豫医无毛小鼠分离近交系的建立及其遗传纯度测定

采用强迫杂合性史妹酱方式培育携带无毛突变基因的分离近交系,然后用生化标记法,皮肤移植实验和毛色基因测试法对其进行遗传监测。并对其基本生物学特性进行了研究。结果育成了具有独特生物学特性的豫医无毛小鼠分离近交系,现已达30代,生化标记法测定的9条染色体上13个生化标记位点全部纯合;同系异体间皮肤移植100天后,未见排斥现象,为同系组织遗传性;与DBA/2交配进行的毛色基因测试,杂交的F1代相同,全部为野生色,基因型为AABBccDD ,表明豫医无毛小鼠已成为一个达到国际标准的新品系。     

昆明种小鼠脱毛性状的遗传分析

脱毛性状遗传分析证实,无毛小鼠和正常昆明小鼠交配所生的Ｆ１子代呈正常有毛状态,在Ｆ２代中,有毛小鼠与表现无毛小鼠的分离比率为３：１,回交子代中昆明有毛小鼠与表现无毛小鼠的比例是１：１。结果表明昆明种小鼠脱毛性状属单一隐性遗传,由常染色体上一个隐性基因控制。     

豫医无毛小鼠皮肤透射电镜观察

采用透射电镜技术对12～28日龄豫医无毛小鼠(YYHL)背部皮肤超微结构进行了观察.结果 发现:12日龄时,无毛小鼠皮肤毛囊上皮细胞簇集成团,占据毛球的位置;14日龄时,毛囊上皮细胞出现不同程度的凋亡形态学改变,核染色质凝聚呈"新月形"或形成圆形或椭圆形的凋亡小体;18日龄时,毛囊上皮细胞胞核部分区域退变形成大小不一的类似脂滴的空泡;21日龄时,毛囊上皮细胞退变消失,角化成纤维样的物质;到28日龄时,毛囊上皮细胞完全退变成空洞样结构.由此推断,无毛基因的突变诱发了豫医无毛小鼠皮肤毛囊上皮细胞的凋亡,从而引起小鼠的脱发.     

无毛小鼠不同年龄皮肤结构的比较研究

采用组织学方法对１月龄、２月龄、老龄豫医无毛小鼠皮肤结构进行了比较,结果发现,各年龄段表皮均有一层角化过度的角质层,毛干消失,毛球结构不正常,毛囊被一些角化物质充填。但真皮层差别很大。１月龄皮肤为肉色偏红,切片可见表皮层较厚,真皮内没有包囊;２月龄皮肤为肉色,表皮层较１月龄薄,毛囊腔大,真皮深层及皮下组织内有一些大小不等的包囊;老龄鼠皮肤为淡黄色,头部和体侧形成特别皱纹和褶痕,皮肤脆性大,易撕裂,表皮层薄,角化严重,真皮层被包囊扩张。包囊直径约为２月龄的４倍,内含一些角化物和脂肪样物质     

SD大鼠皮肤组织病理学观察

目的观察不同日龄SD大鼠皮肤组织学结构。方法10％甲醛固定,行石蜡切片,HE染色。结果新生大鼠皮肤较薄,透明层缺乏,皮脂腺发育良好。6月龄时表皮、真皮和皮下组织明显增厚,毛囊增粗,生长旺盛,毛囊深入皮下脂肪层。24月龄时,大鼠皮脂腺及汗腺萎缩,表皮变薄,真皮成纤维细胞、血管数量减少,弹力纤维变细。结论不同日龄SD大鼠皮肤组织学结构有差异。     

急性肺水肿动物模型复制

目的—探讨氯化氨诱发大鼠肺水肿动物模型效果和机理。方法—将实验大鼠随机分为对照组、氯化氨组,腹腔注射方法注入6%氯化氨(♀:6~8 ml/kg,♂:9~12 ml/kg),观察动物的一般情况、肺系数计算及病理切片,确定建立大鼠肺水肿动物模型。结果—氯化铵能引起大鼠肺水肿,其临床表现有明显特点。结论—氯化铵诱发的肺水肿模型,临床症状典型,方法简单,经济易行且重复性好,能为教学、临床、科研提供较为理想的动物模型。     

昆明小鼠无毛基因cDNA全长序列的分子克隆

无毛基因是与皮肤和被毛结构有重要关联的核受体基因,编码一个锌指结构转录因子,是甲状腺激素受体的转录辅阻遏物,并参与毛发生长周期的调控,在维持毛囊及毛囊间上皮的增殖、分化、调亡的精致平衡中扮演重要角色。参考小鼠、人的无毛基因序列,用RT-PCR方法首次对昆明小鼠无毛基因的cDNA序列进行了克隆,获得了昆明小鼠无毛基因的全长4 014 bp cDNA序列（GenBank 登录号：AY547391）,基因的CDS长度为3 546 bp。AY547391基因编码的蛋白质在GenBank中的序号为AAT45233,由1181个氨基酸组成。昆明小鼠与国外报导的小鼠、大鼠、猪、羊、猴、人等6种动物CDS 序列同源性分别为99.9%、94.4%、83.1%、78.1%、81.9%、82.1%,氨基酸同源性分别是99.9%、92.2%、81.7%、 70.8%、 79.9%、 80.1% 。这一结果反应了无毛基因在进化过程的高度保守性。通过Blast比较昆明小鼠无毛基因与GenBank 数据库中收集的Hr 基因的mRNA,发现了4个SNP和一个缺失突变,其中3个位点没有改变氨基酸残基的性质,两个位点有氨基酸改变并证实为多态性突变位点,研究结果为无毛基因的SNPs的数据库提供了新的信息。     

利用慢病毒载体快速建立表达外源基因的哺乳动物细胞系

建立稳定表达外源基因的哺乳动物细胞系是一项重要的生物技术,介绍了联合使用慢病毒载体和流式细胞仪分选技术来建立稳定表达绿色荧光蛋白的293T细胞系.结果表明,在1个月左右的时间里即可获得表达绿色荧光蛋白的293T细胞系,阳性细胞率高达96.5％,而且建立的细胞系能够稳定传代.因此,联合慢病毒载体和流式细胞仪分选技术的策略对于建立稳定表达外源基因的哺乳动物细胞系快捷和可靠.     

豫医无毛小鼠血液学常规指标的测定与分析

用血液学常规检查法豫医无毛小鼠血液学ＲＢＣ、ＷＢＣ、ＢＰＣ、Ｈｂ及白细胞分类进行了测定。结果表明,豫医无毛小鼠雌雄间血液学５项指标均显著性差异;     

豫医无毛小鼠分离近交系T细胞亚群和sIL-2R水平

为研究豫医无毛小鼠分离近交系细胞免疫功能,采用单抗致敏的红细胞花环法和双抗夹心ELISA法分别对2月龄、6月龄无毛小鼠及杂合子有毛小鼠T淋巴细胞亚群及可溶性白介素-2受体(sIL-2R)水平进行体外测定,结果表明, 2月龄组无毛小鼠CD3、 CD4、 CD8 阳性T 细胞及CD4/CD8与有毛小鼠相比无显著性差异,sIL-2R水平无毛小鼠高于有毛小鼠,差异显著(P<0.05);6月龄组无毛小鼠与有毛小鼠相比,CD4无显著性差异,CD3、 CD4/CD8高于有毛小鼠,CD8 、sIL-2R低于有毛小鼠,差异显著(P<0.05).提示了豫医无毛小鼠分离近交系两种基因型小鼠细胞免疫功能有一定差异.