抗人红细胞单链抗体与猪瘟E2蛋白双功能融合蛋白的构建及生物学活性检测

为构建具有凝集性、免疫反应性的双功能融合蛋白,本研究采用重叠延伸PCR方法将2E8ScFv(抗人红细胞H抗原单链抗体基因)和mE2(猪瘟病毒E2蛋白主要抗原编码区基因)拼接成融合基因2E8mE2,并插入原核表达载体pET-DsbA,将重组表达质粒pET-DsbA-2E8mE2转化入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)PlysS中进行IPTG诱导表达,表达的融合蛋白经SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定,结果表明:2E8mE2融合基因在大肠杆菌中获得了表达,表达产物以包涵体形式存在,分子量约为65kDa,与预期的大小一致。分别采用亲和层析法和谷胱甘肽再氧化法对融合蛋白进行纯化和复性,红细胞凝集试验证实:2E8mE2融合蛋白复性效果良好,既能够与人红细胞结合,又能够与猪瘟病毒抗体反应,具有双功能特性。     

猪源绿色气球菌的分离鉴定与药敏特性研究

目的鉴定研究2006年和2008年本实验室分别从广东清远和广西北流两个猪场发病小猪的膝关节积液中分离到2株呈四联状或成对排列,在山羊血琼脂平板上能形成明显的α-溶血圈的G+球菌。方法采用小白鼠致病性试验、细菌常规生理生化鉴定、药敏试验、耐药基因检测及16S rRNA序列分析等方法对上述分离的2株细菌进行鉴定及药敏特性研究。结果确定这2株G+球菌为正常情况下非致病性绿色气球菌(登录号分别为:GQ161096;GQ161097)。系统发育分析表明,两分离株与绿色气球菌15MS(登录号:EU075039.1)同源性分别高达99.4%和98.7%。药敏试验及耐药基因检测发现,这2株绿色气球菌除了对新霉素、氟哌酸、恩诺沙星、菌必治和环丙沙星等5种药物呈高敏外,对先锋V等13种抗菌素均不敏感。耐药基因检测结果表明,GXBL-1可检出6个耐药基因,GDQY-1则可检出多达10个耐药基因。结论从这2株分离株耐药谱检测结果可以看出,正常菌株同样携带多重耐药基因,存在着通过质粒转座子和整合子将耐药基因转移给敏感菌,导致耐药性传播的可能,应引起足够重视。     

猪瘟病毒石门株特异cDNA片段的扩增与序列分析

以猪瘟病毒感染细胞中提取的细胞总ＲＮＡ为模板,应用反转录─聚合酶链反应,在化学合成的两对特异引物引导下,成功地扩增出了两个石门株的ｃＤＮＡ片段。电泳证明它们的大小与预计的３４６ｂｐ和１２０ｂｐ完全一致。酶切分析证实了它们应有的酶切位点。随后对这两个片段进行了克隆和序列测定,并与国外株的序列进行了比较。结果证明本实验扩增的两个ｃＤＮＡ序列与Ａｌｆｏｒｔ株和Ｂｒｅｓｉａ株的同源性分别是９５．２％和９８．５％。