三株牛源亚洲1型口蹄疫病毒聊基因的克隆与序列分析

以3株国内分离的亚洲1型口蹄疫病毒（分别命名为F1、F2、F3）为研究目标,根据GenBank中注册的FMDV VP1基因的序列设计1对引物,采用RT-PCR方法成功地扩增出含有VP1全基因的片段,并测定了3个毒株VP1基因的序列。结果表明,3株亚洲1型FMDV毒株VP1基因长度均为633bp,编码211个氨基酸。3株毒株彼此之间的核苷酸序列同源性在82．8％～99．1％之间,雅导氨基酸序列同源性在89．1％～99．1％之间。从系统发生树看,F1株与我国香港2005年牛毒株序列同源性99．5％,属同一遗传谱系,F2株、F3株与2005年引起河北省万全县、北京市延庆县、甘肃静宁县疫情的毒株分属同一个基因群。     

双效表达载体的构建及其U6启动子的功能效率鉴定

利用pBudcE4.1双表达载体构建shRNA与蛋白共表达载体,为双效疫苗的研制提供新的研究思路.以含U6启动子的载体为模板,PCR扩增得到U6启动子,用其置换载体pBudcE4.1内的CMV启动子的核心部分构建shRNA与蛋白共表达载体.用干扰绿色荧光蛋白表达的方法鉴定重组载体中的U6启动子能否启动shRNA的表达.经PCR扩增、双酶切鉴定及DNA测序证明成功构建了载体pBudcE4.1-U6.用干扰载体pBudcE4.1-U6-eGFPshRNA与含eGFP的载体共转染293T细胞后,荧光显微镜观察显示eGFP的表达量下降;流式细胞仪检测细胞的转染效率降低.研究结果证明U6启动子正常发挥作用. 成功构建RNAi与蛋白共表达载体,为利用该载体研制动物双效疫苗奠定了基础.     

口蹄疫病毒外源序列插入位点的研究进展

伴随着对口蹄疫病毒(FMDV)蛋白结构功能的深入研究,发现FMDV能够表达外源基因片段。通过对FMDV的基因进行改造和修饰研究,进而实现了不同应用目的,如提高病毒滴度、引入标记、提高免疫应答、降低致病性等。文中主要从FMDV接受外源基因插入位点角度来介绍现阶段关于FMDV表达外源基因相关进展。     

天门冬多糖对人工感染鸡传染性支气管炎的治疗试验

旨在评价复方天门冬多糖注射液对鸡传染性支气管炎的临床治疗效果,为鸡传染性支气管炎临床治疗提供依据。以复方天门冬多糖注射液临床给药剂量筛选试验为基础,分别设置高剂量组、中剂量组、低剂量组、药物对照组、阳性对照组及空白对照组,运用t检验和方差分析法对攻毒前后试验动物的相对体质量及试验结束后免疫器官指数进行统计分析,通过比较各组数据的显著性差异来评价复方天门冬多糖注射液对鸡传染性支气管炎的治疗效果。结果显示,复方天门冬多糖注射液能提高发病鸡的相对增量率,并促进发病鸡的生长发育。说明,复方天门冬多糖注射液对患病鸡的临床治疗效果显著,在实际生产中可以推广应用。     

Asia 1型口蹄疫病毒抗原表位突变株的构建及其生物学特性分析

为了研制口蹄疫抗原表位突变标记疫苗,本研究以含有Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)c DNA全长的感染性克隆p Asia 1-FMDV作为骨架,将3D蛋白中第27位氨基酸的H和31位的氨基酸N分别突变成Y和R,从而突变3D蛋白的一个抗原表位,将构建的带有突变表位的重组质粒转染BHK-21细胞,成功拯救出一株突变FMDV。经比较后发现,重组病毒的生物学特性与亲本毒株相似。病毒中和试验结果显示,抗重组病毒的血清与亲本病毒有良好的反应性。Western blotting结果表明重组病毒诱导的抗体能与突变的表位合成肽反应而不与野生型病毒的表位合成肽发生反应,从而区分重组病毒与亲本病毒。综上所述,这株抗原表位突变FMDV有望作为口蹄疫标记疫苗候株进一步评估。     

产后子宫内膜炎与围生期解脲脲原体感染有关

为了探讨围生期支原体感染与产后子宫内膜炎的关系及治疗,本研究选取产后子宫内膜炎患者73例作为观察组,同时选取正常产妇80例作为对照组。通过检测两组解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)感染情况,同时给予观察组常规治疗,本研究发现观察组Uu阳性比例为32.88%,明显高于对照组(p<0.05);观察组和对照组Mh阳性差异比较无统计学意义(p>0.05);观察组Uu阳性和Mh阳性产妇发生早产或胎膜早破的比例分别为62.50%和25.00%,明显高于支原体感染阴性产妇(p<0.05);观察组Uu阳性、Mh阳性和阴性患者治疗效果比较差异无统计学意义(p>0.05);观察组治疗后Uu阳性率为10.96%,明显较治疗前降低(p<0.05);观察组治疗前后Mh阳性率比较差异不显著(p>0.05)。本研究表明,Uu感染与产后子宫内膜炎发生有一定关系,围生期应加强Uu感染筛查,并及时进行治疗。     

空肠弯曲菌生物学特性上的一些歧异

对195例不同年龄腹泻患者的粪便、690只健康和腹泻畜禽的直肠和泄殖腔拭子及108份腹泻死亡畜禽的脏器材料进行了空肠弯曲菌培养,共分离鉴定458株弯曲菌(其中空肠弯曲菌445株、结肠弯曲菌13株),就其一些生物学特性进行了观察,采用Lior生物学分型法进行了354株弯曲菌(空肠弯曲菌352株、结肠弯曲菌2株)的分型。虽然表明绝大多数生物学性状符合已有文献描述,但也发现在形态、培养和生理生化特性及抗菌药抗性上存有一些歧异,其中最为主要的是483%(215/445)的空肠弯曲菌和231%(3/13)的结肠弯曲菌有萘啶酮酸抗性,11%(5/445)的空肠弯曲菌和76%(1/13)的结肠弯曲菌有噻孢霉素抗性,抗菌药抗性与菌株来源有关(P<0005)。352株空肠弯曲菌生物学分型结果表明在这些动物体内生物型Ⅰ(409%)和Ⅱ(582%)占优势,同一动物体内可有该菌的2个生物型分布。     

SPF鸡盲肠复合微生态制剂代替抗生素预防肉仔鸡沙门茵感染

目的在雏鸡盲肠尽快建立完整健康菌群,通过“竞争排除（Competitiveexclusion,CE）”抑制病原菌定植感染。方法提取SPF鸡盲肠菌群,排除沙门菌感染的可能,制成复合微生态制剂,在鸡胚孵化19d啄壳时和21d雏鸡全出壳时进行两次喷雾接种,监测鸡群沙门菌抗体和粪便中沙门菌,测定成活率、生产性能。结果进行喷雾接种后的小鸡至12日龄可以完全不使用抗生素,成活率、采食量与体重略高于使用抗生素的对照组,能提高饲料报酬,饲养12、24、35d均未检出粪便沙门菌和血液沙门菌抗体,全程无沙门菌感染。结论SPF鸡盲肠复合微生态制剂能代替抗生素预防肉仔鸡沙门菌感染。     

弓形虫膜表面抗原SAG2蛋白的高效表达及免疫活性分析

在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达弓形虫膜表面抗原SAG2蛋白,并对其免疫活性进行分析。应用PCR技术从刚地弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码SAG2的基因片段,亚克隆至原核表达载体pET32a(+),在大肠埃希菌(E.coli)BL21内表达,并对其表达条件进行优化,Western blotting和ELISA分析纯化蛋白的免疫原性;纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多抗,用间接免疫荧光试验(IFA)分析表达蛋白的免疫反应性。成功构建重组质粒pET32a(+)-tSAG2,所表达的融合蛋白大小约为38kD。在IPTG终浓度为0.1mmol/L、诱导时间4-6h和培养温度32℃条件下,重组SAG2蛋白主要以可溶性形式在大肠杆菌中高效表达,每升培养菌液约获得可溶性重组SAG2蛋白16mg。Western blotting及ELISA结果显示纯化蛋白具有良好的免疫原性。IFA显示重组蛋白的抗血清能够识别刚地弓形虫表面的SAG2天然蛋白,所表达蛋白具有良好的免疫反应性。截断的SAG2基因在大肠杆菌中得到了高效表达,重组蛋白保持了天然蛋白的免疫活性,为进一步利用该重组蛋白进行弓形虫病免疫诊断及基因工程亚单位疫苗的研制奠定基础。     

猪源冠状病毒TGEV中国分离株纤突蛋白生物信息学分析

以猪源冠状病毒(Porcine coronavirus) TGEV 纤突蛋白基因序列为基础,利用生物软件对TGEV中国分离株纤突蛋白进行N-糖基化位点、跨膜螺旋、进化树、二级结构及抗原位点的预测和分析.结果显示所有TGEV毒株可分为3个基因型,4株中国分离株分别归属于以上3个基因型,属于Ⅰ型的中国株TSX在跨膜螺旋的氨基酸及二级结构上与其他中国株有明显的差异,而同属于Ⅲ型中国毒株SC-Y和TH- 98在跨膜螺旋的氨基酸及二级结构上非常接近,而所有中国分离株抗原表位没有明显差别,表明TGEV在中国没有显著的变异.