蛇足石杉内生真菌产黄青霉菌MT-40中xanthocillin类似物生物合成基因簇的挖掘及鉴定

Xanthocillin具有显著的抗菌活性,结构中含有独特的异腈基。本文通过对蛇足石杉(Huperzia serrata)内生真菌产黄青霉菌(Penicillium chrysogenum)MT-40基因组的测序分析,利用本地BLAST等生物信息学分析工具挖掘具有合成xanthocillin类似物潜力的基因簇,结合米曲霉(Aspergillus oryzae)NSAR1异源表达技术实现基因簇中关键基因的功能鉴定。结果成功从内生真菌P.chrysogenum MT-40中发现一个合成xanthocillin类似物的生物合成基因簇(命名为for),for基因簇中的关键生物合成基因forB编码的异腈基合成酶可以催化合成2-formamido-3-(4-hydroxyphenyl)acrylic acid,基因forG编码的P450酶可以催化2-formamido-3-(4-hydroxyphenyl)acrylic acid的二聚化生成xanthocillin类似物N,N′-(1,4-bis(4-hydroxyphenyl)buta-1,3-diene-2,3-diyl)diformamide。本文研究结果为进一步从真菌中发现xanthocillin类似物提供参考。     

单增李斯特菌毒力因子溶血素关键氨基酸位点在感染过程中的作用研究

【目的】探究单增李斯特菌溶血素O (listeriolysin O, LLO)中D3区域β8折叠片上第253位氨基酸(谷氨酰胺,Q)和第254位氨基酸(异亮氨酸,I)对单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)感染生物学功能的影响。【方法】构建LLO_Q253A和LLO_I254A突变蛋白的原核表达菌株,以及利用同源重组方法构建hly_Q253A和hly_I254A突变株;通过表达纯化突变蛋白,测定溶血活性;比较LLO第253位Q和第254位I均突变成丙氨酸(A)后,对细菌体外生长能力、黏附侵袭、胞内迁移和增殖能力的影响。【结果】相应位点突变后,LLO蛋白均能够正常表达。在pH 6.5条件下,所有突变蛋白和突变株的溶血活性丧失。然而,在pH 5.5条件下,LLO_I254A和hly_I254A恢复了溶血活性。与野生株相比,突变株的体外生长、黏附能力和胞内增殖能力均无明显差异;突变株的侵袭能力和胞间迁移能力显著低于野生株。【结论】本研究证实第253位Q和第254位I均突变成A后,单增李斯特菌在pH 6.5条件下丧失溶血活性,并降低了感染宿主细胞的能力,但具体机制还有待进一步探索。本研究为深入探究LLO结构对单增李斯特菌生物学功能的影响奠定基础,对单增李斯特菌点突变株的构建具有一定参考意义。     

低水平乙型肝炎表面抗原的检测及其临床价值评估

我们采用具有世界卫生组织( WHO) 溯源性的标准血清建立浓度标准曲线, 评估微粒子酶免疫分析法(MEIA) 和酶联免疫吸附试验( ELISA) 的检测灵敏度, 并对97 例经确认为低水平乙型肝炎表面抗原( HBsAg)的阳性结果进行检测和比对分析; 同时综合评估低水平HBsAg 患者的临床各项指标, 探究低水平HBsAg 检测的临床意义。根据MEIA、ELISA 的S/CO 值分析, 2 种方法的检测灵敏度分别为0. 095 IU/ml 和0. 378 IU/ml;ELISA 对97 例低水平HBsAg 的检出率仅为45. 4% ( 44 /97) ; 在97 例低水平HBsAg 患者中, HBV DNA≥1 ×103 拷贝/ml 占17. 5% ( 17/97) , 肝功能异常率占38. 1% ( 37 /97) , 其中明确诊断为乙型肝炎相关疾病的19 例患者中, 肝硬化占57. 9% ( 11 /19) 。因此灵敏度高、特异性好的方法有助于低水平HBsAg 的检出, 有利于对这些人群的诊断和治疗。部分低水平HBsAg 患者往往伴随病毒复制及肝功能的慢性损伤, 预后不良, 应引起临床的高度重视和关注。