转染后的鸡胚肾(CEK)细胞为研究对象,利用免疫共沉淀(Co-IP)和液相色谱-串联质谱(LC⁃MS/MS)技术筛选出可能与IBV Nsp2蛋白发生互作的宿主蛋白eIF2α,通过免疫共沉淀和间接免疫荧光试验进一步验证二者相互作用。【结果】经免疫共沉淀与质谱分析后筛选到97个可能与Nsp2蛋白互作的宿主蛋白,其中宿主抗病毒反应的关键蛋白eIF2α与Nsp2蛋白的相互作用通过免疫共沉淀和间接免疫荧光试验,表明二者存在直接互作关系,并共定位于细胞质中;此外,Nsp2蛋白表达和IBV感染都能显著提高宿主内源性eIF2α的转录水平。【结论】利用免疫共沉淀联合质谱技术筛选到CEK细胞中存在的97种可能与IBV Nsp2互作的候选蛋白,利用免疫共沉淀与间接免疫荧光证明候选蛋白eIF2α与Nsp2蛋白在细胞质中存在直接互作,同时发现Nsp2蛋白过表达和IBV感染会导致CEK细胞内eIF2α的转录水平显著增强。本研究为进一步探索冠状病毒非结构蛋白Nsp2的生物学功能奠定了基础,并提供了IBV入侵宿主时Nsp2蛋白的作用机制研究的新线索。     

木丹颗粒联合羟苯磺酸钙胶囊对糖尿病周围神经病变患者神经传导速度、血液流变学和氧化应激的影响

摘要 目的：探讨木丹颗粒联合羟苯磺酸钙胶囊对糖尿病周围神经病变（DPN）患者神经传导速度、血液流变学和氧化应激的影响。方法：选取2018年9月~2020年8月期间我院收治的120例DPN患者。按照随机数字表法分为观察组（60例,木丹颗粒联合羟苯磺酸钙胶囊治疗）和对照组（60例,羟苯磺酸钙胶囊治疗）,均治疗8周。对比两组疗效、神经传导速度、血液流变学和氧化应激,记录两组不良反应发生情况。结果：观察组的临床总有效率高于对照组（P<0.05）。观察组治疗后正中神经、腓总神经的运动传导速度（MNCV）和感觉传导速度（SNCV）均较治疗前升高,且高于对照组（P<0.05）。两组治疗后全血低切黏度、全血高切黏度、纤维蛋白原、血浆黏度均较治疗前降低,且观察组低于对照组（P<0.05）。两组治疗后丙二醛（MDA）较治疗前降低,超氧化物歧化酶（SOD）较治疗前升高（P<0.05）,且观察组MDA较对照组低,SOD较对照组高（P<0.05）。两组不良反应发生率对比无明显差异（P>0.05）。结论：木丹颗粒联合羟苯磺酸钙胶囊治疗DPN患者疗效确切,可提高患者神经传导速度和抗氧化应激能力,改善血液流变学状态,安全可靠。     

HPLC法同时测定酱腌菜中常用防腐剂和甜味剂的研究

目的：建立一种高效液相色谱法同时测定酱腌菜中苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、糖精钠和安赛蜜的分析方法。方法：样品经超声提取,沉淀蛋白,高速离心后,过0.22 μm微孔滤膜,上机测定。流动相为甲醇和20 mmol/L乙酸铵溶液,等度洗脱,经ZORBAX SB-C18色谱柱分离,于230 nm波长下紫外检测器检测。结果：5种添加剂在15 min内能很好的分离,浓度在1.00~150 mg/L范围内线性很好（R2>99.99%）;平均加标回收率为83.0%~99.9%,精密度为0.06%~5.47%;方法的检出限（S/N=3）和定量限（S/N=10）分别为0.221~1.15 mg/kg、0.736~3.82 mg/kg;方法间比对数据结果呈现高度一致性。结论：该方法简单易操作,准确可靠,能够满足酱腌菜中常用防腐剂和甜味剂的检验需要。     

舒芬太尼复合吗啡硬膜外术后镇痛的最佳剂量配伍

目的：观察腹式子宫全切术后硬膜外镇痛应用舒芬太尼复合吗啡时两种药物不同剂量的镇痛效果和不良反应,以寻找其最佳剂量配伍。方法：选择90例美国麻醉医师协会（ASA）标准Ⅰ-Ⅱ级、年龄20-60岁拟行腹式子宫全切术的病人,均实施腰硬联合麻醉。随机分成3组,每组30例：Ⅰ组：舒芬太尼10μg＋吗啡2 mg＋氟哌利多1 mg＋1%罗哌卡因20 mg;Ⅱ组：舒芬太尼15μg＋吗啡1.5 mg＋氟哌利多1 mg＋1%罗哌卡因20 mg;Ⅲ组：舒芬太尼20μg＋吗啡1 mg＋氟哌利多1 mg＋1%罗哌卡因20mg。术中监测生命体征,记录术后24小时内的镇痛效果、不良反应及辅助镇痛药物的使用情况。镇痛效果评价采用视觉模拟评分（visual analogue scale,VAS）标准。结果：2组各个时间点VAS评分均明显低于1组（P〈0.05）,在术后6 h,8 h,12 h,18 h,24 h与3组有统计学差异（P〈0.05）,3组在2 h,4 h,6 h的VAS评分低于1组（P〈0.05）;2组恶心评分与3组相比明显较低（P〈0.05）,其他不良反应三组间没有统计学差异;各组患者在术后24h内辅助镇痛药物使用情况比较无统计学差异（P〉0.05）。结论：舒芬太尼15μg复合吗啡1.5 mg用于腹式子宫全切术后硬膜外镇痛效果优于其他常用剂量配伍,镇痛效果平稳确切且不良反应少,具有临床应用价值。