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目前,双歧杆菌的转化是一个技术难题,与大肠杆菌等宿主菌的高转化效率不同,采用普通的原核质粒无法转化双歧杆菌.为此,本文提出双歧杆菌转化对质粒复制子具有"种属特异性"要求,并通过构建含有双歧杆菌特异复制子的新型穿梭质粒,以求解决这一难题.首先从GenBank获取长双歧杆菌隐性质粒pMB1的序列信息,采用Overlap-PCR方法获得其全长DNA,作为拟构建质粒的复制子;继而采用重组技术,将其与pMK4质粒片段(含大肠杆菌复制子pUC和抗氯霉素基因Cat)重组,构建大肠杆菌-双歧杆菌穿梭质粒;用电穿孔法将重组质粒转化双歧杆菌,通过观察不同电转参数下的转化效率,选择双歧杆菌转化的最佳条件.结果,成功获得全长1899bp的pMB1复制子并构建成功含有pMB1和pUC双复制子的原核重组质粒,经酶切和测序鉴定正确,命名为pCMB1.以重组质粒成功转化了长双歧杆菌NCC2705和NQ1501,而其它3种野生型双歧杆菌(包括1株长双歧杆菌)未能转化成功.结论:质粒中含有双歧杆菌种属特异的复制子是实现双歧杆菌转化的必要条件;即使是含有特异复制子的质粒也只能转化有限数量种型甚至有限数量种株的双歧杆菌;选择最佳电转化条件能显著提高转化效率. 相似文献
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烟草是耐镉富镉植物,降低烟叶镉含量对环境质量和人体健康具有重要意义.本文系统地从烟草镉的吸收转运分布规律、健康风险评价和消减技术3方面进行综述,系统分析了该领域的研究成果、现状和存在问题.阐述了烟草耐镉机制,分析了烟草吸收镉的影响因素,并总结了烟草镉分布的一般规律.从健康风险评估角度分析了制定烟草镉限量标准的重要性,根据大气镉呼吸限量和肠胃镉吸收限量,结合烟草镉限量建议计算公式,推导出了烟草镉限量建议值.最后,总结出一些简单有效的烟草镉消减技术,为低镉烟叶生产提供技术指导. 相似文献
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