采自祁连山的冷杉侧耳生物学特性及栽培条件探索

以采自甘肃省祁连山国家级自然保护区菌物保育区的野生侧耳作为试验材料,通过形态学及系统发育分析方法将其鉴定为冷杉侧耳Pleurotus abieticola。对该菌株生物学特性及栽培条件进行初步研究,结果表明：菌丝体最适生长温度为25℃;最适pH为7.0;最适碳源为玉米粉;最适氮源为豆粉;在以棉籽壳、木屑和麸皮为栽培料时,可获得子实体。     

饥饿对小规格斑点叉尾鮰体重及鱼体生化组成的影响

将180尾初始体重为（41.9 ± 0.5）g的斑点叉尾鮰放养于18个室内容积为300L的水族箱中进行饥饿处理12周,每箱放10尾,每2周取样一次,研究长期饥饿胁迫下斑点叉尾鮰生长和鱼体生化组成的变化,尤其是肌肉氨基酸和脂肪酸组成的变化。实验结果表明：斑点叉尾鮰的体重、肥满度、脏体比、肝体比和脂体比随着饥饿时间的延长显著降低（p < 0.05）;饥饿过程中全鱼的蛋白质、脂肪含量显著下降（p < 0.05）,水分含量显著增加（p< 0.05）,而灰分含量变化不大;肌肉中蛋白质含量前6周变化不显著（p > 0.05）,而6周后显著降低（p < 0.05）,脂肪、糖原和灰分含量随着饥饿时间的延长显著降低（p < 0.05）,水分含量显著增加（p < 0.05）;肝脏中的蛋白质和水分含量随饥饿时间的延长显著上升（p < 0.05）,粗脂肪和糖原的含量则显著下降（p < 0.05）;在12周的饥饿时间内,总的必需氨基酸所占的百分比变化不显著（p > 0.05）,而总的必需氨基酸和总的非必需氨基酸的比值显著增加（p < 0.05）;斑点叉尾鮰肌肉中总饱和脂肪酸、总单不饱和脂肪酸和n-6 系列脂肪酸的百分含量显著下降（p < 0.05）,而总的n-3系列脂肪酸含量显著增加（p < 0.05）。n-3/n-6脂肪酸的比值随饥饿时间的延长而显著升高（p < 0.05）。以上结果说明：斑点叉尾鮰在饥饿条件下优先动用机体的贮存性物质（脂肪和糖原）作为能源的供给物,而后才被迫动用组织或器官中的功能性物质蛋白质;长期饥饿胁迫下斑点叉尾鮰优先保留必需氨基酸及EPA、DHA等高度不饱和脂肪酸。     

棉籽粕和菜籽粕替代部分鱼粉对黄颡鱼肉质及肌肉发育相关基因表达的影响

文章旨在研究菜籽粕与棉籽粕复合替代饲料鱼粉对黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)肌肉品质及肌纤维发育相关基因表达的影响。实验设计了5组等氮等能的饲料,以含鱼粉25%的处理组为对照饲料(FM),以菜籽粕与棉籽粕3﹕2混合后分别替代其中的10%、20%、30%和40%鱼粉,设置了RM10、RM20、RM30和RM40四个试验组。使用初始体质量为(2.38±0.10) g的黄颡鱼幼鱼,分别用上述5种饲料饲喂10周。试验表明,与对照组相比,菜粕棉粕混合替代水平达到20%及以上时黄颡鱼肌肉中的粗蛋白与粗脂肪显著降低,而水分和灰分则无显著差异;肌肉中的羟脯氨酸含量呈现下降的趋势;肌纤维中直径≥50μm的纤维数量随着替代水平达到20%后不断减小,而≤20μm的纤维数量则呈现上升趋势;植物蛋白源的替代也会对黄颡鱼的肌肉质构产生一定的影响。此外,肌肉纤维发育相关基因myod、myog和mrf4的mRNA水平随着替代水平上升而逐渐升高,而myf5与mstn的基因表达在各组间无显著差异。TOR通路相关基因中的akt、tor和s6k1等基因随着替代水平升高而下降, 4e-bp1则随着替代水...     

黄颡鱼Wnt家族4个基因的克隆、组织表达及对铜的响应

为探究Wnt家族成员在黄颡鱼卵巢发育中的作用, 研究首先采用RT-PCR和RACE技术获取了黄颡鱼Wnt5a、Wnt5b、Wnt7a和Wnt9b基因的全长cDNA序列, 即1984、2905、2158和1622 bp, 其中ORF长度分别为1124、1124、1049和1073 bp, 编码375、375、350和358个氨基酸。氨基酸序列比对和系统树分析显示, 这些基因十分保守, 黄颡鱼WNT与墨西哥丽脂鲤和斑马鱼比较接近。组织表达分析表明, 这些基因的mRNA在脑、脾脏、肾脏、鳃、心脏、肌肉、脂肪、肝脏及卵巢等组织中都有表达, 但表达水平不尽相同。Wnt家族基因对铜的响应研究表明: 在暴露28d时, Wnt7a mRNA水平随着铜浓度先上升后下降, 但是Wnt5a、Wnt5b和Wnt9b基因表达各个处理组无显著性差异; 在56d, Wnt5b在60 μg Cu/L组最低, 其他2个组差异不显著, Wnt9b mRNA水平随着铜浓度先上升后下降, 但是Wnt5a和Wnt7a基因表达各个处理组无显著性差异, 表明Wnt家族这些基因的功能发生了分化, 部分成员介导了铜影响黄颡鱼卵巢发育的调控。研究首次揭示了黄颡鱼Wnt家族部分成员的基因结构和功能, 为深入探讨他们在卵巢发育中的作用奠定了基础。     

发酵菜籽粕对黄颡鱼表观消化率、肝脏及肠道健康的影响

为探究发酵菜籽粕对黄颡鱼的饲料表观消化率、肝脏及肠道健康的影响,实验以黄颡鱼(Tachysurus fulvidraco)为研究对象,共设置3组饲料,分别为对照组(Control)、未发酵菜籽粕组(URSM)和发酵菜籽粕组(FRSM),养殖实验共持续7周。研究结果表明, FRSM组的增重率(WGR)显著高于USRM组(P<0.05),而饲料系数(FCR)和肝体比(HSI)显著低于URSM组(P<0.05)。与未发酵菜籽粕原料相比,黄颡鱼对发酵菜籽粕原料的干物质、粗蛋白、粗脂肪和能量的表观消化率均增加。肝脏组织结构结果表明, URSM组黄颡鱼肝细胞空泡化的相对面积显著高于对照组和FRSM组(P<0.05)。肠道组织结构及紧密连接相关基因试验结果表明, 3组间的黄颡鱼肠道绒毛宽度无显著性差异(P>0.05),而FRSM组黄颡鱼的绒毛长度和肠道zo-1和zo-2的mRNA表达水平显著高于URSM组(P<0.05)。炎症因子相关基因测定结果表明,与URSM组相比, FRSM组黄颡鱼肝脏tnf-α、tnf-β和il-1β的mRNA表达水平显著下调,肠道tnf-α和i...     

小球藻替代鱼粉对鲫生长、体组成、肝脏脂肪代谢及其组织学的影响

设计了5组等氮(粗蛋白约38%)的饲料, 饲料中小球藻的添加量分别为0(对照)、17%、34%、51%和68%, 替代0(对照组)、21.8%、43.6%、65.5%和87.3%的鱼粉, 探讨小球藻替代鱼粉对初始体重为(5.540.08) g的鲫幼鱼生长、体组成、肝脏组织学及脂肪代谢相关酶活性的影响, 实验期为8周。实验结果表明: 随着小球藻替代鱼粉水平的增加, 鲫的增重率呈现先增加后下降的趋势; 与此相反, 饲料系数呈现先下降后增加的趋势。随着小球藻替代比例的增加, 肝体比和脏体比有增大的趋势, 而各个处理组肠脂比差异不显著。小球藻替代鱼粉使鲫肌肉和肝脏的蛋白含量降低, 而肝脏的脂肪含量随着替代比例的增加先上升后下降。当饲料中小球藻替代鱼粉的水平从0增加到65.5%, 肝脏生脂酶如G6PD、ME和FAS酶的活性显著增加, 而当饲料小球藻替代水平更进一步增加到87.3%, 肝脏生脂酶如G6PD、ME和FAS酶的活性下降。各个处理组6PGD酶活性没有显著差异。小球藻替代鱼粉对鲫的肝脏组织结构产生不利影响, 替代组的肝细胞体积有所增大, 部分肝细胞出现细胞核溶解、核消失、肝细胞坏死。以增重率和饲料系数为因变量进行二次线性回归分析, 表明小球藻对鱼粉的最适替代比例分别为47.14%和49.88%。       

黄颡鱼自噬相关基因 LC3B和Beclin1的原核表达及多克隆抗体制备

为深入研究黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco自噬的发生过程和机制, 从黄颡鱼cDNA中克隆获得372和1344 bp的黄颡鱼LC3B(PfLC3B)和Beclin1(PfBeclin1)基因编码序列, 并成功构建了pET32a(+)-PfLC3B和pET32a(+)-PfBeclin1重组表达载体, 分别采用亲和层析和包涵体纯化的方法得到了纯度较高的重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白; 以重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白免疫Balb/C小鼠, 制备多克隆抗体。通过Western blot鉴定了PfLC3B和PfBeclin1抗血清可以分别特异性识别重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白; PfLC3B抗血清可以特异性识别黄颡鱼内源性LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白, PfBeclin1抗血清可以特异性识别黄颡鱼内源性Beclin1蛋白。蛋白水平的组织分布显示, 黄颡鱼LC3和Beclin1蛋白在肝脏中表达水平均较高, 在肾脏和脾脏中的表达水平较低。综上所述, 研究成功制备了黄颡鱼LC3B和Beclin1的多克隆抗体, 为深入研究黄颡鱼自噬机制提供了有力工具。     

环境相关四环素长期暴露对吉富罗非鱼生长性能、肝脏脂肪代谢和抗氧化反应的影响

为研究水环境浓度四环素(Tetracycline, TC)长期暴露对鱼类的影响, 实验以吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)为实验模型, 将其暴露于0、400和800 ng/L三种四环素水平下10周。结果表明, 相较于对照组, 四环素暴露显著提高了生长性能, 但增加了肝脏中甘油三酯含量和四环素浓度。脂肪生成基因表达(fas、scd、accα、srebp1和pparγ)被上调, 但降低了与脂肪分解相关基因的表达(atgl、hsl、cpt1和pparα)。此外, 6-磷酸葡萄糖脱氢酶(6PGD)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、异柠檬酸脱氢酶(ICDH)、苹果酸脱氢酶(ME)及脂肪酸合成酶(FAS)的活性显著增加, 但肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)活性则被显著抑制, 这与基因表达相一致。而且, 四环素暴露显著降低过氧化氢酶、总超氧化物歧化酶的活性及总抗氧化能力, 并诱导了鱼类的氧化应激, 导致丙二醛水平显著增加。因此, 与环境相关四环素浓度可促进吉富罗非鱼的生长性能、上调产脂代谢、降低抗氧化能力并诱导脂质过氧化。     

黄颡鱼Cu稳态相关基因ccs和cox17的原核表达及多克隆抗体制备

为深入研究黄颡鱼Tachysurus fulvidraco Cu稳态调控机制,从黄颡鱼cDNA中克隆获得了810和192 bp的ccs (Pfccs)和cox17 (Pfcox17)基因编码序列,并成功构建了p ET32a(+)-Pfccs和p ET32a(+)-Pfcox17重组表达载体;转化重组质粒到E. coli Rosetta (DE3)感受态细胞中,以IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)作为诱导剂诱导表达,通过SDS-PAGE鉴定重组蛋白表达,发现PfCCS蛋白主要在沉淀中表达, PfCOX17蛋白主要在上清中表达;分别采用包涵体和亲和层析纯化的方法得到了纯度较高的重组PfCCS和PfCOX17蛋白;以纯化得到的PfCCS和PfCOX17蛋白免疫Balb/C小鼠3次,制备多克隆抗体。通过Western Blot鉴定了PfCCS和PfCOX17抗血清可以分别特异性识别重组PfCCS和PfCOX17蛋白,也可以分别特异性识别黄颡鱼内源性CCS和COX17蛋白。通过Western Blot对黄颡鱼CCS和COX17蛋白在鳃、心脏和肝脏中的分布情况进行检测,发现黄颡鱼CCS和CO...