oHSV1-GFP法检测肝癌循环肿瘤细胞

目的循环肿瘤细胞在肿瘤转移诊断、个体化治疗/疗效评估及肿瘤转移机制研究等方面具有重要价值,然而由于其在循环系统中比例极低,循环肿瘤细胞的分离和鉴定成为临床应用的难点。oHSV1-GFP是一种经过基因修饰的人单纯疱疹病毒。我们将该病毒的复制关键基因ICP4的启动子替换为人端粒酶逆转录酶的启动子,并在ICP4下游连接GFP表达盒,以使该病毒在感染细胞后,能在端粒酶逆转录酶转录环境的作用下激活下游绿色荧光蛋白的表达基因。本研究旨在利用该病毒捕获循环肿瘤细胞,从而建立一种简便重复性好灵敏度高的检测方法,并对该检测方法的可靠性及临床应用价值进行探讨。方法 Western blot技术检测肿瘤细胞系、肿瘤组织及正常细胞中端粒酶逆转录酶表达情况;抽取正常健康人外周血4ml,将肿瘤细胞系分别按一定梯度加到外周血中,按照MOI=1比例转染重组病毒oHSV1-GFP DNA,流式细胞仪检测CD45-/GFP+细胞数,进行该方法检出率的测定;收集临床标本外周血4ml,裂解去除红细胞后,按照MOI=1比例转染重组病毒oHSV1-GFP DNA,24h后收集细胞,流式细胞仪检测CD45-/GFP+细胞并计数,初步检测该方法临床应用的可行性。结果 Western blot检测结果显示肿瘤细胞系及肿瘤组织呈现端粒酶逆转录酶高表达状态,而正常细胞中端粒酶逆转录酶表达量低。在该检测方法中,我们将CD45-/GFP+细胞定义为循环肿瘤细胞。检出率测定结果显示:外周血中加入SMMC7721细胞10,50,100(个)的检出数分别为6.8±2.04,40.8±4.04,85.9±7.03,总体检出率为87.9%,外周血中加入Huh7细胞10,50,100(个)的检出数分别为6.6±1.90,39.8±3.88,86.4±7.63,总体检出率为88.5%。线性回归分析显示该方法捕获的细胞数与实际肿瘤细胞数呈明显相关性,r20.95。应用该方法检测26例肝癌患者及50例正常健康人外周血显示,肝癌患者外周血中CD45-/GFP+的细胞数(16.7±2.77)明显高于正常健康人(0.94±0.12)P0.0001,亚组分析显示区域淋巴结阳性的患者外周血中循环肿瘤细胞计数(23.77±4.49)明显高于区域淋巴结(9.76±1.87)的患者,P=0.0002。结论本研究建立了一种新型循环肿瘤细胞检测方法,并对该方法的可靠性及临床应用价值进行了评估。该方法能够特异性示踪循环肿瘤细胞,具有潜在临床应用价值。     

经会阴三维超声评价不同分娩方式初产妇肛门括约肌复合体和盆膈裂孔的临床应用价值

摘要 目的：探讨经会阴三维超声在不同分娩方式初产妇肛门括约肌复合体（ASC）和盆膈裂孔（PH）影响的评估价值。方法：选择2017年1月～2019年12月我院进行分娩的初产妇150例,按照分娩方式分成阴道分娩组71例,剖宫产组79例,比较两组基线资料。对所有受试者均实施经会阴三维超声检查,比较两组缩肛动作下肛门内括约肌（IAS）远端、中端及远端平面厚度,肛门外括约肌（EAS）远端平面及耻骨直肠肌（PRM）中端平面厚度,分娩前、产后6周、产后3个月PH左右径、PH前后径以及PH面积。结果：两组孕妇年龄、孕周及体质指数比较无差异（P＞0.05）,阴道分娩组IAS近端6点钟方向、12点钟方向平面厚度以及IAS中端、12点钟方向平面厚度均小于剖宫产组（P＜0.05）。阴道分娩组EAS远端12点钟方向平面厚度小于剖宫产组（P＜0.05）。阴道分娩组产后6周的PH左右径大于剖宫产组（P＜0.05）。阴道分娩组产后6周的PH前后径大于剖宫产组（P＜0.05）。阴道分娩组产后6周的pH面积大于剖宫产组（P＜0.05）。结论：经会阴三维超声可有效评估初产妇ASC和PH的影响情况,分娩会对初产妇ASC和PH产生影响,阴道分娩的初产妇产后存在明显的ASC厚度减小和PH增大现象。     

结肠炎相关结肠癌分泌蛋白质体外富集方法的建立

目的:建立小鼠结肠炎相关结肠癌分泌蛋白质体外富集的方法;方法:利用结肠炎相关结肠癌小鼠模型,取不同阶段实验小鼠的结肠体外培养48h,收集分泌蛋白质。使用SDS-PAGE分离分析分泌蛋白质,并通过Western blot检测分泌蛋白质是否存在胞浆蛋白或者核蛋白的污染。结果:在实验条件下收集得到的分泌蛋白重现性好,分泌蛋白中核蛋白和胞浆蛋白的污染较少,且能够明显分辨与病程相关差异表达蛋白质条带。结论:成功建立了结肠炎相关结肠癌分泌蛋白质的体外富集方法。