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为深入研究黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco自噬的发生过程和机制, 从黄颡鱼cDNA中克隆获得372和1344 bp的黄颡鱼LC3B(PfLC3B)和Beclin1(PfBeclin1)基因编码序列, 并成功构建了pET32a(+)-PfLC3B和pET32a(+)-PfBeclin1重组表达载体, 分别采用亲和层析和包涵体纯化的方法得到了纯度较高的重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白; 以重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白免疫Balb/C小鼠, 制备多克隆抗体。通过Western blot鉴定了PfLC3B和PfBeclin1抗血清可以分别特异性识别重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白; PfLC3B抗血清可以特异性识别黄颡鱼内源性LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白, PfBeclin1抗血清可以特异性识别黄颡鱼内源性Beclin1蛋白。蛋白水平的组织分布显示, 黄颡鱼LC3和Beclin1蛋白在肝脏中表达水平均较高, 在肾脏和脾脏中的表达水平较低。综上所述, 研究成功制备了黄颡鱼LC3B和Beclin1的多克隆抗体, 为深入研究黄颡鱼自噬机制提供了有力工具。 相似文献
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为研究水环境浓度四环素(Tetracycline, TC)长期暴露对鱼类的影响, 实验以吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)为实验模型, 将其暴露于0、400和800 ng/L三种四环素水平下10周。结果表明, 相较于对照组, 四环素暴露显著提高了生长性能, 但增加了肝脏中甘油三酯含量和四环素浓度。脂肪生成基因表达(fas、scd、accα、srebp1和pparγ)被上调, 但降低了与脂肪分解相关基因的表达(atgl、hsl、cpt1和pparα)。此外, 6-磷酸葡萄糖脱氢酶(6PGD)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、异柠檬酸脱氢酶(ICDH)、苹果酸脱氢酶(ME)及脂肪酸合成酶(FAS)的活性显著增加, 但肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)活性则被显著抑制, 这与基因表达相一致。而且, 四环素暴露显著降低过氧化氢酶、总超氧化物歧化酶的活性及总抗氧化能力, 并诱导了鱼类的氧化应激, 导致丙二醛水平显著增加。因此, 与环境相关四环素浓度可促进吉富罗非鱼的生长性能、上调产脂代谢、降低抗氧化能力并诱导脂质过氧化。 相似文献
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为深入研究黄颡鱼Tachysurus fulvidraco Cu稳态调控机制,从黄颡鱼cDNA中克隆获得了810和192 bp的ccs (Pfccs)和cox17 (Pfcox17)基因编码序列,并成功构建了p ET32a(+)-Pfccs和p ET32a(+)-Pfcox17重组表达载体;转化重组质粒到E. coli Rosetta (DE3)感受态细胞中,以IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)作为诱导剂诱导表达,通过SDS-PAGE鉴定重组蛋白表达,发现PfCCS蛋白主要在沉淀中表达, PfCOX17蛋白主要在上清中表达;分别采用包涵体和亲和层析纯化的方法得到了纯度较高的重组PfCCS和PfCOX17蛋白;以纯化得到的PfCCS和PfCOX17蛋白免疫Balb/C小鼠3次,制备多克隆抗体。通过Western Blot鉴定了PfCCS和PfCOX17抗血清可以分别特异性识别重组PfCCS和PfCOX17蛋白,也可以分别特异性识别黄颡鱼内源性CCS和COX17蛋白。通过Western Blot对黄颡鱼CCS和COX17蛋白在鳃、心脏和肝脏中的分布情况进行检测,发现黄颡鱼CCS和CO... 相似文献
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